魏文龍，黃林芳

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193)

·中藥農(nóng)業(yè)·

市售不同加工方法當(dāng)歸的GC-MS分析△

魏文龍，黃林芳*

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193)

目的：開展不同加工方法對(duì)市售當(dāng)歸藥材中揮發(fā)油含量影響的研究，為建立當(dāng)歸藥材合理的加工工藝提供科學(xué)依據(jù)。方法：收集不同加工處理的當(dāng)歸藥材，運(yùn)用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)測(cè)定揮發(fā)油含量，應(yīng)用含量數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析(PCA)。結(jié)果：煙熏和曬干處理的當(dāng)歸品質(zhì)較優(yōu)，硫熏和酒炙品質(zhì)較差；硫熏、酒炙和曬干三種加工處理的當(dāng)歸藥材能夠明顯區(qū)分開，煙熏與曬干較接近；揮發(fā)油中鑒定出22個(gè)化合物，其主要成分藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A的相對(duì)含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%。結(jié)論：該研究探究不同加工方法對(duì)當(dāng)歸藥材揮發(fā)油含量影響，為硫熏工藝規(guī)范化奠定基礎(chǔ)。

當(dāng)歸；加工方法；成分含量；GC-MS

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，性溫，味甘、辛，具有補(bǔ)血活血調(diào)經(jīng)止痛潤(rùn)腸通便之功效[1]。苯酞類化合物為當(dāng)歸揮發(fā)油中主要活性成分，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明此類化合物具有抗血栓、平喘、鎮(zhèn)痛、抑制平滑肌痙攣等廣泛藥理作用[2-4]。藥材生產(chǎn)加工工藝會(huì)對(duì)藥材質(zhì)量產(chǎn)生很大影響，從而影響臨床療效。不同的種植戶采用不同的方法干燥，除傳統(tǒng)煙熏外，還有曬干、陰干等方法，其產(chǎn)地加工無(wú)規(guī)范的指南，存在一定的盲目性和隨意性。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，在當(dāng)歸的主要產(chǎn)區(qū)甘肅，當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)在加工過(guò)程中為了使藥材色澤潔白和防腐，采用硫磺熏制的現(xiàn)象較為普遍[5-6]，而硫磺熏蒸會(huì)使藥材中的化學(xué)成分發(fā)生改變，并伴有SO2殘留，會(huì)嚴(yán)重影響到用藥安全性[7-8]。本實(shí)驗(yàn)收集甘肅岷縣當(dāng)歸藥材市場(chǎng)上硫熏、煙熏、曬干、酒炙的藥材，應(yīng)用氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對(duì)其中的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，測(cè)定藥材中4種苯酞類成分含量，考察不同加工方法對(duì)藥材化學(xué)成分的影響，從而為當(dāng)歸質(zhì)量控制提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試藥

安捷倫6890氣相色譜儀；氫火焰離子化檢測(cè)器；HP-5石英毛細(xì)管氣相色譜柱(HP公司，30 m×0.25 mm)；乙酸乙酯(分析純，北京化工廠)，對(duì)照品，藁本內(nèi)酯Ligustilide(批號(hào)：MUST-11072416)、正丁基苯酞n-Butylphthalide(批號(hào)：MUST-12020706)、丁烯基苯酞Butylidenephthalide(批號(hào)：MUST-12071103)、洋川芎內(nèi)酯A senkyunolide A(批號(hào)：MUST-10102309)均購(gòu)于成都曼思特生物科技有限公司，純度經(jīng)高效液相色譜分析大于98%。

當(dāng)歸藥材統(tǒng)一購(gòu)自甘肅省岷縣當(dāng)歸城藥材市場(chǎng)(見表1)，藥材上部主根圓柱形，下部分出多條支根，表面棕黃色或黃褐色，斷面黃白色或淡黃色，具油性，氣芳香，味甘微苦，無(wú)須根、雜質(zhì)、蟲蛀、霉變。硫熏當(dāng)歸外表色澤金黃，聞起來(lái)有明顯的硫磺味；曬干當(dāng)歸呈土褐色，無(wú)異味；煙熏當(dāng)歸表面黃褐色，香氣濃；酒炙當(dāng)歸切面深黃色，味甘、微苦，香氣濃厚，有酒香氣(見表2)。

表1 不同加工方法當(dāng)歸藥材列表

表2 不同加工處理當(dāng)歸外觀及氣味比較

1.2 對(duì)照品溶液制備

稱取洋川芎內(nèi)酯A，正丁基苯酞、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞6 mg于10 mL棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，混勻。

1.3 供試品溶液的制備

有機(jī)溶劑超聲提取法：取干燥當(dāng)歸藥材粉碎，過(guò)四號(hào)篩，精密稱取粉末1 g于100 mL具塞錐形瓶中，加50 mL乙酸乙酯溶劑超聲提取30 min，過(guò)濾，重復(fù)提取一次，合并提取液，離心上清液用定容于100 mL量瓶中，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，備用。

1.4 色譜條件

安捷倫6890氣相色譜儀：50 ℃開始保留2 min，以10 ℃/min升至250 ℃，保留10 min，進(jìn)樣量1.0 μL，分流比1∶10；載氣高純N2，尾吹氣高純N2，氣化室溫度250 ℃，檢測(cè)室溫度250 ℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

取標(biāo)準(zhǔn)品溶液至進(jìn)樣瓶中，分別進(jìn)樣1、2、3、4、5 μL進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(見圖1)。

2.2 精密度試驗(yàn)

取0.1 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣量1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，4種苯酞類化合物峰面積RSD值為0.21%，表明儀器精密度良好。

2.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一批次的甘肅岷縣當(dāng)歸樣品，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定，各對(duì)照品色譜峰的峰面積在0.52%～1.84%范圍內(nèi)，表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取上述供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24、36 h，按前述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，各對(duì)照品色譜峰的峰面積對(duì)應(yīng)的濃度的RSD值在0.76%～2.25%范圍內(nèi)，表明樣品至少在36 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已測(cè)知含量的同一批次(甘肅岷縣-DG1)樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別精密加入一定量(相當(dāng)于樣品中的量)4種對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法操作，按上述色譜條件測(cè)定。4種成分的回收率在98.33%～102.22%，RSD值在1.16%～4.72%之間[9-10]。

圖1 苯酞類成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 樣品測(cè)定

取9種不同加工處理方法的市售當(dāng)歸樣品，按1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取5 uL進(jìn)樣，平行測(cè)定3次，計(jì)算當(dāng)歸中洋川芎內(nèi)酯A、正丁基苯酞、藁本內(nèi)酯的含量[11-12]，色譜分離圖(見圖2)，結(jié)果見表3和圖3。

表3 苯酞類成分的含量測(cè)定結(jié)果 /mg·g-1

圖2 不同加工方法當(dāng)歸藥材GC-MS指紋圖譜

2.7 結(jié)果分析與成分鑒定

9種市售當(dāng)歸藥材GC-MS指紋圖譜(如圖2)所示。結(jié)合表3、圖3分析，不同加工方法當(dāng)歸藥材及飲片中，正丁基苯酞質(zhì)量分?jǐn)?shù)排序?yàn)椋簜鹘y(tǒng)煙熏≈酒炙>曬干>硫熏。丁烯基苯酞質(zhì)量分?jǐn)?shù)排序?yàn)椋簳窀?傳統(tǒng)煙熏>酒炙>硫熏。洋川芎內(nèi)酯A質(zhì)量分?jǐn)?shù)排序?yàn)椋壕浦?曬干>傳統(tǒng)煙熏>硫熏。蒿本內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)排序?yàn)椋簜鹘y(tǒng)煙熏>曬干>硫熏>酒炙。煙熏、曬干、硫熏、以及酒炙當(dāng)歸四者進(jìn)行比較，硫熏與酒炙當(dāng)歸含量較低，而曬干當(dāng)歸與煙熏當(dāng)歸較為相似且較高。將硫熏與曬干當(dāng)歸比較分析，當(dāng)歸經(jīng)硫熏后四種苯酞類成分的含量均呈降低趨勢(shì)，其中藁苯內(nèi)酯降低最為明顯，含量下降58%，正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A分別下降49%、38%和27%。將含量測(cè)定結(jié)果導(dǎo)入Simca-P軟件，進(jìn)行PCA分析，2個(gè)主成分累計(jì)解釋率達(dá)88.69%，發(fā)現(xiàn)硫熏、曬干、酒炙三種不同加工處理的當(dāng)歸藥材能夠明顯區(qū)分開來(lái)(見圖3)，且煙熏與曬干較接近。

圖3 不同加工方法當(dāng)歸藥材PCA分析

利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)聯(lián)機(jī)分析，經(jīng)計(jì)算機(jī)譜庫(kù)(WILEY)檢索及與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照，采用面積歸一法共鑒定出22種化合物[13-14]。其中主要成分為藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A，相對(duì)含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%(見表4)。

表4 當(dāng)歸主要揮發(fā)油的化學(xué)成分及相對(duì)含量

3 結(jié)論

應(yīng)用GC-MS法測(cè)定當(dāng)歸藥材，共鑒定出22種化合物。定性分析表明，其主要成分為藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A、二十三酸。不同加工方法的當(dāng)歸品質(zhì)呈現(xiàn)差異。其中曬干和煙熏當(dāng)歸質(zhì)量較優(yōu)，硫熏當(dāng)歸質(zhì)量較差。曬干當(dāng)歸雖然質(zhì)量較好，但當(dāng)歸藥材富含油脂類成分，在保存過(guò)程中容易引起蟲蛀，不宜長(zhǎng)期保存。煙熏當(dāng)歸是傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式，具有外觀品相欠佳，煙熏過(guò)程的溫度、時(shí)間及操作方式多依靠主觀經(jīng)驗(yàn)等缺陷，且煙熏產(chǎn)生的煙塵顆粒物會(huì)使當(dāng)歸藥材有效成分和無(wú)機(jī)元素的含量及分布發(fā)生變化。硫熏當(dāng)歸是一種較為廣泛應(yīng)用的加工方法，雖具有殺菌、防蟲、容易操作、花費(fèi)較低及色澤較好的優(yōu)點(diǎn)，但硫化物及砷有害殘留嚴(yán)重影響當(dāng)歸藥材品質(zhì)[15]。已有學(xué)者報(bào)道通過(guò)控制硫熏過(guò)程中的含氧量、溫度和硫磺量等參數(shù)來(lái)保障藥材品質(zhì)[16]。目前，因曬干方法簡(jiǎn)便，成本較低且能保障當(dāng)歸品質(zhì)，大部分栽種者仍采用此種方法，但曬干當(dāng)歸較易引起蟲蛀，未能進(jìn)行長(zhǎng)期保存，未來(lái)尋求一種防蛀方法是當(dāng)歸長(zhǎng)久貯藏和品質(zhì)保障的重要先決條件，也將是當(dāng)歸加工貯藏規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化的重點(diǎn)之一。

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StudiesonthedifferentprocessedcommercialRadixAngelicaSinensisbasedonGC-MSandChemometrics

WEIWenlong，HUANGLinfang*

(InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China)

Objective：the research for the difference of volatile oil content was carried out to establish a reasonable processing technology for RadixAngelicaSinensis.Method：nine different processed RadixAngelicaeSinensiswere collected，GC-MS was used to qualitatively and quantatively analyze the volatile oil content，and content data were applicated in the principal component analysis.Results：the quality of smoked and sun-dried samples was better than sulfur-fumigated and wine-processed samples；different processed samples were distinguished clearly；22 compounds were identified，and the relative contents of main compounds including ligustilide，dibutyl phthalate，n-Butylphathlide，butylidenephthalide，senkyunolide A and tricosanoic acid were 53.55%，23.66%，3.89%，4.20%，2.06%，2.88%.Conclusion：The study explored the difference of volatile oil content in processed RadixAngelicaeSinensis，and laid the foundation for standardization of sulfur-fumigation.

RadixAngelicaeSinensis；Processing method；Volatile oil；GC-MS

2014-12-18)

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81274013，81473315)；國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(81130069)

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黃林芳，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源與質(zhì)量評(píng)價(jià)研究；Tel：(010)57833197， E-mail：lfhuang@implad.ac.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.014