王卓，姜玉峰，邢國強，呂海龍

Nrf2信號通路抑制劑對細(xì)粒棘球蚴作用的研究

王卓，姜玉峰，邢國強，呂海龍

目的研究Nrf2信號通路抑制劑DRB對體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)活力的影響。方法從自然感染細(xì)粒棘球蚴病的羊肝中獲取新鮮細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，并于RPMI 1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。實驗分為DMSO空白對照組，25 g/L、50 g/L、75 g/L DRB處理組。通過伊紅染色，在倒置顯微鏡下觀察原頭節(jié)活力和形態(tài)變化，并繪制生長活力曲線。在掃描電鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果對照組和25 g/L DRB處理組體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)后，不同時間原頭節(jié)活力比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F空白對照組=0.542，P＞0.05;F25g/LDRB處理組=0.658，P＞0.05)。50 g/L DRB處理組和75 g/L DRB處理組體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)后，不同時間原頭節(jié)活力比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F50g/LDRB處理組=6.686，P＜0.01;F75g/LDRB處理組=10.756，P＜0.01)。隨著用藥時間的延長和藥物濃度的增加，DRB對原頭節(jié)活力的抑制效果增強，且原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。結(jié)論高濃度的Nrf2抑制劑對體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)有抑制作用，并且有一定的濃度和時間依賴性。Nrf2信號通路是抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵因子，對細(xì)粒棘球蚴Nrf2信號通路進(jìn)行研究，可能為治療細(xì)粒棘球蚴病提供一個新思路。

細(xì)粒棘球絳蟲;原頭節(jié);Nrf2信號通路;DRB;體外研究

王卓，姜玉峰，邢國強，等．Nrf2信號通路抑制劑對細(xì)粒棘球蚴作用的研究［J］．中國全科醫(yī)學(xué)，2015，18 (29):3601－3605．［www.chinagp.net］

Wang Z，Jiang YF，Xing GQ，et al．Influence of Nrf2 signaling pathway inhibitor on echinococcus granulosus［J］．Chinese General Practice，2015，18(29):3601－3605．

棘球蚴病(echinococcosis)又稱包蟲病(hydatid disease)，發(fā)生在棘球蚴絳蟲的中絳期幼蟲，常寄生于人體器官及其他動物體內(nèi)，從而造成對人體健康和畜牧業(yè)發(fā)展危害性極大的寄生蟲病，且該寄生蟲病是人和牲畜共同患有。據(jù)目前研究發(fā)現(xiàn)，棘球蚴絳蟲存在許多種類。發(fā)生在我國多為細(xì)粒棘球蚴病，又稱為囊型包蟲病(cystic echinococcosis，CE)及多房棘球蚴病，又稱為泡型包蟲病(alveolar echinococcosis，AE)。這兩種分型疾病分別由細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus，E.g)和多房棘球絳蟲(Echinococcusmultilocularis，E.m)寄生在人體內(nèi)部器官或者動物體內(nèi)致病。我國新疆等地此病發(fā)病率高［1－4］。細(xì)粒棘球蚴可寄生在人體多個器官，但以肝臟最為常見(占50%～70%)，其次為肺臟(占20%～30%)，在腦、腎、脾等器官中亦可見到［5］。目前的肝細(xì)粒棘球蚴病治療方案中，手術(shù)治療是首選，并在術(shù)后予以藥物輔助治療。臨床上手術(shù)采用的術(shù)式為“閉合式肝包蟲外膜內(nèi)外囊完整摘除術(shù)”［6］，這種手術(shù)方法的優(yōu)點在于手術(shù)創(chuàng)傷小、術(shù)后并發(fā)癥少和可根治性等，可降低肝細(xì)粒棘球蚴病的術(shù)后復(fù)發(fā)率。但是，手術(shù)過程中存在頭節(jié)泄露以及切除不完全等問題，術(shù)后復(fù)發(fā)率也由此而升高。鑒于這種情況，術(shù)后的藥物輔助治療成為關(guān)鍵。近年來，許多學(xué)者在抗棘球蚴病藥物方面做了大量研究，例如對吡喹酮、阿苯達(dá)唑、甲苯達(dá)唑等藥物的作用進(jìn)行了詳細(xì)研究及臨床效果觀測。上述藥物作為患者在術(shù)后使用的輔助治療手段，其結(jié)果并不令人滿意。更嚴(yán)重的是，有研究表明，患者在服用上述藥物過程中，會產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，甚至對生命造成危害［7－9］。

本研究在體外培養(yǎng)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，將不同濃度的Nrf2抑制劑DRB體外作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，觀察原頭節(jié)的變化情況。旨在為細(xì)粒棘球蚴病的藥物治療方法尋找一個新途徑。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器主要試劑:DRB、二甲基亞砜(DMSO)、RPMI 1640培養(yǎng)基(Sigma公司)，小牛血清(Gibco公司)。儀器:37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱(Nuaire公司)，CHK Olympus倒置顯微鏡(Olympus optical公司)，掃描電鏡LEO1430VP(Olympus optical公司)。

1.2 方法

1.2.1 體外培養(yǎng)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)將自然感染細(xì)粒棘球蚴病的綿羊肝臟(新疆石河子市西部牧業(yè)有限公司提供)用75%乙醇溶液消毒表面，在超凈臺中，用注射器反復(fù)吸取羊肝表面的囊泡，把含原頭節(jié)的囊液移入無菌瓶中。然后用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗原頭節(jié)3次，沉淀充分后去除瓶內(nèi)上層液體。清洗后的原頭節(jié)用伊紅染色法進(jìn)行活力測試，染色標(biāo)準(zhǔn)為95%以上拒染。將原頭節(jié)培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，并加入雙抗(青霉素和鏈霉素)，放于37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

1.2.2 Nrf2抑制劑DRB體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)實驗分為DMSO空白對照組，25 g/L、50 g/L、75 g/L DRB處理組。將在體外培養(yǎng)3 d后的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)用PBS清洗3次后，分別加入到上述培養(yǎng)基中，放置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

1.2.3 倒置顯微鏡觀察細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)活力情況在培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，每天均勻抽取150μl液體(平均含原頭節(jié)90～120個)，抽取的原頭節(jié)用伊紅染色后，在倒置顯微鏡下觀察其變化情況。存活的原頭節(jié)因蟲壁保護(hù)作用，不會被伊紅染色作用為紅色，相反，死亡的原頭節(jié)或活力差的原頭節(jié)因蟲壁通透性增強，會被染為紅色。由此，計算每天原頭節(jié)活力。每3 d更換培養(yǎng)液，重復(fù)加藥。實驗重復(fù)3次。

1.2.4 掃描電鏡觀察細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)將原頭節(jié)用PBS反復(fù)清洗3次后，4%戊二醛將原頭節(jié)固定24 h，再將原頭節(jié)用50%乙醇溶液脫水5 min，70%乙醇溶液脫水10 min，80%乙醇溶液脫水30 min，90%乙醇溶液脫水1 h，最后用100%乙醇脫水過夜。脫水處理后的原頭節(jié)進(jìn)行真空噴金LOOA0，在掃描電鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)變化情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料的比較采用方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 倒置顯微鏡觀察細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)倒置顯微鏡下觀察，空白對照組和25 g/L DRB處理組原頭節(jié)散在分布，可見原頭節(jié)活動，蟲體結(jié)構(gòu)飽滿，呈橢圓形，內(nèi)部豐富充實，結(jié)構(gòu)清晰完整，鈣顆粒清亮而明顯(見圖1A～D)。50 g/L DRB處理組作用第3天，原頭節(jié)活動度較空白對照組減弱(見圖1E)，第6天，原頭節(jié)活動度較空白對照組明顯減弱，原頭節(jié)蟲體變小(見圖1F)。75 g/L DRB處理組作用第3天，出現(xiàn)蟲體邊緣不規(guī)整，空泡增多，鈣顆粒明顯減少(見圖1G)，第6天，原頭節(jié)蟲體嚴(yán)重皺縮，頂突上的小鉤排列紊亂，部分脫落，吸盤變型，內(nèi)部結(jié)構(gòu)消失(見圖1H)。

圖1 倒置顯微鏡觀察經(jīng)不同濃度DRB處理后的原頭節(jié)形態(tài)Figure 1 Form of protoscoleces treated by different concentrations of DRB observed under inverted microscope

2.2 DRB對細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)活力影響空白對照組和25 g/L DRB處理組體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)后，不同時間原頭節(jié)活力比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F空白對照組=0.542，P＞0.05;F25g/LDRB處理組=0.658，P＞0.05)。50 g/LDRB處理組和75 g/LDRB處理組體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)后，不同時間原頭節(jié)活力比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F50g/LDRB處理組=6.686，P＜0.01; F75g/LDRB處理組=10.756，P＜0.01，見圖2)。

2.3 掃描電鏡觀察DRB對細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)影響通過掃描電鏡觀察，空白對照組和25 g/L DRB處理組作用第6天，原頭節(jié)體態(tài)飽滿充實，呈橢圓形，并且形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，沒有觀察到原頭節(jié)結(jié)構(gòu)顯著變化(見圖3A、B)。50 g/L DRB處理組作用第3天，原頭節(jié)蟲體表層出現(xiàn)輕微褶皺，但大體形態(tài)并未改變(見圖3C);作用第6天，原頭節(jié)表層出現(xiàn)明顯皺縮，蟲體表面結(jié)構(gòu)受到一定程度破壞，蟲體形態(tài)發(fā)生改變(見圖3D)。75 g/L DRB處理組作用第3天，原頭節(jié)吸盤變型，頭鉤排列紊亂，蟲體表層發(fā)生嚴(yán)重皺縮(見圖3E);處理第6天，原頭節(jié)蟲體大部分凹陷，蟲體結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，甚至蟲體潰解(見圖3F)。

圖2 DRB體外作用原頭節(jié)活力曲線Figure 2 Vitality curves of protoscoleces influenced in vitro by DRB

圖3 掃描電鏡觀察經(jīng)不同濃度DRB處理原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)的變化Figure 3 Changes of ultrastructure of protoscoleces treated by different concentrations of DRB observed under SEM

3 討論

Nrf2是存在于眾多生物體內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子。Nrf2在1994年被研究人員發(fā)現(xiàn)，屬于CNC亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄激活因子家族(cap'n'collar subfamily of basic leucinezipper)，該家族有6個成員，即Bach1、Bach2、Nrf1、NF－F2、Nrf2和Nrf3，并且廣泛表達(dá)于人體組織中［10］。Nrf2能夠直接影響抗氧化酶序列(antioxidant response element，ARE)的表達(dá)情況，從而在機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。在正常的生理狀態(tài)下，細(xì)胞質(zhì)中的Nrf2與Keap1(Kelch－like ECH－associated protein 1)大量結(jié)合并在胞質(zhì)中快速降解，通過Keap1－Cullin E3連接酶，造成Nrf2/Keap1泛素化［11］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Caveolin－1(Cav－1)是Keap1所特有的Nrf2抑制劑，可幫助水泡運輸，從而抑制人血紅素氧合酶1(HO－1)和硫氧還蛋白還原酶Ⅰ這兩種參與細(xì)胞氧化還原平衡的表達(dá)［12－13］。在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，Cav－1可以與Nrf2不需要媒介而直接結(jié)合。同時研究發(fā)現(xiàn)，若Cav－1在肺上皮細(xì)胞中高水平表達(dá)，會導(dǎo)致Nrf2在細(xì)胞中的活性降低，從而使細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的表達(dá)也相應(yīng)下降［14］。

在Keap1調(diào)節(jié)的氧化劑或親電化學(xué)傳感過程中，由于MAPK信號通路中，例如JNK蛋白、ERK、P38等磷酸化后，Nrf2可以得到釋放［15］，釋放后的Nrf2逐漸轉(zhuǎn)運并積累在擁有異質(zhì)二聚體等轉(zhuǎn)錄因子(c－Jun、AP－1家族、M fa和c－Fos)的細(xì)胞核中［16］，輔助因子復(fù)合物特異性結(jié)合ARE序列，并廣泛調(diào)控編碼抗氧化酶基因，其中包括了谷胱甘肽－S轉(zhuǎn)移酶(GST)、NADPH醌氧化還原酶－1(NQO－1)、血紅素加氧酶－1(HO－1)、UDP－葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶等［17］。

研究表明，通過激活GSK－3激酶，使其進(jìn)入細(xì)胞核，并發(fā)生一系列磷酸化反應(yīng)，導(dǎo)致Nrf2由細(xì)胞核轉(zhuǎn)運到細(xì)胞質(zhì)中，并在泛素蛋白酶體系中降解。Nrf2信號通路也由此停止表達(dá)，以致影響抗氧化酶的一系列表達(dá)［18］。Rada等［19］提出了一種依賴Keap1的新型假說，在Nrf2的Neh6區(qū)域，由GSK－3對其產(chǎn)生絲氨酸殘基磷酸化作用，把細(xì)胞核中的Nrf2釋放出來，再和Trcp/ Cullin1 E3連接酶復(fù)合物進(jìn)行泛素化結(jié)合。

Nrf2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被認(rèn)為是氧化應(yīng)激調(diào)控的重要樞紐，并且現(xiàn)在又有一些新的證據(jù)表明，如表觀遺傳機制［20］和多態(tài)性［21］可參與調(diào)節(jié)Nrf2信號通路的轉(zhuǎn)錄活性。有研究說明轉(zhuǎn)錄抑制劑DRB作用于腫瘤細(xì)胞，可以使腫瘤細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)降低，并且對腫瘤細(xì)胞造成損傷［22］。

目前，在各種感染性疾病中，越來越關(guān)注Nrf2信號通路。膿毒血癥是由于寄主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，解除了對細(xì)菌、真菌或病毒的管制，發(fā)生感染，導(dǎo)致多器官功能衰竭，甚至死亡。Nrf2－/－小鼠被證明較野生型小鼠對LPS誘導(dǎo)的膿毒性休克更敏感，暴露于相同LPS致死劑量情況下也有較高的死亡率［23］。此外，Nrf2信號通路在呼吸系統(tǒng)疾病的病理生理學(xué)方面也具有重要作用［24］。查加斯病是由克氏錐形蟲感染引起，患者可能出現(xiàn)心臟、消化道系統(tǒng)炎癥，并且由氧化應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。用Nrf2誘導(dǎo)劑包括鈷原卟啉(CoPP)、蘿卜硫素、紫檀芪或N－乙酰半胱氨酸作用小鼠后，表現(xiàn)出克氏錐形蟲感染率下降［25］。瘧疾是由瘧原蟲感染所引起的一種嚴(yán)重疾病。疾病的嚴(yán)重程度與過度炎性反應(yīng)和不受控制的瘧原蟲增殖相關(guān)。相關(guān)研究報道，Nrf2誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)感染惡性瘧原蟲的巨噬細(xì)胞，能夠恢復(fù)其吞噬能力，這可能是一個治療瘧疾的新方法［26］。人類感染細(xì)粒棘球蚴病，由于原頭節(jié)在體內(nèi)器官中增殖，形成囊泡，可導(dǎo)致器官衰竭。在治療方面手術(shù)是首選的治療方式，但是在手術(shù)過程中難以避免原頭節(jié)泄露，導(dǎo)致復(fù)發(fā)。術(shù)后服用藥物，控制復(fù)發(fā)是輔助治療的關(guān)鍵?，F(xiàn)在臨床用于治療包蟲病的藥物主要為阿苯達(dá)唑和氟苯達(dá)唑等，這些藥物不僅需要大劑量長時間給藥，而且部分患者不能耐受藥物產(chǎn)生的嚴(yán)重不良反應(yīng)。有研究報道，20%的高滲氯化鈉溶液在短時間內(nèi)對原頭節(jié)的殺傷力可達(dá)100%，但是若在術(shù)中用于病灶的局部灌洗，會引起嚴(yán)重不良反應(yīng)，并會對周圍正常肝組織造成一定程度的傷害［27］。

本研究探討了Nrf2抑制劑對細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)生長和形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，實驗結(jié)果表明，高濃度的Nrf2抑制劑DRB對體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)有抑制作用，并且有一定的濃度和時間依賴性。目前，細(xì)粒棘球蚴疾病的治療仍是全球性的難題。Nrf2是調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要元件，對其進(jìn)行研究有助于從分子水平認(rèn)識細(xì)粒棘球蚴的生長、發(fā)育、存活調(diào)控機制。

［1］McManus DP，ZhangW，Li J，etal．Echinococcosis［J］．Lancet，2003，362(9392):1295－1304．

［2］Eckert J，Deplazes P．Biological，epidemiological，and clinical aspects of echinococcosis，a zoonosis of increasing concern［J］．Clin Microbiol Rev，2004，17(1):107－135．

［3］Jenkins DJ，Romig T，Thompson RC．Emergence/re－emergence of Echinococcus spp．——a global update［J］．Int JParasitol，2005，35(11/12):1205－1219．

［4］Cardona GA，Carmena D．A review of the global prevalence，molecular epidemiology and economics of cystic echinococcosis in production animals［J］．Vet Parasitol，2013，192(1/ 3):10－32．

［5］Ammann RW，Eckert J．Cestodes，Echinococcus［J］．Gastroenterol Clin North Am，1996，25(3):655－689．

［6］Peng XY，Zhang SJ，Niu JH，et al．Total subadventitial cystectomy for the treatmentof30 patientswith hepatic hydatid cyst［J］．Chinese Journal of General Surgery，2002，17(9):529－530．(in Chinese)

彭心宇，張示杰，牛建華，等．肝包蟲外膜完整摘除術(shù)30例報告［J］．中華普通外科雜志，2002，17(9):529－530．

［7］Jamshidi M，Mohraz M，Zangeneh M，et al．The effect of combination therapy with albendazole and praziquantel on hydatid cyst treatment［J］．Parasitol Res，2008，103(1):195－199．

［8］Molavipour A，Javan H，Moghaddam AA，et al．Combined medical and surgical treatmentof intracardiac hydatid cysts in 11 patients［J］．JCard Surg，2010，25(2):143－146．

［9］Hemphill A，Spicher M，Stadelmann B，et al．Innovative chemotherapeutical treatment options for alveolar and cystic echinococcosis［J］．Parasitology，2007，134(Pt12):1657－1670．

［10］Moi P，Chan K，Asunis I，et al．Isolation of NF－E2－related factor 2(Nrf2)，a NF－E2－like basic leucine zipper transcriptional activator that binds to the tandem NF－E2/AP1 repeat of the beta－globin locus control region［J］．Proc Natl Acad SciU S A，1994，91(21):9926－9930．

［11］Cullinan SB，Gordan JD，Jin J，et al．The Keap1－BTB protein is an adaptor that bridges Nrf2 to a Cul3－based E3 ligase:oxidative stress sensing by a Cul3－Keap1 ligase［J］．Mol Cell Biol，2004，24(19):8477－8486．

［12］Jin Y，Kim HP，Chi M，et al．Deletion of caveolin－1 protects againstoxidative lung injury via up－regulation of heme oxygenase－1［J］．Am JRespir Cell Mol Biol，2008，39(2):171－179．

［13］Volonte D，Galbiati F．Inhibition of thioredoxin reductase 1 by caveolin 1 promotes stress－induced premature senescence［J］．EMBO Rep，2009，10(12):1334－1340．

［14］LiW，Liu H，Zhou JS，et al．Caveolin－1 inhibits expression of antioxidant enzymes through direct interaction with nuclear erythroid 2 p45－related factor－2(Nrf2)［J］．JBiol Chem，2012，287 (25):20922－20930．

［15］Kang KW，Lee SJ，Park JW，et al．Phosphatidylinositol3－kinase regulates nuclear translocation of NF－E2－related factor 2 through actin rearrangement in response to oxidative stress［J］．Mol Pharmacol，2002，62(5):1001－1010．

［16］Kimura M，Yamamoto T，Zhang J，et al．Molecular basis distinguishing the DNA binding profile of Nrf2－Maf heterodimer from thatofMaf homodimer［J］．JBiol Chem，2007，282(46): 33681－33690．

［17］Alam J，Stewart D，Touchard C，et al．Nrf2，a Cap'n'Collar transcription factor，regulates induction of the heme oxygenase－1 gene［J］．JBiol Chem，1999，274(37):26071－26078．

［18］Jain AK，Jaiswal AK．GSK－3beta acts upstream of Fyn kinase in regulation of nuclear export and degradation of NF－E2 related factor 2［J］．JBiol Chem，2007，282(22):16502－16510．

［19］Rada P，Rojo AI，Chowdhry S，et al．SCF/β－TrCP promotes glycogen synthase kinase 3－dependent degradation of the Nrf2 transcription factor in a Keap1－independentmanner［J］．Mol Cell Biol，2011，31(6):1121－1133．

［20］Yu S，Khor TO，Cheung KL，etal．Nrf2 expression is regulated by epigenetic mechanisms in prostate cancer of TRAMP mice［J］．PLoSOne，2010，5(1):e8579．

［21］Arisawa T，Tahara T，Shibata T，et al．The relationship between Helicobacter pylori infection and promoter polymorphism of the Nrf2 gene in chronic gastritis［J］．Int JMol Med，2007，19(1):143－148．

［22］Qu LY，Jiang YL，Tang XW．Effect of DRB/α－Amanitin on localization of Nrf2 in A549 cells［J］．Journal of Zhejiang University:Medical Sciences，2010，39(1):24－29．(in Chinese)

曲麗艷，蔣燕靈，唐修文．轉(zhuǎn)錄抑制劑DRB和α－Amanitin對A549細(xì)胞中Nrf2定位影響的研究［J］．浙江大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2010，39(1):24－29．

［23］Thimmulappa RK，Scollick C，Traore K，et al．Nrf2－dependent protection from LPS induced inflammatory response and mortality by CDDO－Imidazolide［J］．Biochem Biophys Res Commun，2006，351(4):883－889．

［24］Boutten A，Goven D，Artaud－MacariE，etal．NRF2 targeting:a promising therapeutic strategy in chronic obstructive pulmonary disease［J］．Trends Mol Med，2011，17(7):363－371．

［25］Paiva CN，F(xiàn)eijóDF，Dutra FF，et al．Oxidative stress fuels Trypanosoma cruzi infection in mice［J］．J Clin Invest，2012，122(7):2531－2542．

［26］Olagnier D，Lavergne RA，Meunier E，et al．Nrf2，a PPARγ alternative pathway to promote CD36 expression on inflammatory macrophages:implication formalaria［J］．PLoS Pathog，2011，7 (9):e1002254．

［27］Erzurumlu K，Hokelek M，Baris S，et al．Effect of albendazole sulfoxide solution on the scolices and the hepatobiliary system［J］．Eur Surg Res，1998，30(6):433－438．

Influence of Nr f2 Signaling Pathway Inhibitor on Echinococcus Granulosus

WANG Zhuo，JIANGYu－feng，XINGGuoqiang，et al．Department of Hepatobiliary Surgery，the First Affiliated Hospital of Shihezi University，Shihezi832003，China

Objective To investigate the in vitro effect of Nrf2 signaling pathway inhibitor DRB on the activity of echinococcus granulosus protoscoleces．Methods We obtained fresh echinococcus granulosus protoscoleces from lamb liver naturally infected with echinococcosis granulose and conducted in vitro culture in RPMI1640medium．The sampleswere divided into four groups:DMSO control group，25 g/LDRB group，50 g/LDRB group and 75 g/LDRB group．By eosin staining，the activity and morphological changes of echinococcus granulosus protoscoleces were observed under inverted microscope，and activity curvesweremade．The ultrastructure of protoscoleceswas observed under scanning electronmicroscope．Results There were not significantly different in vitro effect of control group and 25 g/L DRB group on the activity of echinococcus granulosus protoscoleces in different time(Fcontrol=0.542，P＞0.05;F25g/LDRB=0.658，P＞0.05)．There were significantly different in vitro effect of50 g/LDRB group and 75 g/LDRB group on the activity of echinococcus granulosus protoscoleces in different time (F50g/LDRB=6.686，P＜0.01;F75g/LDRB=10.756，P＜0.01)．With the lengthening ofmedication time and the increase of drug concentration，the inhibiting effect of DRB on protoscoleces vitality was strengthened，and the ultrastructure was changed．Conclusion High concentrations of DRB inhibitors can all inhibit in vitro cultured echinococcus granulosus protoscoleces，the dependence on concentration and time length exists．Nrf2 signaling pathway is a key factor for antioxidant stress．The study on the Nrf2 signaling pathway of echinococcus granulosusmay provide a new thought for the treatment of echinococcus granulosus．

Echinococcus granulosus;Protoccoleces;Nrf2 signaling pathway;DRB;In vitro

R 383.33

A

10.3969/j.issn.1007－9572.2015.29.023

2015－04－13;

2015－08－10)

(本文編輯:賈萌萌)

國家自然科學(xué)基金資助項目(81360410)

832003新疆石河子市，石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科(王卓，邢國強，呂海龍);石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室(姜玉峰)

呂海龍，832003新疆石河子市，石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科;E－mail:lvhl1999@126.com