南文金，黃健強(qiáng)，胡鴻惠，吳靜波，龔中貴，彭國良，于文濤

（1.韶關(guān)學(xué)院 動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室,廣東 韶關(guān)512005；2.廣東省粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同中心,廣東 韶關(guān)512005；3.韶關(guān)市動(dòng)物衛(wèi)生防疫監(jiān)督所,廣東韶關(guān)512026）

豬O型口蹄疫母源抗體的變化規(guī)律及應(yīng)用

南文金1，2，黃健強(qiáng)1，2，胡鴻惠1，2，吳靜波1，2，龔中貴2，3，彭國良2，于文濤1，2

（1.韶關(guān)學(xué)院 動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室,廣東 韶關(guān)512005；2.廣東省粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同中心,廣東 韶關(guān)512005；3.韶關(guān)市動(dòng)物衛(wèi)生防疫監(jiān)督所,廣東韶關(guān)512026）

摘要：O型口蹄疫是豬場疫病防控的重點(diǎn)之一.對(duì)豬群進(jìn)行科學(xué)免疫是豬場防控O型口蹄疫病毒感染的重要途徑,為確定某豬場仔豬O型口蹄疫的首免時(shí)間,以該場經(jīng)O型口蹄疫滅活疫苗免疫的母豬所產(chǎn)的仔豬為研究對(duì)象,利用口蹄疫O型正向間接血凝抗體檢測試劑盒對(duì)不同日齡段仔豬群母源抗體進(jìn)行檢測.結(jié)果表明,37～44日齡時(shí),仔豬的母源抗體效價(jià)合格率為70%；45～51日齡時(shí),仔豬的母源抗體效價(jià)迅速下降,合格率僅為40%左右.檢測結(jié)果說明該豬場仔豬O型口蹄疫首次免疫最佳時(shí)間在45～50日齡比較適宜.

關(guān)鍵詞：仔豬；O型口蹄疫；母源抗體

豬口蹄疫（Food-and-Mouth,FMD）是由口蹄疫病毒（Food-and-Mouth Virus,FMDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性高度傳染性疫病,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須通報(bào)的動(dòng)物疫病,我國將其列為一類動(dòng)物傳染?。?］.口蹄疫血清型復(fù)雜,目前發(fā)現(xiàn)的有7個(gè)血清型.根據(jù)近幾年相關(guān)報(bào)道及農(nóng)業(yè)部疫情通報(bào),我國豬口蹄疫流行還以O(shè)型為主,偶有A型豬口蹄疫發(fā)生［2］.

口蹄疫病毒主要傳染途徑是直接接觸傳播和氣源性傳播.直接接觸帶毒的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品、運(yùn)輸車輛等都可以引起疫情傳播,本病同時(shí)也可以發(fā)生遠(yuǎn)距離氣源性傳播,隨口鼻呼出的氣溶膠病毒可隨風(fēng)傳播數(shù)百公里［3］.豬口蹄疫病毒母源抗體能保護(hù)仔豬早期免遭病原感染,但隨著仔豬日齡增加,母源抗體水平會(huì)不斷降低,需要及時(shí)通過接種疫苗提高抗體水平.首免時(shí)間對(duì)疫苗免疫成敗有重要影響,若首次免疫時(shí)間過早,可能受到母源抗體的干擾導(dǎo)致免疫失敗；若免疫時(shí)間過晚,母源抗體水平過低,免疫空白期較長,增加了感染和發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［4］.本試驗(yàn)通過正向間接血凝試驗(yàn)試驗(yàn)對(duì)某豬場不同日齡仔豬的O型口蹄疫母源抗體水平檢測,通過母源抗體消長規(guī)律確定最佳首免時(shí)間,為豬場提高O型口蹄疫苗免疫效果提供科學(xué)依據(jù).

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1血清來源

試驗(yàn)豬的血樣采集自粵北某規(guī)?；B(yǎng)豬場,該場采用分區(qū)飼養(yǎng),全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式.

1.1.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑

臺(tái)式高速離心機(jī)（美國THERMO）,微量移液器（芬蘭百德公司生產(chǎn)）；96孔110°V型血凝板；口蹄疫O型間接血凝抗體檢測試劑盒（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,批號(hào)∶2014120504）.

1.2方法

1.2.1抗體檢測

根據(jù)該場生產(chǎn)流程,選擇沒有接種O型口蹄疫滅活疫苗,按生產(chǎn)批次飼養(yǎng)在不同豬舍的出生6～8、15～17、20～23天產(chǎn)房仔豬,出生28～34、37～44、45～51、52～60天保育舍仔豬和出生61～69、70～82天育肥前期豬,每個(gè)日齡段隨機(jī)選擇20頭仔豬,前腔靜脈采血5 mL左右,實(shí)驗(yàn)室離心制備血清,按口蹄疫O型間接血凝抗體檢測試劑盒操作說明進(jìn)行母源抗體檢測.另外分別采集了20頭豬出生83～90天,經(jīng)O型口蹄疫滅活疫苗首次免疫后15天的的生長育肥豬和產(chǎn)前1個(gè)月的懷孕母豬血液樣本進(jìn)行了O型口蹄疫抗體水平檢測.

1.2.2抗體水平判定標(biāo)準(zhǔn)

按試劑盒說明,以呈現(xiàn)“＋＋”血凝反應(yīng)的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價(jià).當(dāng)陽性對(duì)照血清抗體效價(jià)≥1∶256、陰性對(duì)照血清抗體效價(jià)≤1∶16、稀釋液對(duì)照孔無自凝現(xiàn)象時(shí),試驗(yàn)成立.豬口蹄疫O型抗體效價(jià)≥1∶128為免疫合格.

2　結(jié)果

2.1豬O型口蹄疫抗體效價(jià)檢測結(jié)果

表1的檢測結(jié)果顯示,出生6～8天仔豬O型口蹄疫母源抗體效價(jià)合格率為80%；出生15～17、20～22、28～34天的仔豬O型口蹄疫母源抗體效價(jià)合格率均為90%；出生37～44日齡段仔豬的O型口蹄疫母源抗體水平開始下降,但合格率仍能達(dá)到70%；出生45天之后的仔豬O型口蹄疫母源抗體迅速下降,在采集的出生45～51、52～60、65～69、70～82天的仔豬樣品中,O型口蹄疫母源抗體效價(jià)合格率在0%～40%.隨機(jī)采集的產(chǎn)前1個(gè)月母豬O型口蹄疫抗體效價(jià)合格率達(dá)到100%,其中19頭母豬抗體效價(jià)≥1：256,僅一頭為1：128（文中為列數(shù)據(jù)）.經(jīng)O型口蹄疫滅活疫苗首次免疫后15天的的生長育肥豬抗體效價(jià)合格率為40%.

表1　不同日齡豬O型口蹄疫抗體效價(jià)檢測結(jié)果

2.2仔豬O型口蹄疫母源抗體變化規(guī)律

未進(jìn)行豬O型口蹄疫疫苗免疫的仔豬母源抗體效價(jià)變化規(guī)律（圖1）顯示,該場仔豬O型口蹄疫母源抗體在2周齡左右達(dá)到最高水平,高水平母源抗體可以維持到5周齡；采集的出生37～44天仔豬群母源抗體水平開始下降,但抗體效價(jià)合格率仍然可以達(dá)到70%；出生45～51天,即約7周齡左右的仔豬群仔豬母源抗體下降迅速,抗體效價(jià)合理率為40%；7周齡之后仔豬母源抗體水平很低,在分階段采集的3個(gè)不同日齡段的豬群中,僅在出生65～69日齡的豬群中檢測到20%的樣品為抗體水平合格.

圖1　豬O型口蹄疫母原抗體消長規(guī)律

3　討論

規(guī)模養(yǎng)豬是以群體免疫而不是個(gè)體免疫的理念進(jìn)行疫苗免疫,在進(jìn)行抗體監(jiān)測時(shí)的抽樣要根據(jù)豬場具體生產(chǎn)模式、檢測目的設(shè)計(jì)合理的采樣方案,獲得的檢測數(shù)據(jù)代表一個(gè)群體的免疫狀態(tài).試驗(yàn)豬場是按“周”為生產(chǎn)周期設(shè)計(jì)豬欄（舍）數(shù)量,嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出和分區(qū)飼養(yǎng),豬群轉(zhuǎn)入下一個(gè)生產(chǎn)區(qū)時(shí)也是按同一欄或同一棟（間）豬轉(zhuǎn)入相應(yīng)的欄舍飼養(yǎng),豬的疫苗免疫也是按欄或棟（間）為單位進(jìn)行免疫,因此,本研究采樣方案設(shè)計(jì)是按豬場實(shí)際生產(chǎn)流程,采集的每一日齡階段樣品即為免疫時(shí)間為同一天的同一批豬,所以出生時(shí)間有相應(yīng)的跨度,按此采樣方式檢測的數(shù)據(jù)代表了該批次豬群整體抗體水平和變化規(guī)律,得到的檢測結(jié)果更符合規(guī)模化豬場生產(chǎn)流程和免疫接種操作方案,對(duì)免疫程序的制定有更現(xiàn)實(shí)的指導(dǎo)意義.

豬在胎兒時(shí)期不能從母體獲得母源抗體,新生仔豬通過吮吸初乳經(jīng)消化道吸收獲得母源抗體,母源抗體保護(hù)初生仔豬免受病原侵襲,提高仔豬抗病力和成活率方面發(fā)揮重要作用.本研究O型口蹄疫抗體水平檢測結(jié)果表明該場絕大多數(shù)母豬O型口蹄疫抗體效價(jià)均≥1∶256,這就為仔豬獲得較高水平的母源抗體提供了保障.但根據(jù)從表1數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可知,在不同日齡階段的哺乳仔豬群體中母源抗體合格率最高為90%,并沒有達(dá)到100%抗體合格率.在呂立新等利用液相阻斷ELISA對(duì)仔豬O型口蹄疫母源抗體消長規(guī)律的研究中,也有部分哺乳期仔豬母源抗體水平較低,不同日齡仔豬母源抗體最高保護(hù)率為80%［5］.出現(xiàn)個(gè)別哺乳仔豬母源抗體較低或呈陰分析最主要原因可能是出生2小時(shí)內(nèi)沒有吮吸到足夠的初乳.

根據(jù)圖1結(jié)果可知,隨著仔豬日齡增加,母源抗體效價(jià)維持一段時(shí)間后開始下降.該場仔豬出生2周左右后母源抗體水平達(dá)到最高,且維持在一個(gè)較高水平至大約5周齡.在6～7周齡間,豬O型口蹄疫母源抗體的效價(jià)開始下降到70%.在約7周齡之后采集的各個(gè)階段的樣品母源抗體效價(jià)迅速下降,抗體合格率都比較低或全部樣品為陰性,該場O型口蹄疫母源抗體消長規(guī)律和呂立新的報(bào)道結(jié)果相一致［5］,科學(xué)的首免日齡應(yīng)該選擇在45～50日齡進(jìn)行.余瓊等的報(bào)道中［6］,21日齡仔豬O型口蹄疫母源抗體合格率為66.67%,28日齡時(shí)有三分之一的仔豬母源抗體水平還能提供保護(hù),35日齡仔豬母源抗體水平保護(hù)率僅有6.6%,顯然其監(jiān)測的豬場仔豬O型口蹄疫母源抗體下降速度比較快,首免日齡應(yīng)該選擇在25日齡左右.

首免時(shí)間合理對(duì)豬口蹄疫免疫免疫成敗至關(guān)重要,但免疫效果研究表明豬口蹄疫疫苗僅僅一次免疫對(duì)豬群的保護(hù)率較低,必須進(jìn)行加強(qiáng)免疫才能使豬群整體抗體水平較高［6-8］.本試驗(yàn)采集了O型口蹄疫滅活疫苗首免后15天的生長育肥豬血液樣品20份（出生83～90天豬群）,根據(jù)該場豬口蹄疫母源抗體消長規(guī)律可知此批生長育肥豬進(jìn)行O型口蹄疫首免時(shí)母源抗體效價(jià)已經(jīng)很低,但首免后15天抗體效價(jià)合格率僅為40%,.在母源抗體水平極低情況下接種疫苗,首免后15天抗體水平仍然很低,因此在口蹄疫疫苗免疫必須在首免疫后3～4周加強(qiáng)免疫一次.

母源抗體在保護(hù)仔豬早期免遭病原感染的同時(shí)又通過清除抗原物質(zhì)、中和弱毒疫苗抗原和對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)特異性抗原位點(diǎn)的封閉而對(duì)疫苗免疫發(fā)揮干擾作用［9］.母源抗體消長規(guī)律和母豬群抗體水平以及豬群健康狀態(tài)密切相關(guān),針對(duì)不同豬場開展的口蹄疫母源抗體消長規(guī)律研究得到的結(jié)果不盡相同,根據(jù)相關(guān)報(bào)道［5-6,10］,不同豬場O型口蹄疫最佳首免日齡不同,最早的有21日齡首免,最晚的有50日齡進(jìn)行首免,因此在生產(chǎn)中豬場要根據(jù)口蹄疫O型母源抗體水平?jīng)Q定最佳首免疫日齡.

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（責(zé)任編輯∶閆文龍）

中圖分類號(hào)：Q95-331

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-5348（2015）10-0049-07

［收稿日期］2015-06-26

［基金項(xiàng)目］韶關(guān)市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013CX/N09）.

［作者簡介］南文金（1981-）,男,河南靈寶人,韶關(guān)學(xué)院動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室助理研究員,碩士；研究方向∶動(dòng)物疫病檢測技術(shù)與防控技術(shù).

The Change Regularlty and APPllcatlon of
Sw lne TyPe-O Foot-and-m outh M aternal Antlbody

NANWen-jin1,2,HUANG Jian-qiang1,2,HU Hong-hui1,2,WU Jing-bo2, GONG Zhong-gui3,PENG Guo-1iang2,YUWen-tao1,2（1.Laboratory of Anima1Disease,Shaoguan University,Shaoguan 512005,Guangdong,China；
2.North Guangdong Co11aborative Innovation and Deve1oPment Center of Pig Farming and Disease Contro1, Shaoguan 512005,Guangdong,China；3.Shaoguan Institute of Anima1Hea1th SuPervision, Shaoguan 512026,Guangdong,China）

Abstract:The tyPe-O Foot-and-mouth（FMD）is one of the imPortant diseaseswhich needed to be contro11ed. Scientific immunization is themain way to contro1and Prevention Pig PoPu1ation infected with the tyPe-O Footand-mouth virus（FMDV）.In order to determine the date of first immunization of FMD vaccine in a Pig farm, some b1ood samP1eswere co11ected from different days-o1d Pig1etswhich born from sows immunization of inactivated tyPe-O FMDV vaccine.The samP1esmaterna1antibody was tested by tyPe-O FMD indirect hemagg1utination antibody detection reagent kit.The resu1ts showed that the Pig1ets between 37 to 44 days,which qua1ified rate ofmaterna1antibody 1eve1sti11can reach 70%,but between 45 to 51 days o1d,thematerna1antibody titer Percent of Pass raPid1y decrease to 40%.There data revea1ed that tyPe-O FMDV vaccine first immune date of Pig1ets between 45 to 50 days o1d can be use in the Pig farm.

Key words∶Pig1et；tyPe-O Foot-and-mouth；materna1antibody