瞿昊宇，馮楚雄，謝夢(mèng)洲*，朱建平，孫毅中，崔培梧，肖作為（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.新化綠源農(nóng)林科技有限公司，湖南 婁底 417000；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410208；5.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

不同炮制方法對(duì)黃精多糖含量的影響

瞿昊宇1，5，馮楚雄1,2，5，謝夢(mèng)洲1,2，5*，朱建平1,2，5，孫毅中3，5，崔培梧4，5，肖作為4，5
（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.新化綠源農(nóng)林科技有限公司，湖南 婁底 417000；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,湖南 長(zhǎng)沙 410208；5.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的探究湖南本土種植及加工的雞頭黃精、多花黃精采用不同炮制方法對(duì)黃精多糖含量的影響。方法超聲提取法提取多糖，用 Sevage法除去蛋白，采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量。結(jié)果雞頭黃精經(jīng)二蒸二曬、四蒸四曬、七蒸七曬、九蒸九曬炮制后，多糖含量分別為7.973%、3.584%、2.845%、2.194%；多花黃精經(jīng)二蒸二曬、四蒸四曬、五蒸五曬、七蒸七曬炮制后，多糖含量分別為9.602%、3.185%、2.572%、2.043%；精密度良好（RSD=0.274%）、平均回收率99.29%、試驗(yàn)在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好（RSD=1.36%）。結(jié)論炮制過(guò)程蒸曬次數(shù)越多，黃精多糖含量越少。

黃精；多花黃精；黃精多糖；炮制；苯酚-硫酸法；酶標(biāo)儀

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、黃精Polygonatum sibiricum Red.、多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”、“雞頭黃精”、“姜形黃精”，姜形黃精的原植物為多花黃精，雞頭黃精的原植物為黃精，而大黃精 （又名碟形黃精）的原植物為滇黃精。黃精歸脾、肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾潤(rùn)肺，益腎的功效，常用于改善和治療脾胃虛弱，體倦乏力，口干食少，肺虛燥咳，精血不足，內(nèi)熱消渴等病癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃精具有抑菌、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老以及降糖降脂等作用[1-2]。其中，黃精多糖、黃精皂苷是黃精發(fā)揮藥理作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。不同的炮制工藝對(duì)黃精多糖的含量有一定影響，進(jìn)而影響黃精質(zhì)量的高低及臨床藥效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定黃精多糖含量，探討炮制工藝對(duì)黃精多糖的影響。

1 材料

1.1 儀器

FWl35型中草藥粉碎機(jī) （天津市泰斯特儀器有限公司），5810高速離心機(jī) （德國(guó)艾本德），HH-2水浴鍋（上海谷寧儀器有限公司），imark酶標(biāo)儀（美國(guó)伯樂(lè)），RE-52A旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠），KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑及藥物

黃精樣品8種（新化綠源農(nóng)林科技有限公司提供）：雞頭黃精炮制品（二蒸二曬、四蒸四曬，七蒸七曬、九蒸九曬），多花黃精炮制品（二蒸二曬、四蒸四曬，五蒸五曬、七蒸七曬）。葡萄糖，濃硫酸、5%苯酚水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）、正丁醇、氯仿、無(wú)水乙醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取葡萄糖對(duì)照品100 mg，置100 mL棕色量瓶中，加適量水溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得1 mg/mL葡萄糖對(duì)照品。

2.2 供試品溶液制備

準(zhǔn)確稱取黃精樣品各20.00 g，粉碎，分別加入100 mL蒸餾水浸泡 30 min。在100℃恒溫超聲90 min，過(guò)濾，重復(fù)提取1次，合并濾液，5 000 r/min離心10 min，取上清液，減壓濃縮至原體積的1/4（約100 mL），向濃縮液中加4倍量無(wú)水乙醇，靜置12 h后5 000 r/min離心10 min，棄上清，固體用少量水溶解，用 Sevage法 (正丁醇-氯仿為1:4)除蛋白，取上清液，濃縮至100 mL，得到黃精多糖提取液。黃精多糖提取液稀釋20倍，得黃精多糖供試品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

葡萄糖對(duì)照品溶液稀釋至 0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL，得各濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密量取各濃度葡萄糖溶液2 mL，分別置于加塞試管中，加入 5% 苯酚水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）1.0 mL混勻，隨后快速加入 5 mL濃硫酸，10 min后搖勻30 s，30℃水浴20 min，準(zhǔn)確吸取150 μL葡萄糖溶液至96孔板中，在490 nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比[3-4]，測(cè)定吸光度。以葡萄糖濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y= 2.875 7X+0.030 38（R=0.994），葡萄糖含量在0.02～0.1 mg/mL的濃度范圍線性良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液按“2.3”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果為0.085、0.085、0.086、0.085、0.085、0.085，RSD=0.274%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取同一黃精供試品溶液2 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色，分別在 0、10、20、30、40、50、60 min測(cè)定吸光度，結(jié)果測(cè)得吸光度分別為0.434、0.432、0.435、0.436、0.430、0.425、0.420，RSD=1.36%（n=7），表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定，提示測(cè)定過(guò)程需在60 min內(nèi)完成。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

精密量取含量為0.799 mg/mL的黃精多糖供試品溶液10 mL，加入100 mL容量瓶中定容，得濃度為0.077 9 mg/mL的黃精多糖溶液。精密量取上述溶液1 mL，平行5份，分別加入0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液 1 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定回收率。結(jié)果如表1所示，加樣回收率平均值為99.29%，RSD=2.88%（n=5），說(shuō)明該試驗(yàn)方法可行。

表1 樣品加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （n=5）

2.7 樣品測(cè)定

精密量取黃精多糖供試品2 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，重復(fù)3次。根據(jù)回歸方程求出黃精供試品多糖濃度C（mg/mL)。計(jì)算出樣品中的多糖含量M（%）。結(jié)果如表2、3所示。雞頭黃精經(jīng)二蒸二曬、四蒸四曬、七蒸七曬、九蒸九曬炮制后，多糖含量分別為7.973%、3.584%、2.845%、2.194%；多花黃精經(jīng)二蒸二曬、四蒸四曬、五蒸五曬、七蒸七曬炮制后，多糖含量分別為9.602%、3.185%、2.572%、2.043%。

表2 不同炮制方法的雞頭黃精的多糖含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=3）

表2 不同炮制方法的雞頭黃精的多糖含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=3）

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表3 不同炮制方法的多花黃精的多糖含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=3）

表3 不同炮制方法的多花黃精的多糖含量測(cè)定結(jié)果（±s，n=3）

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3 討論

黃精蒸制的目的,在唐代 《食療本草》有記載“蒸之,若生則刺人咽喉,曝使干,不爾朽壞”[5]，在《醫(yī)林篡要·藥性》中有詳細(xì)的論述：“生黃精,實(shí)有辛薟之味,戟人喉吻,惟蒸曬久,庶幾補(bǔ)養(yǎng)滋腎耳?！庇纱丝梢姡S精炮制的目的：一是消除其刺激咽喉的不良反應(yīng),二是增強(qiáng)其補(bǔ)益作用。黃精的炮制方法多達(dá)十余種,但以蒸煮法為主,如有單蒸、重蒸、九蒸九曝、加輔料蒸制等[6]。而歷史沿襲至清代以“九蒸九曝”的炮制方法為主流，在清代的多本本草及炮制專著中均有“九蒸九曬”方法的論述,如《本草從新》中記載“黃精去須,九蒸九曬用,每蒸一次,必半日方透”[7]?！兜门浔静荨分杏小跋磧羯澳?蒸曬九次”的記載[8]。2010年版《中國(guó)藥典》收入了黃精和酒黃精，黃精為除去雜質(zhì)，洗凈，略潤(rùn)，切厚片，干燥所得，酒黃精采用酒燉法或酒蒸法炮制所得[9]。

本實(shí)驗(yàn)中，同一產(chǎn)地（均產(chǎn)于湖南），2個(gè)品種的黃精的炮制后，隨著炮制的蒸曬次數(shù)增多，黃精多糖的含量逐漸減少，這與多個(gè)研究報(bào)道的結(jié)果一致[10-11]。采用酶標(biāo)儀測(cè)定黃精多糖含量，方法簡(jiǎn)便，取樣量少，重現(xiàn)性好。目前認(rèn)為，生品黃精對(duì)喉嚨的刺激作用是黏液質(zhì)引起的，黏液質(zhì)屬多糖類物質(zhì),黃精經(jīng)蒸制后多糖類含量降低，可能是黏液質(zhì)分解的結(jié)果。黃精生品中，小分子糖都為蔗糖和果糖[11]。有研究通過(guò)薄層色譜檢視，從黃精及其炮制品中確認(rèn)的小分子糖為葡萄糖、果糖和蔗糖[12]，黃精多糖由半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖和葡萄糖組成[13]。有研究表明，黃精炮制前后水浸出物平均增加29.03%（冷浸法）和24.62%（熱浸法），醇浸出物增加32.54%，總糖量比生品減少12.84% ，還原糖含量則增加82.00%，游離氨基酸由生品的4個(gè)增加到10個(gè)，5-羥甲基糠醛顯著增多[14-15]。

黃精成分豐富，具有藥理作用的為黃精多糖、黃精皂苷、氨基酸、各種微量元素。黃精的藥理作用并非單一組分的作用結(jié)果，而黃精多糖具體組成及結(jié)構(gòu)目前尚未研究清楚，黃精的藥理作用研究多集中在黃精多糖、黃精皂苷及炮制過(guò)程中明顯增多的5-羥甲基糠醛上。黃精炮制后其成分及浸出液含量的改變，既有炮制過(guò)程中發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的作用，也有加入輔料炮制促進(jìn)有效成分溶解的作用。目前黃精測(cè)定的指標(biāo)尚不明確，單一使用黃精多糖含量作為判斷其質(zhì)量高低也難以代表黃精的質(zhì)量。黃精的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需更加全面考慮多個(gè)因素，而黃精炮制后，補(bǔ)益作用增強(qiáng)，可能與組成成分改變（包括化學(xué)結(jié)構(gòu)改變、有效成分增多、各成分構(gòu)成比例改變）、成分溶出提高、氨基酸含量增多等有關(guān)。黃精炮制前后成分改變及其對(duì)藥理作用的影響需進(jìn)一步研究。綜上所述，炮制可使黃精多糖含量下降，炮制過(guò)程蒸曬次數(shù)越多，黃精多糖含量越少。

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（本文編輯 賀慧娥）

Effcet of Different Processing Methods on the Content of Polygahatous Polysaccharides

QU Haoyu1,5,FENG Chuxiong1,2,5,XIE Mengzhou1,2,5*,ZHU Jianping1,2,5,SUN Yizhong3,5CUI Peiwu4,5,XIAO Zuowei4,5
（1.Key Discipline of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China；2.Hunan Province Key Laboratory of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 417000,China；3. Xinhua Luyuan Agricultural Science and Technology Limited Company,Changsha,Hunan 410208,China;5.Hunan Engineering Research Center of Drug and Food Homology Functional Food,Changsha,Hunan 410208,China）

ObjectiveTo explore different processing methods on polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red. and Polygonatum cyrtonema Hua,which cultivated and processed in Hunan.MethodsThe polysaccharide was extracted by ultrasonic extraction and the protein was removed by Sevage's method.The content of polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method.ResultsThe polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red.with different times of steaming and drying processing methods were 7.973%,3.584%,2.845%,2.194%,and the polysaccharide content of Polygonatum cyrtonema Hua with different processing methods were 9.602%,3.185%,2.572%,2.043%;The precision was good (RSD= 0.274%);The average recovery rate was 99.29%;the test has good stability in 60min(RSD=1.36%).ConclusionThe content of polysaccharide was reduced with the more times of steaming and drying processing methods.

Polygonatum sibiricum Red.；Polygonatum cyrtonema Hua；polysaccharide；phenol-sulfuricacid method；microplate spectrophotometer

R283；R575.54

B

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.015

2015-11-25

湖南省教育廳創(chuàng)新平臺(tái)基金項(xiàng)目（12k083）；湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科開放基金項(xiàng)目（2014-27）。

瞿昊宇，男，助理實(shí)驗(yàn)師，從事中醫(yī)藥信息學(xué)，中醫(yī)藥膳學(xué)研究。

*謝夢(mèng)洲，女，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：xiemz@163.com。