王丹，馬青松，范佐旺，李小婷，宛駿，袁蕾，陳曉鷺，鄒純禮，龐玉新*

(1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室/海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發(fā)展有限公司，海南 ?？?570208)

·中藥農(nóng)業(yè)·

DA-6對冬季遲緩期的艾納香生長和有效成分含量的影響△

王丹1，馬青松1，范佐旺1，李小婷1，宛駿1，袁蕾1，陳曉鷺1，鄒純禮2，龐玉新1*

(1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室/海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發(fā)展有限公司，海南 ?？?570208)

目的：研究DA-6對冬季遲緩期艾納香生長和有效成分含量的影響。方法：以一年生艾納香種子苗為實(shí)驗(yàn)材料，在冬季艾納香生長遲緩期進(jìn)行3次噴施DA-6。測定艾納香的株高、地徑、葉長和葉寬等生長指標(biāo)以及葉干重。分別采用紫外可見分光光度法和GC法測定艾納香葉片總黃酮和l-龍腦的相對含量，并計(jì)算絕對含量。結(jié)果：DA-6顯著促進(jìn)艾納香生長，增加葉干重，其中10 mg·L-1DA-6作用的效果最顯著。DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。CK處理組總黃酮和l-龍腦相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。DA-6顯著提高了總黃酮和l-龍腦的絕對含量。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦含量最高，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍和3.33倍。結(jié)論：因此，在冬季艾納香生長遲緩期施加DA-6可以促進(jìn)艾納香生長和葉干重的增加，提高總黃酮和l-龍腦的絕對含量。

DA-6；艾納香；遲緩期；l-龍腦；總黃酮；葉

艾納香為菊科(Asteraceae)植物艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.的新鮮或干燥地上部分，別名大風(fēng)艾、大葉艾等，具有祛風(fēng)除濕、溫中止瀉、活血解毒等功效，還具有促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷的作用[1-3]。艾納香廣泛分布于我國的海南、貴州、云南等省[4]。主要含有揮發(fā)油類、黃酮類成分以及倍半萜類等化合物，其主要成分為揮發(fā)油類成分l-龍腦(l-borneol)[5-7]。施肥是提高藥材產(chǎn)量和質(zhì)量的有效途徑[8]。在艾納香道地產(chǎn)區(qū)貴州省羅甸等地很少對栽培艾納香施肥或僅施少量鈣鎂磷肥。何元農(nóng)等[9]施用農(nóng)家肥圈肥、油枯和柴灰，以及尿素、過磷酸鈣和氯化鉀和復(fù)合肥等，結(jié)果表明施肥組的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量和生物產(chǎn)量高于對照組，且有效成分含量不減。其中氮肥對生物產(chǎn)量增加作用明顯，得油率和l-龍腦含量與K肥用量呈正相關(guān)關(guān)系。何元農(nóng)等[10]研究證實(shí)氮肥可以提高艾納香藥材的產(chǎn)量和有效成分的含量。王丹等[11]研究發(fā)現(xiàn)錳元素極顯著的提高冬季生長遲緩期的艾納香生長指標(biāo)和生物量，對l-龍腦和總黃酮的相對含量的提高無顯著影響，但是極顯著提高了其絕對含量，即單株質(zhì)量。因此，如何在獲得較高產(chǎn)量的同時(shí)，顯著增加有效成分的含量，是艾納香施肥亟待解決的問題。

DA-6(二烷氨基乙醇羧酸酯，胺鮮酯)是一種新式細(xì)胞分裂素類的植物生長調(diào)節(jié)劑[12]，具有生長素、赤霉素和細(xì)胞分裂素等多種功能。眾多研究證實(shí)，DA-6可以提高植物葉綠素、核酸和蛋白質(zhì)等含量，進(jìn)而促進(jìn)植物光合作用，增加過氧化物酶和硝酸還原酶的活性。同時(shí)，DA-6還可以促進(jìn)植物細(xì)胞分裂、伸長以及C、N代謝等[13-14]。具有安全、高效、價(jià)格低廉以及使用方便等特點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景[15]。根據(jù)美國農(nóng)業(yè)部的報(bào)道，少量的DA-6可使甜菜等經(jīng)濟(jì)作物增產(chǎn)50%，豆類增產(chǎn)60%，也可以使人參長得如香蕉一樣粗大[13]。目前未見有關(guān)DA-6對艾納香的肥效研究。因此，在課題組前期研究的基礎(chǔ)上，在海南的冬季艾納香生長的遲緩期，進(jìn)行不同濃度的DA-6對艾納香生長指標(biāo)、生物量以及有效成分相對含量和絕對含量影響的肥效研究。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇一年生艾納香種子苗，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所龐玉新副研究員鑒定為艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.。于2014年1月27日開始，每隔10 d進(jìn)行葉面噴施DA-6，共施肥3次。于3月7日進(jìn)行取樣。分別設(shè)置1、10和100 mg·L-1DA-6 處理組，另設(shè)空白對照組(CK)，不進(jìn)行任何處理。

1.2 試驗(yàn)儀器和試劑

7890A氣相色譜儀(美國安捷倫科技公司)，F(xiàn)ID氫火焰離子化檢測器(美國安捷倫科技公司)，G4513A 16位自動(dòng)進(jìn)樣器(美國安捷倫科技公司)，2012-PCS紫外分光光度計(jì)(尤尼柯(上海)儀器有限公司)，CPA225D電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，KQ-500DB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；左旋龍腦對照品(阿法埃莎化學(xué)有限公司，批號為10147015，純度>98%)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707，純度：92.5%)；水楊酸甲酯(天津光復(fù)精細(xì)化工研究所)，乙酸乙酯、甲醇、氫氧化鈉(西隴化工股份有限公司)，亞硝酸鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，九水合硝酸鋁(廣州化學(xué)試劑廠)均為國產(chǎn)分析純。DA-6購自鄭州神雨生物制品有限公司。

1.3 生長指標(biāo)的測定

用直尺和卷尺分別測量株高、葉長和葉寬，使用電子游標(biāo)卡尺測量地徑，陰干后用天平測量葉干重。

1.4 總黃酮相對含量和絕對含量測定

1.4.1 對照品溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 對照品溶液的配制以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備同王丹等[11]實(shí)驗(yàn)中所用方法。

1.4.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取艾納香葉(過20目篩)粉末1.000 0 g，至具塞錐形瓶中，加甲醇溶液50 mL，稱定重量，冷浸30 min后，在超聲頻率為80 Hz的超聲清洗器中超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后過濾，取濾液作為供試品。

1.4.3 方法學(xué)考察 分別按照精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果均表明該測定方法良好。

1.4.4 總黃酮相對含量測定 進(jìn)行供試品溶液吸光度指測定，計(jì)算艾納香不同部位總黃酮相對含量，為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，單位為%。

1.4.5 總黃酮絕對含量計(jì)算 總黃酮的絕對含量為艾納香總黃酮產(chǎn)量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質(zhì)量。

總黃酮絕對含量=不同部位總黃酮相對含量/100×對應(yīng)部位藥材生物量，單位為g/株。

1.5 左旋龍腦含量測定

1.5.1l-龍腦含量測定 采用GC法測定艾納香葉片中l(wèi)-龍腦含量，具體見王丹等[11]實(shí)驗(yàn)中采用方法。并且，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收試驗(yàn)均表明該方法良好。所得為艾納香葉片中l(wèi)-龍腦的相對含量。

1.5.2l-龍腦絕對含量計(jì)算l-龍腦的絕對含量為艾納香總黃酮產(chǎn)量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質(zhì)量。

l-龍腦絕對含量=不同部位l-龍腦相對含量/100×對應(yīng)部位藥材生物量，單位為g。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入及圖表的繪制，采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與One-way ANOVA方差分析，并用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 DA-6對艾納香生長指標(biāo)的影響

方差分析結(jié)果表明，不同濃度DA-6處理，艾納香株高在各處理間差異顯著(P<0.05)，地徑、葉長和葉寬差異極顯著(P<0.01)。由表1可見，較CK處理相比，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的株高顯著增加了49.71%和48.87%。1、10和100 mg·L-1DA-6處理組的葉長和葉寬均極顯著高于CK處理，其中葉長分別是CK的1.89、2.26和2.22倍。

表1 DA-6對艾納香生長指標(biāo)的影響

注：*表示不同處理間在0.05水平差異顯著；**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.2 DA-6對艾納香葉干重的影響

方差分析結(jié)果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉干重在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表2可見，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的葉干重極顯著高于CK處理組，分別是CK處理組的5.59和3.39倍。較1 mg·L-1DA-6處理組相比，二者顯著增加了124.44%和36.14%。1 mg·L-1DA-6處理組的葉干重是CK的2.49倍。

表2 DA-6對艾納香葉干重的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.3 DA-6對艾納香葉片中總黃酮相對和絕對含量的影響

方差分析結(jié)果表明，不同濃度的DA-6處理，艾納香葉片中總黃酮相對含量和絕對含量均差異極顯著(P<0.01)。由表3可見，施加不同濃度的DA-6顯著降低了總黃酮的相對含量，其中CK處理組的總黃酮相對含量為2.24%，顯著高于1、10和100 mg·L-1DA-6處理組53.43%、140.86%和96.49%。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮含量最高，為0.91 g，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍。

表3 DA-6對艾納香葉片總黃酮相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.4 DA-6對艾納香葉片中l(wèi)-龍腦相對和絕對含量的影響

方差分析結(jié)果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉中l(wèi)-龍腦相對含量和絕對含量在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表4可見，CK處理組的l-龍腦相對含量最高，為0.16%，顯著高于10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組60.00%和77.78%。10 mg·L-1DA-6處理組的艾納香葉片中l(wèi)-龍腦絕對含量最高，顯著高于其他處理組。

表4 DA-6對艾納香葉片中l(wèi)-龍腦相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著，表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

3 討論與結(jié)論

適當(dāng)濃度的DA-6有助于冬季遲緩期艾納香生長：DA-6是一種細(xì)胞分裂素類植物生長素，它可以通過提高植物葉片中葉綠素的含量，進(jìn)而提高植物的光合速率，促進(jìn)葉片生長。研究表明，低濃度DA-6可以顯著促進(jìn)秋季草莓[15]、菠菜[16]、黃燈籠辣椒[17]、野大麥[18]等葉片生長，提高葉片的生物量。周天等[19]研究發(fā)現(xiàn)，10 mg·L-1DA-6處理組可以顯著提高羊草幼苗的生物量，與對照組相比顯著增加了64.0%。何元農(nóng)等[20]研究發(fā)現(xiàn)1～2月是艾納香生長遲緩期，3月為生長恢復(fù)期。本研究在海南冬季即艾納香生長遲緩期進(jìn)行DA-6對艾納香的肥效研究。未進(jìn)行任何處理的CK組，艾納香生長緩慢，甚至停止生長。施加不同濃度的DA-6可以顯著促進(jìn)艾納香生長，提高生長指標(biāo)和葉干重，其中10 mg·L-1DA-6處理組作用的效果最明顯。因此，在海南冬季，艾納香生長的遲緩期施加10 mg·L-1DA-6有利于促進(jìn)艾納香植物生長和生物量的積累。

DA-6抑制了冬季遲緩期艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的相對含量，然而，增加了其絕對含量：本研究發(fā)現(xiàn)在冬季艾納香生長的遲緩期，施加DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。其中100 mg·L-1DA-6處理組顯著抑制了葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量，CK處理下相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。這主要可能由于總黃酮和l-龍腦是次生代謝產(chǎn)物，其積累代謝是一個(gè)持續(xù)而動(dòng)態(tài)變化的過程，而在良好的環(huán)境條件下，植物生長的越快，其次生代謝產(chǎn)物數(shù)量越少[21]，并且次生代謝產(chǎn)物的積累也受到季節(jié)的影響[22]，這一結(jié)果說明在海南冬季艾納香生長遲緩期，總黃酮和l-龍腦的積累比較緩慢，外源施加植物激素會(huì)抑制其積累過程，導(dǎo)致其積累量的降低。然而，不同濃度的DA-6均顯著提高了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的絕對含量。這說明在本實(shí)驗(yàn)的處理階段，艾納香的初生代謝進(jìn)程較快，受DA-6的影響大，效果遠(yuǎn)超過對次生代謝過程的影響。本研究為后續(xù)進(jìn)行艾納香專用肥的研究提供了數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。

[1] 龐玉新，謝小麗，陳振夏，等.艾納香本草考證[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(6)：10-13.

[2] 王丹，付萬進(jìn)，龐玉新，等.艾納香油過敏性和急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2013，34(12)：2499-2502.

[3] 龐玉新，王丹，袁媛，等.艾納香總黃酮提取工藝研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2013，34(1)：168-170.

[4] 袁媛，龐玉新，王文全，等.中國艾納香屬植物資源與民族藥學(xué)研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，31(4)：22-27.

[5] Pang YX，Wang D，F(xiàn)an ZW，et al.Blumeabalsamifera-A Phytochemical and Pharmacological Review[J].Molecules，2014，19：9453-9477.

[6] Saewan N，Koysomboon S，Chantrapromma K.Anti-tyrosinase and anti-cancer activities of flavonoids fromBlumeabalsamiferaDC[J].J Med Plants Res.2011，5(6)：1018-1025.

[7] Nessa F，Ismail Z，Mohamed N.Xanthine oxidase inhibitory activities of extracts and flavonoids of the leaves ofBlumeabalsamifera[J].Pharm Biol.2010，48(12)：1405-1412.

[8] 王丹，侯俊玲，萬春陽，等.中藥材施肥研究進(jìn)展[J].土壤通報(bào)，2011，42(1)：225-228.

[9] 何元農(nóng)，丁映，洗福榮，等.肥料種類對艾納香生物產(chǎn)量和有效成分含量的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(5)：53-57.

[10] 何元農(nóng)，丁映，冼福榮，等.艾納香產(chǎn)量和有效成分含量對氮素營養(yǎng)的反應(yīng)[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34(2)：28-30.

[11] 王丹，龐玉新，陳振夏，等.錳元素對冬季遲緩期的艾納香幼苗生物量和有效成分含量的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科，2014，41(21)：26-30.

[12] 吳燕，耿書德，史長江，等.DA-6對滁菊幼苗生長及葉片氮代謝的影響[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)，2014，28(12)：2283-2289.

[13] 王銘琦.新型植物生長調(diào)節(jié)劑DA-6的合成與活性研究[D].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

[14] 楊清，艾沙江·買買提，王志霞，等.DA-6對桃樹葉片葉綠素合成途徑的調(diào)控研究[J].園藝學(xué)報(bào)，2012，17(04)：621-628.

[15] 苗鵬飛，劉國杰，李紹華，等.DA-6對秋季草莓葉片光合速率和植株生長的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2007，18(12)：2722-2726.

[16] 梁廣堅(jiān)，李蕓瑛，邵玲.DA-6和BR+GA_3對菠菜生長和光合速率的影響[J].園藝學(xué)報(bào)，1998，25(04)：45-49.

[17] 陳艷麗，范飛，王旭，等.DA-6對高溫脅迫下黃燈籠辣椒幼苗的影響[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2014，09：1795-1801.

[18] 周天，胡永軍，周曉梅，等.DA-6對野大麥幼苗光合作用和生長的影響[J].草業(yè)科學(xué)，2004，24(04)：31-34.

[19] 周天，胡勇軍，王萍，等.新型植物生長調(diào)節(jié)劑DA-6與TKE對羊草幼苗生長的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，36(03)：242-244.

[20] 何元農(nóng)，丁映，冼福榮，等.艾納香生長發(fā)育特性的初步觀測[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(2)：19-23.

[21] 蘇文華，張光飛，李秀華，等.植物藥材次生代謝產(chǎn)物的積累與環(huán)境的關(guān)系[J].中草藥，2005，36(09)：139-142.

[22] 李彥，周曉東，樓浙輝，等.植物次生代謝產(chǎn)物及影響其積累的因素研究綜述[J].江西林業(yè)科技，2012，03：54-60.

EffectofDA-6onGrowthandContentsofEffectiveConstituentsinBlumeaBalsamiferainSlowGrowthPeriodofWinter

WANGDan1，MAQingsong1，F(xiàn)ANZuowang1，LIXiaoting1，WANJun1，YUANLei1，CHENXiaolu1，ZOUChunli2，PANGYuxin1*

(1.TropicalCropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina/HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeaBalsamifera，Danzhou 571737，China；2.Hainan Xiangdaolijia Biotechnology Co.，Ltd.，Haikou 570208，China)

Objective：To investigate the effect of DA-6 on growth and contents of effective constituents inBlumeabalsamifera(L.) DC.in slow growth period of winter.Methods：The seedlings of one-year-oldB.balsamiferawere applied with DA-6 in slow growth period of winter three times.The height，ground diameter，length of leaf，width of leaf and leaf biomasses were measured.Then，the relative contents of total flavonoids andl-borneol in leaves ofB.balsamiferawere determined by UV and GC methods，respectively.The absolute contents were calculated.Results：The DA-6 significantly enhanced the growth ofB.balsamifera，and increased leaf biomass.The effect of 10 mg·L-1DA-6 treatment group was the most obvious.The application of DA-6 significantly inhibited the accumulation of relative contents of total flavonoids andl-borneol.The relative contents of total flavonoids andl-borneol under CK treatment were the highest，which were over 100 mg·L-1DA-6 treatment with 77.78% and 96.49%.However，DA-6 significantly increased the absolute contents of total flavonoids andl-borneol in leaves.The absolute contents of total flavonoids andl-borneol under 10 mg·L-1DA-6 treatment were the highest，which were 2.33 and 3.33 times than that of CK.Conclusion：Therefore，the DA-6 could significantly promote the growth and the accumulation of leaves，as well as the absolute contents of total flavonoids andl-borneol inB.balsamiferain slow growth period of winter.

DA-6；Blumeabalsamifera；slow growth period；l-borneol；total flavonoids；leaf

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.017

2015-01-08)

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81403035)；科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金(14C26214602908)

*

龐玉新，副研究員，研究方向：南藥資源研究與開發(fā)；Tel：(0898)23300268，E-mail：blumeachina@126.com