李柯妮，王康才*，梁永富，湯興利，金國虔，居明喬，吳闖，朱悅，馬新飛，邢順梅，邢海燕

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.中國藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198；3.南京中醫(yī)藥大學(xué) 江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023；4.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210028；5.江蘇龍升藥業(yè)有限公司，江蘇 東臺 224200；6.東臺市中醫(yī)院，江蘇 東臺 224200)

·專題·

江蘇省鹽城地區(qū)沿海灘涂野生枸杞資源調(diào)查與質(zhì)量分析評價△

李柯妮1，王康才1*，梁永富1，湯興利1，金國虔2，居明喬4，吳闖4，朱悅3，馬新飛3，邢順梅5，邢海燕6

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.中國藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198；3.南京中醫(yī)藥大學(xué) 江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023；4.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210028；5.江蘇龍升藥業(yè)有限公司，江蘇 東臺 224200；6.東臺市中醫(yī)院，江蘇 東臺 224200)

目的：對江蘇省鹽城地區(qū)沿海灘涂的野生枸杞資源進行調(diào)查及質(zhì)量分析評價，為該地區(qū)野生枸杞資源保護和開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用踏查和隨機設(shè)置樣方對東臺的野生枸杞資源進行調(diào)查，觀測沿海灘涂野生枸杞資源的分布、生長環(huán)境、生長特性、群落類型及伴生植物等；通過對總黃酮類、總生物堿類、總糖類、阿魏酸等資源性化學(xué)成分的分析，對產(chǎn)自江蘇省東臺、南京及山西等地的地骨皮藥材進行了品質(zhì)評價。結(jié)果：江蘇鹽城地區(qū)沿海灘涂野生枸杞資源分布密度較高，尤其是農(nóng)田地埂、河堤；江蘇東臺與南京、山西聞喜縣產(chǎn)地骨皮藥材相比，其所含總黃酮類和總生物堿類的含量較高，但水溶性總糖類的含量明顯低于后者，尚含有一定量的阿魏酸化學(xué)成分。結(jié)論：江蘇鹽城沿海灘涂地區(qū)適宜枸杞生長，質(zhì)量優(yōu)良，為我國沿海灘涂鹽漬化地區(qū)枸杞資源的保護利用和生產(chǎn)布局提供參考和借鑒。

枸杞；地骨皮；沿海灘涂；資源調(diào)查；質(zhì)量評價

枸杞LyciumchinenseMiller為茄科枸杞屬(LyciumLinn.)植物。枸杞的葉本草謂之天精葉，根皮稱地骨皮，均可入藥[3]。現(xiàn)代研究表明，地骨皮含有黃酮類、蒽醌類、生物堿類以及有機酸等多類生物活性成分。具有調(diào)節(jié)血糖、血脂，降血壓，解熱，抗菌，抗病毒等作用[4-5]。枸杞分布范圍廣，適應(yīng)性較強，對土壤要求不高，具有耐寒、耐瘠薄、抗旱、耐鹽堿等特性，尤其是耐鹽堿能力強。江蘇省沿海灘涂面積位居全國首位，約占全國灘涂總量的1/4，具有巨大的經(jīng)濟、環(huán)境、生態(tài)等開發(fā)利用潛力，被視為我國具有戰(zhàn)略價值的后備土地資源[1-2]?；谖墨I資料[8，14]記載并結(jié)合江蘇省中藥資源普查(試點)工作，我們對江蘇沿海灘涂枸杞資源分布情況、生態(tài)環(huán)境等進行了實地考察，并將產(chǎn)自江蘇省東臺區(qū)域的地骨皮藥材與南京、山西所產(chǎn)樣品的品質(zhì)進行了分析評價，為我國沿海灘涂鹽漬化地區(qū)枸杞資源的保護利用和生產(chǎn)布局提供參考和借鑒。

1 野生枸杞資源調(diào)查

在查閱文獻的基礎(chǔ)上，采用線路調(diào)查與隨機設(shè)置樣地調(diào)查法相結(jié)合的方法，以江蘇省東臺市為調(diào)查區(qū)域。在調(diào)查過程中，以野生枸杞資源分布、生長環(huán)境、生長特性、群落類型及伴生植物等為主要調(diào)查內(nèi)容。

2 儀器與材料

2.1 儀器

SPD-20A液相色譜儀(島津)；KH5200B型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；電子天平ISO9001；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG90A(上海索譜儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-54C(鞏義市英峪予華儀器廠)；紫外可見分光光度計077414070003(上海儀電分析儀器有限公司)。

2.2 材料

阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110773-201313)，鹽酸小檗堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：0713-200107)，蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：0080-9705)，蔗糖對照品(分析純，西隴化工股份有限公司)，甲醇、乙腈為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

地骨皮分別采集于江蘇省東臺市、南京市紫金山、山西省聞喜縣，經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)王康才教授鑒定為茄科植物枸杞Lyciumchinense的干燥根皮。經(jīng)凈制處理和真空干燥箱60 ℃烘干，粉碎機粉碎，過60目篩，備用。

3 方法與結(jié)果

3.1 東臺枸杞資源分布調(diào)查

東臺市位于江蘇省中部平原區(qū)，處于鹽城、南通、泰州三市的交匯地帶，地理坐標在32°33′～32°57′N，120°07′～120°53′E。東臺市東臨黃海，南與海安縣毗鄰，西南與姜堰市接壤，西與興化市相鄰，北與大豐市交界。海岸線全長85 km，江蘇省東臺市有豐富的沿海灘涂資源，10.33萬hm2的灘涂面積，構(gòu)成了一道“黃金海岸”[6-7]。

實地生態(tài)調(diào)查表明，江蘇鹽城地區(qū)沿海灘涂區(qū)域為枸杞植物適生區(qū)和自然分布區(qū)，尤以東臺行政區(qū)域野生枸杞資源分布集中，蘊藏量大。多生長于路邊、水溝旁、農(nóng)田地埂、溝谷等處。生物學(xué)觀察表明，該地區(qū)自然生長的枸杞群落多呈蔓生灌木狀，高約1 m，植株水平根很發(fā)達，直根弱，主枝數(shù)條粗壯，果枝細長，先端通常彎曲下盤，外皮淡灰黃色，刺狀枝短而細，生于葉腋，葉互生或叢生于短枝上，葉片披針形或卵狀長圓形。在當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)集市調(diào)查，可見群眾采收有枸杞嫩葉食用或售賣、以及采挖根皮稱地骨皮出賣和收購的情況。

東臺的枸杞主要生長在喬木林中，如：銀杏Ginkgobiloba、意大利楊Populuseuramevicanacv.‘I-214’。伴生植物多為草本，如益母草Leonurusartemisia、野老鸛草Geraniumcarolinianum、野胡蘿卜Daucuscarota、蒲公英Taraxacummongolicum、風(fēng)輪菜Clinopodiumchinense、澤漆Euphorbiahelioscopia、紫花地丁Violaphilippica以及農(nóng)田雜草等。枸杞主要生長區(qū)域氣候特點是常年平均氣溫14.6 ℃左右，無霜期220 d，年降水量1050 mm，日照2200 h左右，四季分明，雨量集中，雨熱同季，冬冷夏熱，春溫多變，秋高氣爽，日照充足；枸杞生長區(qū)域土壤主要是灰沙土、黃泥沙土、紅沙土等。東臺地區(qū)沿海灘涂野生枸杞資源集中分布區(qū)域見圖1。

圖1 江蘇省東臺市沿海灘涂野生枸杞資源集中分布區(qū)域圖

3.2 地骨皮中水溶性總糖含量測定

水溶性總糖含量測定參照文獻[9]的方法，采用蒽酮比色法進行測定。

精密稱取分析純蔗糖1.000 g加少量水溶解，置100 mL量瓶中，加入0.5 mL濃硫酸，蒸餾水定容至刻度，得1%蔗糖溶液。精密吸取1%蔗糖標準液1 mL加入100 mL容量瓶中，加水至刻度得到100 μg·L-1的對照溶液。取20 mL刻度管18支，每組重讀3次，量取對照品溶液各0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加水至2 mL。然后按順序向試管中加入0.5 mL蒽酮乙酸乙酯試劑和5 mL濃硫酸，充分震蕩，立即放入沸水浴中，逐管均準確保溫1 min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630 nm波長下測其吸光度，以糖的含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，線性范圍：0～100 μg，得到回歸方程Y=0.007 8X+0.020 1，r=0.999 5。

稱取不同產(chǎn)地的地骨皮，每份0.1 g，3個重復(fù)，放入試管中，加入5 mL蒸餾水，封口，于沸水中提取30 min，提取2次，冷卻過濾到25 mL容量瓶中，用蒸餾水反復(fù)漂洗試管及殘渣并定容至刻度，吸取每個樣品提取液0.5 mL于玻璃試管中，加蒸餾水1.5 mL，以下步驟與標準曲線測定相同，測定樣品的吸光度，計算可溶性糖的含量，結(jié)果見表1。從表1中可以看出，東臺的地骨皮藥材與南京、山西聞喜的相比較，總糖含量明顯低于后兩者，為3.951%。

3.3 地骨皮中總黃酮含量測定

采用回流法提取，紫外分光光度儀測定不同產(chǎn)地地骨皮中總黃酮的含量[10]。

精密稱取蘆丁對照品20.48 mg，置100 mL量瓶中，加30%乙醇，置水浴上微熱使其溶解并定容得質(zhì)量濃度為0.204 8 mg·mL-1對照品溶液。根據(jù)《中國藥典》方法[11]，量取對照品溶液各1、2、3、4、5、6 mL 置25 mL容量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在500 nm波長處測定吸光度，重復(fù)5次，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，線性范圍：8.192～49.125 μg·mL-1，得到回歸方程Y=0.129 2X-0.070 3，r=0.999 2。

精密稱取每個產(chǎn)地的地骨皮約1 g，每個產(chǎn)地重復(fù)取3次，加入75%乙醇，料液比1∶10，熱回流2 h，總共提取2次，過濾，合并濾液用75%乙醇定容至50 mL，從中量取1 mL進行總黃酮測定，方法同標準曲線測定方法一致，結(jié)果見表1。從表1中可以看出，東臺與山西聞喜的地骨皮中所含的總黃酮含量差異不明顯，南京地骨皮中總黃酮含量最低，東臺地骨皮中總黃酮質(zhì)量分數(shù)為13.735 mg·g-1。

3.4 地骨皮中總生物堿含量的測定

采用三氯甲烷超聲提取，分光光度儀測定不同產(chǎn)地地骨皮中總生物堿的含量[12]。

精密稱取鹽酸小檗堿對照品0.030 g，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻得質(zhì)量濃度為300 μg·mL-1的對照品溶液。精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL，補水至1 mL，加入5 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=5.4)，再加入溴甲酚綠指示液2.0 mL，搖勻，精密加入三氯甲烷10.0 mL，充分振搖，靜置1 h，分取三氯甲烷層，加無水Na2SO4脫水后，于416 nm下測定吸光度值，重復(fù)5次。以取樣量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，計算得回歸方程Y=0.196 7X-0.160 1，r=0.995 6，線性范圍：30～240 μg·mL-1。

精密稱取地骨皮1.5 g，每個產(chǎn)地3個重復(fù)，加氨水1.5 mL，三氯甲烷30 mL，超聲提取1.5 h，過濾，殘渣以10 mL三氯甲烷分3次洗滌，合并濾液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60 ℃下回收三氯甲烷至干，取三氯甲烷10 mL溶解，然后取1 mL溶解液置于10 mL容量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，從中取0.5 mL溶解進行測定，方法同標準曲線測定方法一致，結(jié)果見表1。從表1中可以看出，東臺的地骨皮中總生物堿含量顯著高于南京與山西聞喜，質(zhì)量分數(shù)高達55.940 mg·g-1。

3.5 地骨皮中阿魏酸含量的測定

采用超聲波提取，HPLC測定不同產(chǎn)地地骨皮中阿魏酸的含量[13]。

色譜條件：色譜柱為安捷倫HC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈(A)-0.5%三氟乙酸水溶液(B)，梯度洗脫，0～3 min時10% A，3～10 min 時10%～12% A，10～20 min時12%～14% A，20～35 min時14%～15% A；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30℃；檢測波長為278 nm；進樣量為10 μL。

精密稱取阿魏酸對照品2.30 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為230 μg·mL-1的對照品溶液。將其依次稀釋成質(zhì)量濃度分別為4.6、11.5、23.0、57.5、115.0、230.0 μg·mL-1，按以上色譜條件測定，重復(fù)進樣5次，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程和線性范圍，阿魏酸的線性范圍為4.6～230 μg·mL-1，回歸方程為Y=54 589X-19 357，r=0.999 1。色譜圖見圖2。

注：A.阿魏酸對照品；B.地骨皮樣品。圖2 阿魏酸對照品與地骨皮樣品HPLC圖

取地骨皮粉末約1.5 g，每個產(chǎn)地重復(fù)3次，置錐形瓶中，加甲醇10 mL，冷浸1 h，40 ℃超聲處理1 h，靜置放冷至室溫，用10 mL甲醇分2次洗滌殘渣，過濾，合并兩次濾液，蒸干；殘留物放入2 mL容量瓶用甲醇分次溶解，并定容至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，濾液置于冰箱中備用，按以上色譜條件進行檢測，結(jié)果見表1。從表1中可以看出，東臺產(chǎn)地骨皮比南京的所含阿魏酸含稍低，山西聞喜的地骨皮中阿魏酸含量最低，東臺地骨皮中阿魏酸質(zhì)量分數(shù)為23.452 μg·g-1。

表1 不同產(chǎn)地地骨皮中資源性化學(xué)成分含量

注：各列不同小寫字母表示處理間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

4 討論

經(jīng)實地調(diào)查表明，枸杞具有較強的適應(yīng)性，對溫度、光照、土壤要求不嚴格，可在干旱地、沙地、鹽堿地上種植。對于荒灘、鹽堿地較多的地區(qū)，枸杞可在沿海灘涂pH值7.8～8.5、鹽分2.0%～2.5%的鹽漬化區(qū)域等重鹽堿地生長[15]。因此，根據(jù)江蘇沿海灘涂地區(qū)枸杞資源蘊藏量大的現(xiàn)狀，建議在不破壞生態(tài)環(huán)境的前提下，可有序?qū)﹁坭劫Y源進行開發(fā)利用和更新。同時，研究也為該類區(qū)域的生態(tài)環(huán)境改造和發(fā)展適宜的藥用經(jīng)濟資源提供了有價值的參考。

江蘇東臺產(chǎn)地骨皮總黃酮類、總生物堿類和阿魏酸資源性化學(xué)成分的含量較高。黃酮類物質(zhì)是植物體內(nèi)具有廣泛活性的化學(xué)物質(zhì)，常具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、保護血管內(nèi)皮、改善血液流變學(xué)及對心腦血管疾病的良好作用[16-18]。生物堿類化學(xué)成分大多具有明顯的生理活性，其中一些生物堿類物質(zhì)的鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗癌等活性逐漸被發(fā)現(xiàn)[19]。阿魏酸是植物代謝過程中生物合成的一類酚酸小分子成分，具有抗血小板聚集、抑制血小板5-羥色胺釋放、抑制血小板血栓素A2生成、增強前列腺素活性、鎮(zhèn)痛、緩解血管痙攣等作用，對腦血管和血細胞減少有較好的生物活性[20-21]。由此提示該資源在醫(yī)藥領(lǐng)域可能具有的開發(fā)利用潛力和價值。同時，阿魏酸作為一種化感物質(zhì)，在根內(nèi)可以表現(xiàn)出抑制競爭性植物生長的作用，在枸杞生長的過程中可能會產(chǎn)生一定的影響[22]。這可能與沿海灘涂鹽漬化環(huán)境及其該區(qū)域枸杞大多生長在紅沙土、黃泥沙土中，肥力不高，土質(zhì)黏或偏砂，肥力中等偏下，水肥氣熱不夠協(xié)調(diào)，有的甚至生長在砂性潮鹽土中，土壤肥力低下，亞鐵和鹽分等生態(tài)因子逆境脅迫有關(guān)[23]。植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)性狀，常常以糖含量作為重要指標。

綜上表明，枸杞可以作為我國沿海灘涂鹽漬化區(qū)域適宜發(fā)展的藥用植物資源種類，不僅為日益緊缺的地骨皮藥材生產(chǎn)提供良好穩(wěn)定的生產(chǎn)基地，尚可利用其深根性特點起到有效的固土護坡、防止水土流失的作用，以及在沿海工業(yè)園區(qū)作為綠化觀賞樹種進行種植，具有栽植容易、管理簡單、觀賞期較長的綠化優(yōu)勢等。

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ResourceInvestigationandQualityEvaluationofLyciumchinenseofCoastalTidalMudflatinYanchengJiangsu

LIKeni1，WANGKangcai1*，LIANGYongfu1，TANGXingli1，JINGuoqian2，JUMingqiao4，WUChuang4，ZHUYue3，MAXinfei3，XINGShunmei5，XINGHaiyan6

(1.CollegeofHorticulture，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China；2.SchoolofTraditionalChinesePharmacy，ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing211198，China；3.JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China；4.JiangsuProvincialAcademyofChineseMedicine，Nanjing210028，China；5.JiangsuLongshengPharmaceuticalCO.，LTD.，Dongtai224200，China；6.DongtaiHospitalofTCM，Dongtai224200，China)

Objective：To investigate and evaluateLyciumchinenseresources in coastal tidal mudflat of Yancheng Jiangsu Province，and provide the basis for protection and development ofL.chinenseresources.Methods：On the basis of reconnoiter and sample-plot surveys，the resources distribution，habits，growth characteristics，community types and associated plants ofL.chinensein Dongtai were investigate.The quality of Cortex Lycii Radicis from Dongtai，Shanxi and Nanjingwas analyzed and evaluated through the determination of the soluble sugar，total flavonoids，total alkaloids，ferulic acid.Results：The resources distribution density ofL.chinenseof coastal tidal mudflat in Yancheng Jiangsu was high，especially in farmland ridge and valleys.The content of tatal flavonoids and total alkaloids is relative high，which were 13.735 mg·g-1and 55.619 mg·g-1，respectively，the soluble sugar content of Cortex Lycii Radicis from Dongtai was 3.951%，significantly lower than that of Cortex Lycii Radicis from Nanjing and Wenxi，the content of ferulic acid was 23.452 μg·g-1.Conclusion：Yancheng Jiangsu coastal tidal mudflat area is suitable to growL.chinense，the quality is good.The study provides a reference for the development and utilization ofL.chinensein coastal tidal mudflat in Yancheng Jiangsu.

LyciumchinenseMiller；Cortex Lycii Radicis；coastal tidal mudflat；resource investigation；quality evaluation

2015-05-01)

國家公益性行業(yè)科研專項(201407002)；江蘇省優(yōu)勢學(xué)科(中藥學(xué))二期建設(shè)工程項目(2014)

*

王康才，教授，研究方向：藥用植物栽培、育種；E-mail：wangkc@njau.edu.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.002