王 文,王忠權(quán),寸金全,李慶龍,文亦芾,姚新榮
(1.云南省種羊繁育推廣中心,云南 尋甸 655200;2.云南省尋甸縣功山鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)科,云南 尋甸 655208;3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,云南 昆明 650000)
骨軟癥和佝僂病是幼畜鈣磷代謝破壞,骨組織形成破壞,骨骼變形為特征的慢性疾病,是羔羊常發(fā)病之一[1],本場(chǎng)2012-2014年曾連續(xù)3年發(fā)生該病,對(duì)生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)造成一定損失。通過(guò)對(duì)初生羔羊骨質(zhì)鈣磷代謝疾病進(jìn)行血清檢測(cè),結(jié)合臨床癥狀和治療效果,研究分析血清酶、蛋白質(zhì)和離子的活性及含量,為提高山羊繁殖效率和生產(chǎn)效益提供理論和實(shí)踐依據(jù)。
血樣采自出生后3~6 d患病羔羊,臨床癥狀:精神委糜,食欲減退,嚴(yán)重者食欲廢絕,體溫39.0℃~39.7℃,喜臥,四肢無(wú)力,關(guān)節(jié)腫大、變形,行走蹣跚、步態(tài)不穩(wěn),容易摔跤,個(gè)別前后肢呈O型或X型彎曲,嚴(yán)重者站立時(shí)四肢分開(kāi)、拱腰或無(wú)法站立。部分伴隨呼吸急促、喘氣、肌肉抽搐、異食、腹瀉等癥狀。絕大多數(shù)為同胞所產(chǎn)羔羊全部發(fā)病,且癥狀完全相同,后期病羔無(wú)力吃奶,昏迷臥地,衰竭而亡。血樣采自5個(gè)飼養(yǎng)組。
發(fā)病羔羊血樣送云南農(nóng)業(yè)大學(xué)疫病檢測(cè)中心檢測(cè),治療后血樣送昆明某醫(yī)療檢測(cè)中心檢測(cè)。
肝腎功能檢測(cè)項(xiàng)目:谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(ALP)、г-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(T-BIL)、直接膽紅素(D-BIL)。
血清離子檢測(cè)項(xiàng)目:鎂(Mg)、磷(P)、鈣(Ca)。
2.1 患病羔羊血清檢測(cè) 轉(zhuǎn)氨酶存在于高等動(dòng)物肝細(xì)胞中,主要種類(lèi)為GPT和GOT,其活性在臨床上作為判斷肝功能正常與否的重要指標(biāo)[2]。與健康山羊參數(shù)值及其變異范圍相比較(表1),GPT和GOT均在正常異動(dòng)范圍之內(nèi),且二者之比值在0.062~0.163之間,表明患病羔羊肝功能正常。
ALP在臨床醫(yī)學(xué)上主要用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病的診斷,尤其是黃疸的鑒別診斷[3]。表1顯示,患病羔羊ALP活性為健康山羊的2~8倍,顯著高于正常水平。文獻(xiàn)報(bào)道,ALP活性升高有兩種情況:一為生理性增高,即動(dòng)物在生理性的骨骼發(fā)育期(兒童或幼畜期),ALP活力比成年高1~2倍;二為病理性升高,因患有骨骼疾病如佝僂病、軟骨癥,或肝膽疾病如肝外膽道阻塞、黃疸性肝炎等[2-4]。檢測(cè)結(jié)果表明,僅第4組ALP活性比正常值高出1倍,其他4組均高出正常值的3倍以上,因此,ALP活力升高可能屬于病理反應(yīng)??偰懠t素(T-BIL)是動(dòng)物膽汁中的主要色素,臨床上常作為判定黃疸的重要依據(jù),也是肝功能的重要指標(biāo)[4-5]。檢測(cè)結(jié)果顯示,T-BIL均為0.00,表明肝臟無(wú)炎癥病變[6]。因此,可認(rèn)為ALP活性的升高則與骨骼代謝疾病有關(guān)。
γ-GT是動(dòng)物體內(nèi)谷胱甘肽代謝的一種相關(guān)酶,是肝膽疾病的診斷指標(biāo)之一。健康人的γ-GT活性為50 U/L左右,健康山羊的血清γ-GT參數(shù)無(wú)從查證,但據(jù)資料報(bào)道,阻塞性黃疸、原發(fā)性肝癌等疾病可使γ-GT活性大幅升高,表1γ-GT活性數(shù)據(jù)分析,應(yīng)屬正常變異范圍[6]。
表1 發(fā)病羔羊血清酶、蛋白質(zhì)和離子檢測(cè)結(jié)果
Mg是動(dòng)物體內(nèi)的重要陽(yáng)離子,其中約70%存在于骨骼和牙齒之中,25%存在于軟組織的細(xì)胞中[7],缺Mg癥狀主要表現(xiàn)在初期食欲下降、行動(dòng)遲緩、嗜睡,隨之走步僵硬、步態(tài)搖晃、緊張易怒、肌肉顫抖,嚴(yán)重的造成癱瘓和痙攣,以至死亡[8]。表1顯示,血清中Mg的含量為0.03~0.09 mmol/L,約為健康山羊的1/20,顯著低于正常水平。
Ca和P是羊體內(nèi)含量最多的礦物質(zhì),占礦物質(zhì)總量60%~70%,主要存在于骨骼和牙齒中。羊日糧中Ca和P適宜比為1.5∶1~2∶1[9],Ca含量不足,相對(duì)較高的P會(huì)抑制Ca吸收,從而加劇家畜缺Ca[10]。高P可直接降低血Ca濃度并抑制甲狀旁腺素(PTH)介導(dǎo)的血Ca升高,引起甲狀旁腺功能亢進(jìn)及高轉(zhuǎn)運(yùn)型骨病,阻滯PTH及維生素D3在骨中的協(xié)同作用而導(dǎo)致Ca、P代謝失常,加重骨病[11]。表1顯示,發(fā)病羔羊血清中P含量為3.98~14.38 mmol/L,Ca含量為2.08~2.53 mmol/L,Ca∶P=1∶1.55到1∶5.89。血清Ca含量正常,但P含量顯著高于正常水平,Ca、P比例嚴(yán)重失調(diào),代謝紊亂。
2.2 治療后羔羊血清檢測(cè) 按照骨軟癥和佝僂病進(jìn)行治療,補(bǔ)Ca、Mg、維生素A、D、E,硒(Se)以及對(duì)癥治療之后,羔羊血清檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。ALP活性雖然全部高于健康山羊參數(shù)上限,由于羔羊骨組織代謝旺盛,血清ALP活性在一定范圍內(nèi)升高屬正?,F(xiàn)象。Ca、Mg離子含量正常,但由于設(shè)備原因不能檢出血清P含量,治療前后無(wú)法對(duì)比,深為遺憾。
通過(guò)發(fā)病羔羊臨床癥狀、剖檢結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),綜合分析認(rèn)為:發(fā)病羔羊?yàn)槟阁w懷孕中后期補(bǔ)飼單一,營(yíng)養(yǎng)不平衡,導(dǎo)致母體和羔羊維生素、Mg等微量元素缺乏,Ca、P代謝障礙所引發(fā)的羔羊骨軟癥。以骨軟癥確定治療方案,治療原則:補(bǔ)Ca、Mg、維生素A、D、E,Se等。用藥:靜脈注射葡萄糖酸鈣、維生素C等,肌肉注射硫酸鎂、維生素A、D、E,亞硒酸鈉維生素E,對(duì)癥使用其他藥物。治療后癥狀消失,效果明顯,特別是早期發(fā)現(xiàn),治愈率達(dá)95%以上。因此,就ATP、Ca、P、Mg 4項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行討論。
表2 按骨軟癥治療后羔羊血清酶、蛋白質(zhì)和離子檢測(cè)結(jié)果
3.1 血清ALP活性 ALP活性反映成骨細(xì)胞活性、骨生成狀況和Ca、P代謝等生化指標(biāo)。在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究中,血清ALP活性常作為重要的生化檢測(cè)指標(biāo)協(xié)助評(píng)定日糧Ca、P水平的適宜程度[4]。動(dòng)物疾病診斷上,國(guó)內(nèi)外研究一致認(rèn)為骨型ALP是反映骨質(zhì)改變?nèi)^(guò)程最正確的指標(biāo),其特異性、靈敏度及準(zhǔn)確性?xún)?yōu)于其他檢測(cè)[4]。血清ALP活性升高成為診斷骨質(zhì)疾病的重要臨床病理學(xué)依據(jù)[1]。在骨代謝旺盛時(shí)期,成骨細(xì)胞活躍,ALP分泌量增加,血清ALP活性上升,因此,未成熟動(dòng)物的血清ALP活性高于成年動(dòng)物,動(dòng)物年齡越小,骨骼生長(zhǎng)越旺盛,血清ALP活性越高。
血清ALP活性升高與日糧中維生素K、維生素D水平有關(guān),其缺乏會(huì)導(dǎo)致血清ALP活性升高[12];日糧Ca、P水平對(duì)血清ALP活性有顯著影響。病理狀態(tài)下,骨骼代謝障礙,ALP活性增加。綜合上述,除肝臟疾病外,凡導(dǎo)致血清ALP上升的因素均可引起骨軟癥和佝僂病的發(fā)生。
山羊羔羊正常ALP活性參數(shù)無(wú)從查證,資料報(bào)道,初生幼畜血清ALP活性是成年家畜的2~3倍[2]。據(jù)此分析,4組羔羊ALP活性為成年山羊的3倍以上,所以,初步認(rèn)為羔羊ALP活性高出其正常生理范圍,此即為骨軟癥的病理依據(jù)。
3.2 血清離子含量 動(dòng)物血清Ca、P比為2∶1[10],如飼料Ca、P比例失調(diào),導(dǎo)致Ca、P代謝障礙,是骨軟癥的重要誘因之一。精飼料富含P,粗飼料富含Ca,偏飼即會(huì)引起某種成分不足或過(guò)多,母羊妊娠后期、哺乳期或初生羔羊,機(jī)體對(duì)Ca、P的需求量增大,若日糧供應(yīng)不足,最易引起骨軟癥[7]。母乳維生素D不足,可造成羔羊后天性骨骼發(fā)育不全[12]。
低血Mg可引起病畜抽搐,治療不及時(shí)會(huì)導(dǎo)致死亡[7],乳汁中Mg不足,導(dǎo)致發(fā)病羔羊血清Mg含量低,推斷其骨組織Mg含量顯著低于正常水平。
發(fā)病羔羊出現(xiàn)嚴(yán)重骨質(zhì)軟化和關(guān)節(jié)變形,而血清Ca仍然正常,可能與血液Ca的代謝和調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān)。當(dāng)動(dòng)物由飼料中吸收的Ca、P不能滿(mǎn)足其代謝需要時(shí),只要調(diào)節(jié)機(jī)能正常,血清中的Ca離子濃度仍能維持在正常范圍內(nèi),因?yàn)榇藭r(shí)機(jī)體動(dòng)員骨Ca來(lái)維持血Ca濃度的正常[7]。所以,有時(shí)血清Ca、P正常,而骨組織Ca、P的動(dòng)用和溶骨作用,會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松軟化、關(guān)節(jié)腫大變形,發(fā)生骨軟癥。因此,骨軟癥的發(fā)生,多種因素交互作用,相互影響,互為因果,必須通過(guò)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和治療效果綜合判斷,全面分析。
3.3 發(fā)生規(guī)律 山羊繁殖為兩年3胎,平均每胎2只羔羊,成年母羊幾乎全年處于懷孕或哺乳期,營(yíng)養(yǎng)消耗極大,盡管日糧營(yíng)養(yǎng)較高,但養(yǎng)分不平衡卻難以避免。大多數(shù)同胞羔羊同時(shí)發(fā)病,證明了羔羊與母體營(yíng)養(yǎng)之間的聯(lián)系。此外,發(fā)病均在青綠飼料貧乏季節(jié),人工補(bǔ)飼存在種類(lèi)單一、營(yíng)養(yǎng)不平衡或礦物質(zhì)維生素不足,母體營(yíng)養(yǎng)不平衡導(dǎo)致乳汁營(yíng)養(yǎng)不全,母乳作為初生羔羊攝取營(yíng)養(yǎng)的惟一來(lái)源,影響羔羊血液成分的變化和Ca、P代謝。
羔羊骨軟癥血清檢測(cè)的主要特征為:ALP活性顯著升高;Ca、P比例失調(diào);Mg離子含量下降??莶菁竟?jié)補(bǔ)飼種類(lèi)單一、營(yíng)養(yǎng)不平衡、維生素添加劑效價(jià)低等是導(dǎo)致羔羊骨軟癥的主要原因。
[1]俞乃勝.山羊疾病學(xué)[M].昆明:云南人民出版社,2007.
[2]盧宗藩.家畜及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生理生化指標(biāo)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1983:11.
[3]王秋穎.堿性磷酸酶特性及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2011,38(1):157-160.
[4]王石瑩,閆素梅.堿性磷酸酶在動(dòng)物骨骼代謝中的研究進(jìn)展[J].飼料博覽,2009,2:14-17.
[5] 陳杰.家畜生理學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2003:6.
[6]李麗,劉文亮,張彩寧,等.54例病理性黃疸患兒γ-谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(15):1900-1901.
[7] 周順伍.動(dòng)物生物化學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2008:4.
[8]楊冬梅,薛立群,李俊年,等.鎂的生物功能和草食動(dòng)物鎂缺癥綜述[J].吉首大學(xué)學(xué)報(bào),2008,29(6):101-103.
[9]岳文斌.羊場(chǎng)畜牧師手冊(cè)[M].北京:金盾出版社,2008.
[10]李莉,俞紅賢,沈明華.不同發(fā)育期牦牛血清鈣、無(wú)機(jī)磷和堿性磷酸酶的測(cè)定及分析[J].青海大學(xué)學(xué)報(bào),2007,25(1):70-72.
[11]郭虹,余開(kāi)惠,王柏青,等.血清骨鈣素在高轉(zhuǎn)運(yùn)型骨病診斷中的意義[J].臨床軍醫(yī)雜志,2007,30(5):647-649.
[12]王松艷,黎海芪,楊錫強(qiáng),等.維生素D和鈣缺乏對(duì)中雞骨骼發(fā)育的影響[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1999,24(2):141-145.