張悅　張正?！±?lèi)?ài)民等

摘要： 以觀賞百合優(yōu)質(zhì)品種“索邦”鱗莖為材料進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)研究，并成功獲得再生植株。結(jié)果表明：最佳滅菌方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，污染率僅為30.00%；最佳再生培養(yǎng)基為1/2 MS+2.0 mg/L 2，4-D，平均再生苗數(shù)為10.3；再生苗最佳生根培養(yǎng)基為B5+0.10 mg/L NAA，平均生根數(shù)為22.7條。

關(guān)鍵詞： 觀賞百合；索邦；愈傷培養(yǎng)；再生培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基；配方

中圖分類(lèi)號(hào)：S682.2+65.04+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）08-0049-02

百合是百合科（Liliaccae）百合屬（Lilium）植物的總稱(chēng)，因其“數(shù)十片相累，狀如白蓮花，百葉合成”而得名 [1]。百合是最受歡迎鮮切花之一，在世界各地廣為栽培，在世界鮮切花市場(chǎng)占有十分重要的地位。百合靠常規(guī)的小鱗莖分株方法繁殖，繁殖系數(shù)較低，有些種類(lèi)可用鱗片扦插繁殖，但往往容易腐爛。百合長(zhǎng)期靠營(yíng)養(yǎng)繁殖，容易感染病毒病，而影響百合品質(zhì)。組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，能夠迅速去除病毒和更新品種，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開(kāi)發(fā)潛力。近年來(lái)，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所引進(jìn)了一批優(yōu)質(zhì)觀賞百合品種（木門(mén)、索邦、西伯利亞、小太陽(yáng)、粉冠軍、橙色年代等），為適應(yīng)市場(chǎng)需求，筆者以“索邦”為試材開(kāi)展了組織培養(yǎng)研究，取得了積極成果。

1 材料與方法

1.1 材料

觀賞百合“索邦”引自北京綠爾農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司，栽植于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所左家實(shí)驗(yàn)基地。試驗(yàn)時(shí)選取生長(zhǎng)健康、無(wú)病蟲(chóng)害的“索邦”種球鱗片為試驗(yàn)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒 用流動(dòng)水將鱗莖外泥土沖去后用洗衣粉溶液仔細(xì)刷洗剝分后的鱗片，洗凈后再用流動(dòng)水沖洗過(guò)夜。接種前用75%乙醇溶液浸洗30 s、無(wú)菌水沖洗4～5次后，再用0.1%HgCl2溶液浸洗8、10、15、20 min或用30%84消毒水消毒8、10、15、20 min，最后用無(wú)菌水再次沖洗鱗片4～5次。在清洗過(guò)程中需要不斷震蕩搖晃，以確保溶液能充分浸潤(rùn)并充分沖洗材料。將消毒后的百合鱗片放置于1/2 MS+0.1 mg/L 2，4-D培養(yǎng)基中培養(yǎng)觀察。

1.2.2 培養(yǎng)條件 將消毒滅菌后的鱗片接種于1/2MS固體培養(yǎng)基上，設(shè)定培養(yǎng)溫度（24±2） ℃、培養(yǎng)濕度50%～60%、光照強(qiáng)度2 000 lx，在光照時(shí)長(zhǎng)為12 h/d的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)間定期用乳酸滅菌法消毒。

1.2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇 將鱗片切去四邊，切成 0.5 cm×0.5 cm的方塊，在生物潔凈工作臺(tái)中分別接種到不添加激素的1/2 MS、MS和B5培養(yǎng)基中。

1.2.4 誘導(dǎo)激素的選擇

1.2.4.1 不同濃度2，4-D對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響 在“1.2.3”節(jié)的試驗(yàn)基礎(chǔ)上，將經(jīng)過(guò)處理后的百合鱗片內(nèi)側(cè)向上放置于添加不同濃度2，4-D的1/2MS培養(yǎng)基上。2，4-D濃度梯度為0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0 mg/L，每瓶培養(yǎng)基放入1片鱗片，每組處理30瓶，觀察并記錄愈傷出現(xiàn)時(shí)間，60 d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率。

1.2.4.2 不同濃度毒莠定對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響 在“1.2.3”節(jié)的試驗(yàn)基礎(chǔ)上，將經(jīng)過(guò)處理后的百合鱗片內(nèi)側(cè)向上放置于添加不同濃度毒莠定的1/2MS培養(yǎng)基上。毒莠定濃度為1 mg/L 和2 mg/L，每瓶培養(yǎng)基放入3片鱗片，每組處理20瓶，并與“1.2.4.1”中最佳結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

1.2.5 生根培養(yǎng)基的選擇 以B5作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同濃度NAA（0、0.01、0.05、0.10 mg/L），每個(gè)濃度處理30瓶，40 d后觀察生根情況并計(jì)算平均生根數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 “索邦”百合鱗片消毒方法的篩選

隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，百合鱗片染菌率下降，但消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則外植體鱗片成活率降低，愈傷誘導(dǎo)率同時(shí)下降。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳消毒方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，染菌率為30.00%，誘導(dǎo)率高達(dá)63.33%（表1）。

2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選

在表2所示3種培養(yǎng)基中分別接入30個(gè)經(jīng)過(guò)消毒處理的鱗片，30 d后觀察結(jié)果，根據(jù)愈傷誘導(dǎo)率和愈傷質(zhì)量，確定最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS。

2.3 不同激素水平對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響

2.3.1 不同濃度2，4-D對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響 在“2.2”節(jié)研究結(jié)果基礎(chǔ)上，以1/2MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同濃度 [JP2]2，4-D，觀察并記錄愈傷出現(xiàn)時(shí)間和誘導(dǎo)數(shù)量。由表3可知，在不同濃度2，4-D影響下，愈傷組織形態(tài)明顯不同。當(dāng)2，4-D 濃度在1.0～2.0 mg/L范圍時(shí)，誘導(dǎo)出的愈傷生長(zhǎng)疏松，體積大且顏色為黃綠色，誘導(dǎo)時(shí)間較短且誘導(dǎo)數(shù)目最高。

2.3.2 不同濃度毒莠定對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響 在1/2MS培養(yǎng)基中分別加入1、2 mg/L毒莠定，觀察到毒莠定誘導(dǎo)愈傷組織出現(xiàn)時(shí)間在20 d左右，與添加2.0 mg/L 2，4-D相比大概延后1周。30 d后觀察添加1 mg/L 毒莠定誘導(dǎo)出的愈傷組織顏色為鵝黃色，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，誘導(dǎo)率70.00%；添加 2 mg/L 毒莠定培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷組織顏色為棕黃色，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，誘導(dǎo)率63.33%。40 d后添加1 mg/L 毒莠定培養(yǎng)基中觀察到愈傷組織中分化出再生苗，此時(shí)分化率為6.7%。

2.3.3 植株再生培養(yǎng)基激素濃度的篩選 結(jié)合“2.3.1”節(jié)和“2.3.2”節(jié)試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算培養(yǎng)基添加3種不同激素在90 d后分化出的平均再生苗數(shù)（表4）。如表4所知，3組平均再生苗數(shù)目相近，無(wú)明顯差異；但第3組分化出再生苗的時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)提前于添加不同濃度毒莠定的第1、2組。誘導(dǎo)愈傷及再生植株見(jiàn)圖1、圖2。

2.4 不同濃度萘乙酸對(duì)再生苗生根的影響

系誘導(dǎo)率最高，平均生根22.7條；在0.00～0.10 mg/L NAA范圍內(nèi)，隨濃度增加根系誘導(dǎo)率升高，根長(zhǎng)且粗壯。

3 結(jié)論與討論

[JP2]本研究利用索邦百合的鱗莖為外植體誘導(dǎo)愈傷，確定了索 [JP2]邦百合鱗莖誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基為1/2MS+0.1 mg/L 2，4-D，誘導(dǎo)率為66.67%；最佳消毒方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，污染率僅為30.00%；最佳再生培養(yǎng)基為1/2MS+ 2.0 mg/L 2，4-D，平均再生苗數(shù)為10.3株且分化時(shí)間短；再生苗最佳生根培養(yǎng)基為B5+0.10 mg/L NAA，平均生根數(shù)為22.7條，顏色翠綠，根長(zhǎng)均勻，大于2 cm。

[JP2]東方百合“索邦”是百合科百合屬多年生球根類(lèi)花卉，花大而美，粉色艷麗，葉片長(zhǎng)橢圓形，墨綠互生。索邦百合是目前市場(chǎng)暢銷(xiāo)品種，深受消費(fèi)者歡迎，繁殖主要靠鱗莖分株進(jìn)行 [2]，繁殖量小且易造成種性退化。目前索邦百合的快繁研究一直側(cè)重于外植體誘導(dǎo)叢生芽建立再生體系，而對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織分化再生植株的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究成果為建立索邦百合和其他優(yōu)質(zhì)觀賞百合品種快繁技術(shù)體系提供技術(shù)支持和參考。

[HS2*2][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1] 梁 云，馮慧穎，徐雷鋒，等. “百合”植物名稱(chēng)及原植物考證[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：社會(huì)科學(xué)版，2013，12（2）：69-72.

[2]李衛(wèi)鋒，王 丹，黃海濤. 荷蘭百合新品種索爾邦的快繁技術(shù)研究[J]. 北方園藝，2007（9）：191-192.