茹菲亞.祖拉提,張蕾,排黑爾丁.凱賽爾,阿麗娜.阿布都吉力力,馬慧,康雯

.齒科美容.

不同粘結(jié)劑對烤瓷冠邊緣致齲菌定植變化的影響研究

茹菲亞.祖拉提,張蕾,排黑爾丁.凱賽爾,阿麗娜.阿布都吉力力,馬慧,康雯

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科新疆烏魯木齊830054)

目的:研究不同粘結(jié)劑、不同民族對烤瓷冠修復(fù)前后不同時期冠邊緣齦上菌斑中變形鏈球菌的定植變化影響.方法:隨機選擇下頜第一磨牙行鈀銀合金烤瓷冠修復(fù)的維吾爾族、漢族患者30例,根據(jù)使用粘結(jié)劑的不同分為兩組,采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測定冠修復(fù)前后的變形鏈球菌定量值,并觀察其菌斑指數(shù).結(jié)果:修復(fù)后,兩組的菌斑指數(shù)均較修復(fù)前明顯升高(P<0.05);與修復(fù)前比較,玻璃離子粘結(jié)劑組1、3個月的變形鏈球菌相對定量值減小(P<0.05),聚羧酸鋅粘結(jié)劑組1、3個月的變形鏈球菌相對定量值增加(P<0.05);同組之間,維吾爾族患者的變形鏈球菌的相對定量值高于漢族患者(P<0.05).結(jié)論:玻璃離子粘結(jié)劑可能可以降低修復(fù)體基牙的致齲風(fēng)險;冠修復(fù)后的維吾爾族患者較漢族患者易患齲病.

粘結(jié)劑;烤瓷冠;變形鏈球菌;熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

烤瓷熔附金屬全冠于20世紀(jì)50年代在美國首次用于臨床,取得了很好的修復(fù)效果,后在世界范圍內(nèi)不斷推廣[1],近年來在我國已經(jīng)成為臨床上最常用的修復(fù)體之一.研究表明,修復(fù)體材料的不同對基牙牙體及牙周組織的影響不同[2-3],就致齲性來說,目前國內(nèi)外的研究集中于修復(fù)體材料的不同對牙體組織邊緣微滲漏影響的研究[4-5].本實驗旨在研究不同粘結(jié)劑材料對修復(fù)體周圍的微生物學(xué)影響.實時熒光定量PCR是目前比較常用的定量檢測技術(shù),具有較強的特異性和靈敏度.本研究用此技術(shù)檢測玻璃離子粘結(jié)劑和聚羧酸鋅粘結(jié)劑及不同民族對烤瓷冠邊緣齦上菌斑中變形鏈球菌的定植變化影響,以了解這種粘結(jié)劑對烤瓷冠基牙患齲的影響.

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1細(xì)菌菌種:變形鏈球菌ATCC25175由武漢大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院實驗室提供.

1.1.2主要試劑與儀器:而至富士Ⅰ(而至齒科有限公司),聚羧酸鋅水門汀(日本株式會社松風(fēng)SH0FU INC),鈀銀合金烤瓷冠(東莞定遠(yuǎn)陶齒制品有限公司),細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(天根生化科技有限公司,北京),2*TaqPCR MasterMix(天根生化科技有限公司,北京),瓊脂糖(Biowest,Hongkong),Maxima SYBR Green qPCR Master Mix(Thermo,American),PCR儀(Bio-Rad,美國),熒光定量PCR儀(Bio-Rad,美國),凝膠成像及分析(Bio-Rad,美國).

1.1.3引物:根據(jù)相關(guān)文獻設(shè)計引物及細(xì)菌通用引物[6],引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成(見表1).

1.2研究對象

1.2.1病例來源:收集2013年12月-2014年2月就診于新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科,下頜第一磨牙要求行冠修復(fù)的維吾爾族、漢族門診患者,從中隨機選擇行鈀銀合金烤瓷冠修復(fù)的維吾爾族,漢族患者30例,向患者講明試驗?zāi)康募斑^程,并得到患者的同意.采用自身前后對照,將患者備牙前的受試牙設(shè)為對照組,冠修復(fù)后的受試牙設(shè)為試驗組.

受試者納入標(biāo)準(zhǔn):患者無煙酒嗜好,無長期接觸有毒有害物質(zhì)史,無口腔慢性疾病及全身疾病,身體狀況良好,口內(nèi)無潰瘍,無全冠修復(fù)禁忌證;修復(fù)前3個月及修復(fù)過程中未服用抗生素類藥物、激素類藥物,未進行放化療;患牙排列正常,無扭轉(zhuǎn),無頰舌側(cè)傾斜、伸長;基牙牙周健康,無松動、叩痛,牙齦色澤正常,探診無出血.

受試者排除標(biāo)準(zhǔn):實驗前3個月或?qū)嶒炦^程中,患呼吸系統(tǒng)疾病者或口腔軟硬組織疾病者,全身系統(tǒng)性疾病者;妊娠期婦女;無合作意愿的患者;其他一切修復(fù)治療的禁忌證.

1.2.3臨床分組:根據(jù)粘結(jié)劑的選擇不同,將研究對象隨機編入玻璃離子粘結(jié)劑組和聚羧酸鋅粘結(jié)劑組.

1.3方法

1.3.1菌斑指數(shù)檢查:觀察基牙修復(fù)前、修復(fù)后1個月及修復(fù)后3個月時冠邊緣菌斑附著情況,并進行菌斑指數(shù)評分及記錄,記分標(biāo)準(zhǔn)[7]:0=齦緣區(qū)無菌斑;1=齦緣區(qū)的牙面有薄的菌斑,但視診不易見,若用探針尖的側(cè)面可刮出菌斑;2=在齦緣或鄰面可見中等量菌斑;3=在齦溝內(nèi)或齦緣區(qū)及鄰面有大量軟垢.由同一名醫(yī)生檢查并記錄患牙的PLI.

1.3.2臨床樣本采集:初診時患者均進行牙周基礎(chǔ)治療,以去除牙石.受試牙牙體預(yù)備前,囑患者用清水漱口1min,以去除口內(nèi)殘余的食物殘渣,采集部位以棉卷隔濕,取樣時受試牙用無菌牙簽刮除舌側(cè)邊緣齦上菌斑,受試牙牙體預(yù)備均由同一位醫(yī)師完成,舌側(cè)均制備成齦上肩臺;修復(fù)后1、3個月的樣本采集部位均為烤瓷冠舌側(cè)邊緣與牙體組織接合處.冠粘結(jié)前均行嚴(yán)格拋光,以確保一定的光滑度.將采集完成的菌斑樣本立即置入含1mlPBS的EP管內(nèi),冰浴下轉(zhuǎn)送實驗室并于-20℃冰箱內(nèi)凍存?zhèn)溆?為了保證實驗的準(zhǔn)確性,烤瓷冠粘結(jié)材料的選擇與調(diào)拌,烤瓷冠粘結(jié)的臨床操作,實驗室部分的操作均由不同的技術(shù)人員完成.

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)菌株:將變形鏈球菌ATCC25175菌株37℃厭氧復(fù)蘇48h,各自挑選1個單菌落行次代培養(yǎng)(牛心腦液培養(yǎng)基),厭氧條件下(37℃,24h)用生理鹽水分別洗菌,用于DNA提取.

1.3.4DNA的制備:牙菌斑樣本、變形鏈球菌的DNA提取方法均參照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒的操作步驟進行,提取的DNA用核算定量儀檢測純度, D260/D280比值為1.7～1.9.-20℃保存?zhèn)溆?在對臨床樣本進行定量檢測前的短期時間內(nèi),需將所有樣本DNA用無菌dd水稀釋至同一個濃度,將稀釋后的樣本DNA用于定量PCR反應(yīng).

1.3.5標(biāo)準(zhǔn)品的制備:將提取備用的變形鏈球菌DNA用無菌水連續(xù)5倍稀釋,共稀釋7個梯度,即:101、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5,10-6、10-7,備用.

1.3.6 Real-time PCR的定量檢測:用備好的標(biāo)準(zhǔn)品,進行變形鏈球菌及內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備.將稀釋后的樣本DNA進行定量檢測并得到CT值.總反應(yīng)體系為20μL:細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)品或樣本DNA 2μL,上、下游引物各0.5μL,SYBR mixture 10ml,滅菌ddH20 7μL.循環(huán)參數(shù):95℃10min;95℃15s; 60℃30s;72℃30s,進行39個循環(huán).所有反應(yīng)在熒光定量PCR儀(Bio-Rad,美國)上進行,每個樣本檢測均設(shè)副管,取其平均值,每次反應(yīng)均設(shè)空白對照.

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

運用Microsoft Excel軟件對玻璃離子粘結(jié)劑組與聚羧酸鋅粘結(jié)劑組修復(fù)前后變形鏈球菌的相對定量值進行線性回歸分析,檢驗水準(zhǔn)α=0.05.對每個患者修復(fù)前后的菌斑指數(shù)做方差分析.

2　結(jié)果

2.1統(tǒng)計結(jié)果

比較兩組修復(fù)前與修復(fù)后1、3個月的菌斑指數(shù)(見表2),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與修復(fù)前比較,玻璃離子粘結(jié)劑組1、3個月的變形鏈球菌相對定量值減小(P<0.05),聚羧酸鋅粘結(jié)劑組1、3個月的變形鏈球菌相對定量值增加(P<0.05);同組中,維吾爾族患者修復(fù)前后變形鏈球菌相對定量值高于漢族患者(P<0.05),見表4.

2.2變形鏈球菌及內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)曲圖

本實驗通過對引物及反應(yīng)條件的不斷優(yōu)化,使得變形鏈球菌及內(nèi)參基因的擴增效率基本達到一致,可以用相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法對樣本中變形鏈球菌的表達進行相對定量分析(如圖1～2).

2.3臨床樣本real-time PCR結(jié)果檢驗

將樣本進行實時熒光定量檢測之后行電泳試驗,電泳圖顯示產(chǎn)物均為單一亮帶,未見引物二聚體(如圖3～4).

圖1　變形鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2　內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖3　樣本變形鏈球菌q-PCR產(chǎn)物電泳圖

圖4　樣本內(nèi)參基因q-PCR產(chǎn)物電泳圖

表1　引物序列表

表2　菌斑指數(shù)(±s)

表2　菌斑指數(shù)(±s)

注:與修復(fù)前比較,玻璃離子組與聚羧酸鋅組修復(fù)后菌斑指數(shù)均明顯升高(P<0.05)

組別玻璃離子組聚羧酸鋅組例數(shù)15 15 0個月0.81±0.65 0.87±0.84 1個月1.62±0.72 1.63±0.81 3個月1.50±0.73 1.56±0.96

3　討論

為研究烤瓷冠粘結(jié)劑的防齲性能,在眾多致齲菌中,我們選擇變形鏈球菌作為研究重點,是由于它在致齲菌群中顯現(xiàn)出的特性及代表性.目前關(guān)于變形鏈球菌的研究有很多,實驗表明,變形鏈球菌是主要致齲菌,它對牙體表面的黏附,是形成牙菌斑及致齲的關(guān)鍵.它能以蔗糖為底物合成胞外葡聚糖和果聚糖,它們參與牙菌斑生物膜基質(zhì)的形成,促進菌斑成熟,延長產(chǎn)酸時間,以增加變形鏈球菌的致齲性[8].

表3　玻璃離子粘結(jié)劑與聚羧酸鋅粘結(jié)劑組冠修復(fù)后S.mutans相對定量結(jié)果(±s)

表3　玻璃離子粘結(jié)劑與聚羧酸鋅粘結(jié)劑組冠修復(fù)后S.mutans相對定量結(jié)果(±s)

注:與修復(fù)前比較,玻璃離子粘結(jié)劑組1、3個月的變形鏈球菌相對定量值減小(P<0.05),聚羧酸鋅粘結(jié)劑組1個月、3個月的變形鏈球菌相對定量值增加(P<0.05)

粘結(jié)劑種類玻璃離子粘結(jié)劑聚羧酸鋅粘結(jié)劑修復(fù)后1個月0 . 7 0 ± 0 . 1 9 1 . 4 0 ± 0 . 1 5修復(fù)后3個月0 . 5 0 ± 0 . 2 3 2 . 2 3 ± 0 . 4 5

表4　維吾爾族、漢族患者冠修復(fù)后S.mutans相對定量結(jié)果(±s)

表4　維吾爾族、漢族患者冠修復(fù)后S.mutans相對定量結(jié)果(±s)

注:A組為玻璃離子組,B組為聚羧酸鋅組.同組中比較,維吾爾族患者冠修復(fù)后1、3個月的變形鏈球菌相對定量值高于漢族患者(P<0.05)

組別A組B組民族維吾爾族漢族維吾爾族漢族修復(fù)后1個月0 . 6 4 ± 0 . 2 0 0 . 7 6 ± 0 . 1 8 1 . 4 4 ± 0 . 1 0 1 . 3 6 ± 0 . 2 0修復(fù)后3個月0 . 4 1 ± 0 . 2 2 0 . 5 8 ± 0 . 2 3 2 . 3 4 ± 0 . 3 5 2 . 1 1 ± 0 . 6 2

口內(nèi)修復(fù)體與預(yù)備后的基牙牙體組織間存在一定的間隙,此間隙內(nèi)易積存唾液及食物殘渣,影響修復(fù)體固位,造成修復(fù)體松動、脫落及腐蝕變質(zhì),使用粘結(jié)劑材料粘結(jié),則可以有效減少邊緣微滲漏,從而避免對修復(fù)體的不良影響[9].玻璃離子水門汀與聚羧酸鋅水門汀是目前臨床上較常用的兩種烤瓷冠粘結(jié)劑.玻璃離子粘結(jié)劑可以釋放陽離子和氟離子,完全凝固時是由被離子橋交聯(lián)的聚陰離子基質(zhì)中的硅凝膠包裹玻璃粉而形成的復(fù)合物,在基質(zhì)內(nèi)是含有氟化物晶體的硅凝膠小顆粒,從而具有抑菌和殺菌作用.本研究結(jié)果顯示,與修復(fù)前比較,玻璃離子粘結(jié)劑組的變形鏈球菌在修復(fù)后1、3個月的相對定量值呈減小趨勢,聚羧酸鋅粘結(jié)劑組呈增加趨勢,此結(jié)果可能表示玻璃離子粘固劑可以抑制菌斑中致齲菌的聚集,降低基牙的致齲風(fēng)險.在冠內(nèi)修復(fù)體的相關(guān)研究中,研究者們曾得到相似的結(jié)論.賀璽、李江等[10]研究了3種不同粘結(jié)劑對修復(fù)體冠邊緣的微滲漏影響,結(jié)果顯示,玻璃離子粘固劑的修復(fù)冠邊緣抗微滲漏能力要優(yōu)于聚羧酸鋅粘固劑,導(dǎo)致齲病及其他不良的牙體牙周病變的可能性相對較低.Christian Apela等[11]的研究顯示,將含有抗菌基質(zhì)的物質(zhì)加入修復(fù)材料中,可以有效的在初始階段將齲病、牙周病及其他疾病的發(fā)生控制在最小范圍內(nèi).因此,在對待不同的臨床患者時,醫(yī)師可以有預(yù)防性的選擇,如對于齲敏感性較高,或者對側(cè)同名牙已患齲的患者,可以優(yōu)先考慮玻璃離子粘結(jié)劑進行粘冠.

健康的牙齦呈淡粉色,是修復(fù)體美觀的重要組成部分,牙齦與烤瓷冠的顏色形態(tài)同等重要,是產(chǎn)生良好的美觀效果的重要條件[12].然而,口腔內(nèi)烤瓷冠修復(fù)治療之后,基牙患牙齦炎的發(fā)生率很高. Taiji 0gawa等[13]研究表明,口腔內(nèi)修復(fù)體的存在,為細(xì)菌微生物的粘附與聚集及菌斑形成提供了生存的溫床,并且為齲病的發(fā)生提供了潛在的內(nèi)環(huán)境.修復(fù)體粘結(jié)后,齦上邊緣的縫隙由粘結(jié)劑填滿,菌斑即可以在此處形成.還有研究者認(rèn)為,表面粗糙度對菌斑的集聚作用最大,表面粗糙度越大,微生物的黏附量越大[14].菌斑指數(shù)為臨床上較常用且能綜合準(zhǔn)確判斷牙周病的重要指標(biāo),本研究的菌斑指數(shù)檢查結(jié)果顯示,與冠修復(fù)前相比較,冠修復(fù)后的菌斑指數(shù)均明顯升高.孔亞閣者[15]通過烤瓷冠修復(fù)前后牙周指標(biāo)的變化及齦溝液的炎癥介質(zhì)水平的研究,得出冠修復(fù)后6個月的牙周指標(biāo)都要明顯高于修復(fù)前,與本實驗結(jié)果一致.冠修復(fù)后,修復(fù)體表面很容易有細(xì)菌聚集,菌斑形成,因此,在冠戴入后要重視口腔衛(wèi)生保健,可以有效預(yù)防繼發(fā)齲和牙齦炎的發(fā)生.

新疆是一個多民族聚居的具有民族特色的地域,烏魯木齊的主要組成民族為漢族和維吾爾族,兩個民族在生活習(xí)俗和飲食習(xí)慣上有很大的不同.本研究結(jié)果示,冠修復(fù)前后維吾爾族患者較漢族患者的菌斑中變形鏈球菌定植為多,即患齲風(fēng)險要高于漢族.這應(yīng)該與不同民族飲食習(xí)慣的差異是密切相關(guān)的,維吾爾族的飲食主要以牛羊肉為主,烹飪方式以煮、烤為主[16],營養(yǎng)攝入量較均衡;漢族主要以蔬菜為主,食肉較少.除了與飲食習(xí)慣相關(guān),還與口腔保健意識,口腔衛(wèi)生習(xí)慣等因素有關(guān).

有研究顯示,在烤瓷冠修復(fù)中,患者的口腔衛(wèi)生保健起著舉足輕重的作用[17].因此,在行烤瓷冠修復(fù)后,需要非常重視修復(fù)體和牙周組織的健康,養(yǎng)成良好的口腔衛(wèi)生習(xí)慣,按時復(fù)診,與口腔醫(yī)師一同關(guān)注修復(fù)后的口腔維護,預(yù)防牙體牙周疾病的發(fā)生.

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編輯/何志斌

Study on different cements impacting on the changes of caries bacteria colonized on the edge of PFM crown

Rufiya.Zulati,ZHANG Lei,Paiheirdin.Kaiyser,Alina.Abdujilil,MA Hui,KANG Wen
(Department of Prosthodontics,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,Xinjiang,China)

ObjectiveTo determine the different cements that impact on the changes of caries bacteria colonized on the edge of PFM crown before and after restoration for different nationalities. Methods Randomly select thirty Han and Uygur nationality patients whose mandibular first molar palladium needs to be repaired by the silver alloy PFM crown.And then,the patients are divided into two groups according to the different cements used in the repair.We measured the quantitative values of streptococcus mutans before and after restoration by using quantitative fluorescence of polymerase chain reaction.Simultaneously,we observed the plaque indices in repairing process. Results The PLI of the two groups were significantly increased compared with the PLI before repair (P<0.05).The quantitative value of S.mutans in Glass-ion cement group after restoration in one and three months decreased compared with the value before restoration(P<0.05).And the quantitative value increased in polycarboxylic cements group compared with the value before restoration(P<0.05). Although in the same group,the quantity of S.mutans of Uygur nationality patients was higher than Han nationality patients(P<0.05).ConclusionGlass-ion cement may be able to reduce the caries risk of repaired-abutment teeth,the Uygur nationality patients are more likely to suffer tooth decay than Han nationality patients.

cements;PFM;S.mutans;Poly-merace Chain Reaction

R783

A

1008-6455(2015)06-0056-05

新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院院級青年科研專項基金(項目基金號:2012QN03)

迪麗努爾.阿吉,副教授,碩士生導(dǎo)師;研究方向:口腔修復(fù)學(xué);E-mail:dili106@hotmail.com

2014-12-20

2015-01-16