郭薇，陳蘇寧，王博聞

（1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院中醫(yī)科、中西醫(yī)結(jié)合病房，沈陽110000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科教研室，沈陽110000）

通腑化瘀湯對術(shù)后腸梗阻大鼠小腸動(dòng)力及IL-6、IL-10的影響

郭薇1，陳蘇寧1，王博聞2

（1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院中醫(yī)科、中西醫(yī)結(jié)合病房，沈陽110000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科教研室，沈陽110000）

［目的］研究通腑化瘀湯對術(shù)后腸梗阻（POI）模型大鼠小腸動(dòng)力及血清白介素（IL）-6、IL-10的影響，探討中藥對促進(jìn)POI胃腸功能恢復(fù)的作用。［方法］實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、對照組和藥物組，手術(shù)建立大鼠POI模型。藥物組給予通腑化瘀湯灌胃，對照組給予等量的生理鹽水，空白組不予干預(yù)。術(shù)后24 h測定各指標(biāo)。［結(jié)果］與空白組相比，對照組的小腸推進(jìn)率顯著降低，血清IL-6水平顯著升高，血清IL-10也升高（P＜0.05）；與對照組相比，藥物組的小腸推進(jìn)率顯著升高，血清IL-6水平顯著降低，血清IL-10顯著升高（P＜0.05）；且小腸推進(jìn)率與血清IL-6濃度呈負(fù)相關(guān)，與血清IL-10濃度呈正相關(guān)。藥物組腸黏膜的病理評(píng)分也低于對照組（P＜0.05）。［結(jié)論］通腑化瘀湯可改善小腸動(dòng)力，降低促炎因子IL-6同時(shí)提高抗炎因子IL-10的表達(dá)，從而緩解POI，保護(hù)胃腸功能。

通腑化瘀湯；術(shù)后小腸動(dòng)力；IL-6；IL-10

術(shù)后腸梗阻（POI）是手術(shù)后胃腸運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性發(fā)生異常而形成的疾病，在中醫(yī)學(xué)屬“腸結(jié)”病范疇，多于外科手術(shù)（尤其腹部手術(shù)）后近期發(fā)生，表現(xiàn)為腹脹、惡心、嘔吐、不能耐受固體飲食，和/或排氣排便的延遲［1-2］。輕者可隨著術(shù)后功能的恢復(fù)逐漸自行緩解，重者甚至進(jìn)展成為麻痹性腸梗阻［3］。POI的發(fā)病減緩了患者康復(fù)，給其身心及經(jīng)濟(jì)方面均造成嚴(yán)重影響［4］。目前國內(nèi)外有大量致力于POI預(yù)防及治療的相關(guān)研究，試用各種策略來降低POI的發(fā)病，如手術(shù)方式改用腹腔鏡手術(shù)、局部麻醉；術(shù)后采用促進(jìn)外科手術(shù)后康復(fù)程序、口服阿片受體拮抗劑（愛維莫潘）、促動(dòng)力藥及通便藥等藥物治療、早期給予腸內(nèi)營養(yǎng)、有選擇地使用鼻飼等，但目前仍未出現(xiàn)公認(rèn)有效的治療手段可應(yīng)用于臨床［5］。

中醫(yī)學(xué)對于POI的治療具有顯著療效，通腑化瘀湯在臨床治療過程中可有效緩解患者相關(guān)癥狀，促進(jìn)術(shù)后胃腸功能恢復(fù)。本研究以大鼠為研究對象，以POI病理生理學(xué)發(fā)病機(jī)制中主要的炎癥反應(yīng)為靶點(diǎn)，深入探討IL-6、IL-10與術(shù)后小腸動(dòng)力的相關(guān)性，以便更好地為臨床POI的預(yù)防及治療提供有效手段。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年SPF級(jí)雄性SD大鼠45只，體質(zhì)量（200±20）g，由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK（遼）2010-0098。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物飼養(yǎng)及取材均遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和保護(hù)的相關(guān)規(guī)定。

1.1.3主要試劑大鼠白介素（IL）-6、IL-10酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，R&D Systems，上海商紅生物科技有限公司。

1.1.4主要儀器Bio-Tek ELX800光吸收酶標(biāo)儀（多功能）（美國寶特）；TGL-16G型高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；DK-S24型電熱恒溫水浴鍋（上海森信實(shí)驗(yàn)有限公司）；渦旋混合器、超聲波清洗機(jī)（天津奧特塞恩斯有限公司）；ZT-12M型生物組織自動(dòng)包埋機(jī)（泰維科技有限公司）；Microm HM340E型石蠟切片機(jī)（Thermo Scientific公司）；顯微鏡（型號(hào)Nikon E800；圖像采集軟件NIS-Elements F3.0）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購買后，按照中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分籠常規(guī)飼養(yǎng)1周，溫度控制在25℃，濕度控制在50%。按體質(zhì)量隨機(jī)（依照隨機(jī)數(shù)字表法）分為3組，即藥物組、對照組、空白組，每組15只。

1.2.2造模方法目前，國內(nèi)有關(guān)建造術(shù)后腸梗阻動(dòng)物模型的研究尚不確切。筆者查閱大量文獻(xiàn)，經(jīng)過相關(guān)預(yù)實(shí)驗(yàn)的研究觀察，決定參照國際上Kalff教授等人于1988年發(fā)表的建立術(shù)后腸梗阻模型的方法［6］，在其基礎(chǔ)上加以改進(jìn)和完善。給予藥物組和對照組共30只大鼠禁食不禁水24 h后行開腹手術(shù)，先用生理鹽水濕棉簽將小腸內(nèi)容物擠壓到盲腸內(nèi)，然后用生理鹽水濕棉球由回盲部小腸末端自下而上擦拭全部小腸腸管20 min，模擬手術(shù)中可能對小腸產(chǎn)生的刺激，以此誘導(dǎo)術(shù)后腸梗阻。

1.2.3給藥方法造模后，藥物組大鼠在腹部手術(shù)后6、16 h［7］分別給予通腑化瘀湯藥液0.8 mL（根據(jù)等效劑量比值表換算）灌胃，對照組給予等時(shí)等量生理鹽水灌胃，空白組不行手術(shù)。

相比于傳統(tǒng)火電廠、化學(xué)電廠而言，光伏發(fā)電系統(tǒng)不僅噪聲較小，而且對空氣、水和土壤污染非常小，易于保養(yǎng)，運(yùn)行期間能耗較少，但易受到當(dāng)?shù)靥鞖狻⒌乩砦恢玫扔绊憽?/p>

1.2.4觀察動(dòng)物術(shù)后腸梗阻情況觀察術(shù)后24 h［3］大鼠活動(dòng)及腹脹情況，剖腹取小腸前先肉眼觀察腸管組織紅腫、滲出的程度及范圍。

1.2.5動(dòng)物取材大鼠術(shù)后24 h麻醉取材，剖腹分離下腔靜脈，采血后離心（3 600 r/min，15 min）收集血清；取出全部小腸測量大鼠小腸推進(jìn)率，測量之后取一段近回盲部的小腸組織，用生理鹽水洗凈后放入多聚甲醛中固定。血清及小腸組織均放置于-80℃冰柜中保存?zhèn)溆么郎y。

1.2.6大鼠小腸推進(jìn)率的測定采用墨汁標(biāo)記測定法測定，麻醉前30 min先予大鼠墨汁0.1 mL灌胃，灌墨汁后將大鼠放回籠中自由活動(dòng)；取出腸管之后在無張力狀態(tài)下觀察測量：小腸推進(jìn)率=墨汁在腸管的推進(jìn)長度/小腸總長度（回盲部小腸末端至幽門環(huán)處）×100%。

1.2.7大鼠血清IL-6、IL-10表達(dá)水平的測定采用ELISA雙抗體夾心法測出每孔的OD值，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度計(jì)算出對應(yīng)樣品即各大鼠血清IL-6和IL-10的濃度。

1.2.8大鼠小腸組織石蠟切片及HE染色評(píng)估其腸粘膜損傷程度近回盲部小腸組織固定后拿出切成小塊，脫水、石蠟包埋、切片，制成片后HE染色。利用半定量計(jì)分進(jìn)行雙盲小腸組織病理評(píng)分：0分，組織正常無壞死；1分，輕微黏膜下和/或固有層分離；2分，中度黏膜下和/或固有層分離和/或黏膜下和肌肉層水腫；3分，重度黏膜下和/或固有層分離和/或黏膜下和肌肉層水腫，局部絨毛脫落；4分，腸絨毛消失。

1.2.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有資料數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，病理評(píng)分采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，組間比較采用Nemenyi檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析并繪制散點(diǎn)圖，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率及血清IL-6、IL-10表達(dá)見表1。

表1　各組大鼠術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率及血清IL-6、IL-10表達(dá)水平比較（Tab.1　Comparison of the small bowel propulsion rate and the serum IL-6 and IL-10 levels of postoperative rats in each group（

表1　各組大鼠術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率及血清IL-6、IL-10表達(dá)水平比較（Tab.1　Comparison of the small bowel propulsion rate and the serum IL-6 and IL-10 levels of postoperative rats in each group（

注：與空白組比較，**P＜0.01，***P＜0.001；與對照組比較，###P＜0.001。

組別空白組對照組藥物組動(dòng)物數(shù)15 15 15 IL-10濃度（ng/L）77.69±9.46119.691±10.716105.783±8.381 29.27±6.88***219.641±28.967***124.705±13.140** 73.51±12.55###150.001±20.763###160.299±15.481###小腸推進(jìn)率（%）IL-6濃度（ng/L）

由表1可見，對照組術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率與空白組相比顯著降低（P＜0.001），藥物組術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率與對照組相比顯著提高（P＜0.001）。對照組的術(shù)后24 h血清IL-6水平顯著高于空白組（P＜0.001），藥物組術(shù)后24 h血清IL-6水平顯著低于對照組（P＜0.001）。對照組術(shù)后24 h血清IL-10水平顯著高于空白組（P＜0.01），藥物組術(shù)后24 h血清IL-10水平顯著高于對照組（P＜0.001）。

2.2術(shù)后24 h的小腸推進(jìn)率與血清IL-6、IL-10表達(dá)水平的關(guān)系見圖1。

由圖1A可見，術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率與血清IL-6呈負(fù)相關(guān)，r=-0.855。術(shù)后血清IL-6濃度越高，小腸推進(jìn)率越低，其兩者呈強(qiáng)相關(guān)性。

由圖1B可見，術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率與血清IL-10呈正相關(guān)，r=0.932。說明術(shù)后血清IL-10濃度越高，小腸推進(jìn)率越高，其兩者呈非常強(qiáng)的相關(guān)性。

由圖1C可見，對照組大鼠整體分布在小腸推進(jìn)率值較低、血清IL-6濃度值較高、血清IL-10濃度值較低的區(qū)域，而藥物組大鼠整體分布在小腸推進(jìn)率值較高、血清IL-6濃度值較低、血清IL-10濃度值較高的區(qū)域。

2.3各組病理改變及小腸黏膜組織病理評(píng)分

2.3.1各組小腸黏膜組織組病理切片肉眼觀察對照組大鼠的小腸較正常腫脹發(fā)紅、輕微粘連、彈性減低、周圍滲出增多，藥物組大鼠的小腸也有紅腫及滲出，與對照組相比，紅腫及粘連較輕、滲出較少。

2.3.2各組病理切片鏡下觀察對照組大鼠的大部分小腸黏膜下層及固有層嚴(yán)重分離，黏膜下層及肌肉層水腫較重，部分肌層充血，重者有肌層斷裂，同時(shí)可見對照組的吸收細(xì)胞及潘氏細(xì)胞等較空白組減少、變形、排列不整齊，多數(shù)腸絨毛紊亂、脫落甚至消失；而藥物組大鼠的小腸黏膜下層及固有層的分離及水腫程度均較輕，腸絨毛的損傷也較明顯但其排列較對照組有序。見圖2。

圖1　術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率與血清IL-6、IL-10水平的關(guān)系Fig.1　Relationship of the small bowel Propulsion rate and the serum IL-6，IL-10 level of postoperative rats

圖2　各組大鼠小腸黏膜組織Fig.2　The small intestinal mucosal tissue of each group

2.3.3各組小腸黏膜組織病理評(píng)分見表2。3組整體之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；進(jìn)行兩兩比較，參照空白組，對照組腸黏膜病理組織嚴(yán)重（P＜0.001），而藥物組腸黏膜病理組織學(xué)改變相比于對照組明顯減輕（P＜0.05）。

表2　各組小腸組織的病理評(píng)分（Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，Nemenyi檢驗(yàn)）Tab.2　The small intestinal mucosa pathological grading of each groups（Kruskal-Wallis H test，Nemenyi test）

3　討論

3.1POI炎癥反應(yīng)機(jī)制中IL-6、IL-1020世紀(jì)初，術(shù)后腸梗阻被發(fā)現(xiàn)并引起重視，眾多學(xué)者對其發(fā)病機(jī)制展開研究。起初認(rèn)為與使用麻醉藥及麻醉鎮(zhèn)痛劑［8］、抑制性神經(jīng)條件反射［9］有關(guān)；之后發(fā)現(xiàn)胃腸激素也起作用，以及腸道Cajal細(xì)胞數(shù)量的明顯減少及相關(guān)基因的凋亡；但目前一致認(rèn)為，POI發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵是炎癥反應(yīng)［10-11］。手術(shù)中對腹膜及腸道的操作刺激均能激活免疫細(xì)胞［12］，觸發(fā)炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，影響局部胃腸道運(yùn)動(dòng)功能［13］。被多種途徑激活的肥大細(xì)胞及巨噬細(xì)胞增加了腸黏膜的滲透性［14］，使炎癥因子進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，加之細(xì)菌移位及其產(chǎn)物釋放［15］，引發(fā)整個(gè)胃腸道動(dòng)力障礙。本實(shí)驗(yàn)選取其中的重要因子IL-6、IL-10進(jìn)行研究分析。

IL-6是機(jī)體炎性反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子之一。已發(fā)現(xiàn)血清IL-6水平與機(jī)體炎癥反應(yīng)程度呈正相關(guān)，并具有較高的靈敏度，可作炎癥反應(yīng)的早期指標(biāo)。機(jī)體遭受手術(shù)干預(yù)后，在早期即可出現(xiàn)血清IL-6的增高。而IL-10是一種雙向免疫調(diào)節(jié)因子［16］，在POI腸道恢復(fù)過程中扮演重要角色［17］。一項(xiàng)POI鼠類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［18］中指出，在導(dǎo)致POI發(fā)生最重要的炎癥反應(yīng)環(huán)節(jié)中，IL-10起到了限制和緩解炎癥應(yīng)答的關(guān)鍵作用。IL-10作為一種巨噬細(xì)胞減活化劑，可發(fā)揮多向性作用調(diào)節(jié)各種促炎反應(yīng)，抑或可調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞。已證實(shí)嚙齒類動(dòng)物在腸道操作術(shù)后會(huì)誘發(fā)產(chǎn)生IL-10，而內(nèi)因性IL-10的產(chǎn)生是促術(shù)后損傷修復(fù)過程的不可或缺因素。相比于野生型POI小鼠模型，IL-10基因敲除的POI小鼠術(shù)后胃腸動(dòng)力恢復(fù)時(shí)間要明顯延遲，而給予POI小鼠補(bǔ)充重組IL-10治療后，可見其腸道肌層的滲出液及粒細(xì)胞浸潤較對照組顯著性減輕［18］。

3.2通腑化瘀湯對POI的治療作用通腑化瘀湯是在《傷寒論》小承氣湯基礎(chǔ)上化裁而成，以通腑瀉濁、化瘀止痛為總治則，意在攻其滯、促其動(dòng)、扶其正、散其結(jié)，通暢胃腸，恢復(fù)氣機(jī)，使腸結(jié)之病得以緩解，促進(jìn)術(shù)后康復(fù)。方中以大黃為君，蕩滌胃腸之積滯，攻下之力強(qiáng)大。厚樸寬腸行氣，使積便得下，矢氣得舒；枳實(shí)能破結(jié)消痞，下氣逐便，增強(qiáng)胃腸收縮之力，助胃腸排空；二者共為臣藥，加強(qiáng)消脹止痛之力。佐以黃芪，益氣健脾，振奮氣機(jī)，使腸道中凝滯之邪隨氣而轉(zhuǎn)；同時(shí)以丹參通腸腑之瘀結(jié)。炙甘草為使，益氣補(bǔ)中、緩急止痛、調(diào)和方藥。臨床應(yīng)用此方對POI的胃腸功能障礙有明顯改善，促進(jìn)胃腸功能恢復(fù)作用顯著。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，大黃作用的主要部位在腸道，能促腸蠕動(dòng)，也能抑制腸道細(xì)菌移位，清除細(xì)菌及內(nèi)毒素，降低腸壁血管通透性，保護(hù)腸黏膜屏障［19］；還能降低IL-6而抑制炎癥反應(yīng)。厚樸中含厚樸酚，可雙向調(diào)節(jié)胃腸道收縮，既能興奮被抑制的胃腸平滑肌，又能抑制其過度興奮［20］。枳實(shí)可使胃腸平滑肌蠕動(dòng)增強(qiáng)，同時(shí)降低其肌張力，發(fā)揮解痙作用［21-22］。黃芪雖對離體小腸平滑肌肌條無明顯影響，但可增快在體小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)和提高在體小腸平滑肌的緊張程度［23］。丹參在預(yù)防術(shù)后腸粘連方面的效果極佳，可明顯改善局部血液循環(huán)，促進(jìn)炎性滲出物的吸收，加快細(xì)胞修復(fù)［24］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通腑化瘀湯能夠顯著提高大鼠術(shù)后24 h小腸推進(jìn)率，減少促炎因子IL-6，增加抗炎因子IL-10，降低手術(shù)操作對胃腸動(dòng)力的抑制，減輕炎癥反應(yīng)，有效改善腸動(dòng)力障礙，緩解POI。術(shù)后早期服用該湯藥或可預(yù)防術(shù)后胃腸功能發(fā)生障礙，保護(hù)胃腸道功能。同時(shí)通過對各組腸黏膜組織的病理評(píng)分，說明通腑化瘀湯對大鼠POI的腸黏膜損傷有改善作用，可減輕手術(shù)操作造成的傷害，促進(jìn)腸道恢復(fù)。該湯藥對于出現(xiàn)POI的患者，可及時(shí)辨證應(yīng)用，亦可作為手術(shù)患者術(shù)后預(yù)防性用藥；在今后的相關(guān)研究及臨床治療方面，可多涉及中醫(yī)藥治療方案，盡快將術(shù)后腸梗阻這一疾病有效的控制。

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（本文編輯：馬英，于春泉）

Effects of Tongfu Huayu decoction on small intestine motility，IL-6，and IL-10 in postoperative ileus rats

GUO Wei1，CHEN Su-ning1，WANG Bo-wen2
（1.Department of Traditional Chinese Medicine，The Combination of Chinese Shengjing Hospital of China Medical University，Shenyang 110000，China；2.Traditional Chinese Medicine Internal Medicine Teaching and Research Section，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110000，China）

［Objective］To research the influence of decoction on small intestine motility，IL-6 and IL-10 in postoperative（POI）rat，discussing the promoting effect of traditional Chinese medicine for gastrointestinal functional recovery.［Methods］Forty-five rats were randomly divided into normal group，NS group and Tongfu Huayu group.The animal model of postoperative ileus was established by laparotomy in rats.Rats of NS group and Tongfu Huayu group were perfused saline and equivalent Tongfuhuayu potions separately.The normal group would not be operated.Twenty-four hours after surgery，the rats were sacrificed，then small bowel propulsion rate，serum IL-6 and IL-10 level were measured，and got a length of small bowel tissue nearby ileocecus making hematoxylin-eosin staining.［Results］The small bowel propulsion rate were reduced significantly in NS group，the serum IL-6 level increased significantly in NS group，the serum IL-10 level increased significantly in NS group，comparing to the normal group（P＜0.05）.And the small bowel propulsion rate were improved significantly in Tongfu Huayu group.The serum IL-6 level were improved significantly in Tongfu Huayu group.The serum IL-10 level were more increased significantly in Tongfu Huayu group，comparing to the NS group（P＜0.05）.The small bowel propulsion rates were negatively correlated with the serum IL-6，and were positively correlated with the serum IL-10.The intestinal mucosa of rats was normal in normal group，and it was more injured in NS group than in Tongfu Huayu group（P＜0.05）.［Conclusion］Administration of Tongfu Huayu decoction after surgery may prevent surgery-induced ileus through the effect on the decrease of serum IL-6 and the increase of serum IL-10.Also，Tongfu Huayu decoction can relieve the injury of intestinal mucosa caused by surgery and develop impact of protection.

Tongfu Huayu decoction；small intestinal motility postoperation；IL-6；IL-10

R574.2

A

1672-1519（2015）12-0743-05

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.12.11

郭薇（1988-），女，中國醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合專業(yè)型碩士，研究方向?yàn)橄到y(tǒng)疾病的基礎(chǔ)與臨床。

陳蘇寧，E-mail：chensn@sj-hospital.org。

（2015-07-21）