李海靜，呂鑫，姜桂苗，曲洪磊，于杰，馮玉龍，2，田方，3，王銀朝*（.山東東阿阿膠股份有限公司，山東東阿252200；（2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東青島26609；（3.石河子大學(xué)，新疆石河子832000）

驢細(xì)管凍精與鮮精人工授精情期受胎率的比較

李海靜1，呂鑫1，姜桂苗1，曲洪磊1，于杰1，馮玉龍1，2，田方1，3，王銀朝1*
（1.山東東阿阿膠股份有限公司，山東東阿252200；（2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東青島266109；（3.石河子大學(xué)，新疆石河子832000）

對140頭母驢開展了驢細(xì)管凍精與鮮精人工授精試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示：第三、四情期的發(fā)情率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于第一、二情期的發(fā)情率，第一情期受胎率為17.2%；第二情期受胎率為34.7%；第三情受胎率為39.4%；第四情期受胎率為23.2%。通過四個(gè)情期的比較得出：第一、四情期與第二、三情期情期受胎率差異顯著（P＜0.05），凍/鮮精配種受胎率分別為28%/30%,差異不顯著。

驢；人工授精；受胎率

自1798年Lazzaro Spallanzani等[1]成功完成人工授精試驗(yàn)以來，眾多科學(xué)研究者相繼完成了蛙[2]、雞[3]、牛[4]等凍精技術(shù)的研究。我國在20世紀(jì)60、70年代開始了對驢人工授精技術(shù)的研究，近年來伴隨著驢產(chǎn)品如：阿膠、驢奶[5]、驢肉、驢鞭等的熱銷，養(yǎng)驢產(chǎn)業(yè)出現(xiàn)了回暖。由于目前國內(nèi)優(yōu)秀種公驢的緊缺，驢的凍精生產(chǎn)[6]與人工授精在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中有著廣闊的前景。東阿阿膠黑毛驢繁殖中心最大限度的發(fā)揮著復(fù)狀德州驢優(yōu)良性狀的工程，開展了德州驢細(xì)管凍精的生產(chǎn)與人工授精技術(shù)的建立工作。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)驢的選擇

東阿阿膠黑毛驢繁殖基地德州驢140頭，年齡2～5歲，平均體重250 kg。

1.2試驗(yàn)驢的分組

驢群隨機(jī)分組，種公驢鮮精與凍精在同一情期內(nèi)隨機(jī)用于發(fā)情母驢配種。

1.3試驗(yàn)驢發(fā)情鑒定

配種員通過對驢群的整體摸排，記錄每頭驢卵泡發(fā)育情況，實(shí)時(shí)跟蹤母驢的卵泡的發(fā)育，以確保準(zhǔn)確的配種時(shí)間。

1.4鮮精采集

選擇8頭烏頭德州驢，采用假陰道采精，待公驢下鞭，用溫水清洗陰莖，手握陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)，待公驢射精后，收集精液，用8層紗布過濾進(jìn)量筒內(nèi)，置于37℃水浴中，進(jìn)行密度、活力的測定。

1.5凍精細(xì)管的生產(chǎn)

選擇精液活率≥0.8，加入預(yù)熱37°C稀釋液進(jìn)行初步的稀釋，稀釋完成后37°C靜止10 min后1 500 r/min離心10 min，離心后去上清液,加入卵黃冷凍稀釋液，分裝打印、4℃平衡、冷凍、抽樣質(zhì)檢，活力≥0.4、密度≥0.75億的細(xì)管凍精，用于日后配種工作。

1.6輸精

發(fā)情母驢綁定于四柱欄內(nèi)，用1%的新吉爾滅清洗母驢外陰，細(xì)管凍精按照解凍程序進(jìn)行解凍，鮮精根據(jù)密度稀釋至0.75億密度，采用陰道輸精。

1.7配種登記

母驢受精后，記錄母驢的RFID編碼，輸精時(shí)間，輸精量，種公驢RFID編碼。

1.8孕檢

根據(jù)配種日期記錄，配種后18 d借助B超與直腸檢查對母驢進(jìn)行孕檢，對妊娠母驢進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，本情期未妊娠母驢摸排卵泡發(fā)育進(jìn)入第二個(gè)情期繼續(xù)配種。

1.9數(shù)據(jù)分析

采用EXCEL和SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，方差采用LSD法或T檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以百分率表示。

2　結(jié)果與分析

2.1實(shí)驗(yàn)組中情期受胎率結(jié)果（見表1）

表1　情期受胎率的比較

通過表1中情期受胎率的比較（見表1），第三、四情期的發(fā)情率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于第一、二情期的發(fā)情率，第一情期配種母驢64頭，受孕11頭，情期受孕率為17.2%；第二情期配種49頭，受孕16頭，情期受孕率為34.7%；第三情期配種66頭，受孕26頭，情期受孕率為39.4%；第四情期配種73頭，受孕17頭，情期受孕率為23.2%。通過四個(gè)情期的比較得出第一、四情期與第二、三情期情期受孕率顯著（P＜0.05）。

2.2實(shí)驗(yàn)組中凍精細(xì)管與鮮精受胎率的比較（見表2）

表2　凍精/鮮精受胎率的比較

通過表2凍精細(xì)管與鮮精的對比（見表2），凍精的配種受胎率為28%，鮮精的配種受胎率為30%，凍精與鮮精在種母驢上的配種受胎率差異不明顯（P>0.05）。

3　討論

試驗(yàn)組母驢的平均發(fā)情率56.5%。第一情期比第二情期發(fā)情率高6個(gè)百分點(diǎn)（P＞0.05），繁殖季節(jié)中母驢繁殖功能正常未受孕的情況下，進(jìn)入第二情期后仍能繼續(xù)啟動發(fā)情周期，進(jìn)入卵泡發(fā)育，進(jìn)行二次配種，這是驢群保持種群繁衍的天生能力[7]。從實(shí)驗(yàn)中配種頭數(shù)的變化可以看出，驢群進(jìn)入繁殖季節(jié)后，有50%以上的母驢主要集中在第三和第四個(gè)發(fā)情周期發(fā)情。做好金4月銀5月的母驢發(fā)情鑒定與配種工作，是提高驢群繁殖率的重要時(shí)間段。

試驗(yàn)組第二、三情期受胎率顯著高于第一情期受胎率。分析原因可能是，第一情期母驢發(fā)情初期，母驢體質(zhì)尚未恢復(fù)，氣溫變化頻繁，卵泡發(fā)育過程中出現(xiàn)萎縮現(xiàn)象。人工授精技術(shù)需要操作人員具有較高的、熟練的操作技術(shù)。另外凍精質(zhì)量、解凍時(shí)間等均是影響受胎率的關(guān)鍵因素[8]。

針對目前種公驢養(yǎng)殖的高成本，在無鮮精受精的情況下，細(xì)管凍精用于人工授精的優(yōu)勢是：易保存、易攜帶、操作簡便[9]；養(yǎng)殖場凍鮮精配種試驗(yàn)得出：東阿繁殖基地使用凍精人工授精受胎率總體偏低，只有28%。凍精受孕率的主要原因有三個(gè)方面:一是驢細(xì)管凍精生產(chǎn)處于開始階段，細(xì)管凍精的質(zhì)量、密度、活力還需要進(jìn)一步的改善，二是此次試驗(yàn)在東阿阿膠黑毛驢繁殖中心進(jìn)行，2014年氣候變化頻繁，5月份早晚氣溫8℃～10℃，凍精在37度水浴條件下解凍后活率為0.35～0.65之間，解凍后精子活率低、密度低及解凍過程精子能量的損耗、膜的損傷是導(dǎo)致低受胎率的因素之一；三是試驗(yàn)?zāi)阁H在配種前未進(jìn)行整體統(tǒng)一排查，驢群個(gè)體間差異較大，對年齡偏大、體質(zhì)差，生殖疾病的母驢未進(jìn)行及時(shí)處理與治療，進(jìn)而影響母驢繁殖能力下降;四是人工授精技術(shù)員技術(shù)熟練程度、輸精位置[10,11]等也是造成此次試驗(yàn)受胎率低的主要原因。

［1］Pacey A.A,TomlinsonJ.M.Sperm Banking:Theory and Practice［M］．Cambridge University，Cambridge

University Press，2009．

[2]中國科學(xué)技術(shù)情報(bào)研究所重慶分所．家畜繁殖技術(shù)進(jìn)展[M]．重慶：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社重慶分社，1979：1-78．

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Estrus Conception Rate after Artificial Insemination Using Frozen Straw Semen and Fresh Semen in Donkey

LI Hai-jing1,LV Xin1,JIANG Gui-miao1,QU Hong-lei1,FENG Yu-long1,2,TIAN Fang1,3,WANG Yin-chao1*
(1.Shangdong Dong’e E’jiao Co.,Ltd.Dong’e 252200,China；2.Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China；3.Shihezi University,Shihezi 832000,China)

Abstract：Artificial insemination(AI)was conducted by using frozen straw semen and fresh semen on 140 female donkeys.The results showed that the conception rate of second(34.7%)and third(39.4%) cycle of estrus is significant higher than that of the first(17.2%)and fourth 23.2%cycle of estrus(P<0.05). No significant difference was observed between frozen and fresh semen on pregnancy rate.

donkey,artificial insemination(AI);conception rate

S822

A

1003－6377（2015）02－0029-03

山東省農(nóng)業(yè)科技成果資金項(xiàng)目“良種驢擴(kuò)繁技術(shù)研究及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)”（2012GXH21017）

李海靜（1984-），女，碩士研究生，研究方向：動物遺傳育種。E-mail:lihj8805963@126.com

王銀朝（1981-），男，碩士研究生，研究方向：動物醫(yī)學(xué)。

2015-01-11，

2015-02-02