魯志平，楊曉玲，申曉莉，黃園媛，朱　波，葉　春，譚春青

（1.遂寧市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 遂寧　629000；2.四川省大竹縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

S2株、M5株布氏桿菌減毒活疫苗對(duì)山羊免疫效果比較試驗(yàn)

魯志平1，楊曉玲2，申曉莉2，黃園媛2，朱波2，葉春2，譚春青1

（1.遂寧市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 遂寧629000；2.四川省大竹縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

通過對(duì)36只不同日齡、不同性別的健康山羊（含妊娠母羊6只）隨機(jī)平均分組，分別口服S2株、M5株布氏桿菌減毒活疫苗后，在7 d、14 d、21 d、42 d、90 d對(duì)血液中布氏桿菌抗體進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)S2、M5誘導(dǎo)的抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)進(jìn)行分析及疫苗安全性評(píng)價(jià)，最終研究確定出S2可適用于不同日齡、不同性別山羊廣泛使用，也適用于妊娠期間山羊的免疫，能有效預(yù)防布病的發(fā)生，減少由此導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失；M5可引起妊娠母羊免疫副反應(yīng)及嚴(yán)重的流產(chǎn)癥狀。

S2株布氏桿菌減毒活疫苗；M5株布氏桿菌減毒活疫苗；免疫效果

布魯氏菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的病原菌，主要侵害動(dòng)物的淋巴系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)，是一種重要的人畜共患病，OIE將其列為B類動(dòng)物疫病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病。病畜主要通過流產(chǎn)物、精液和乳汁排菌，污染環(huán)境。該病以引起雌性動(dòng)物流產(chǎn)、不孕及雄性動(dòng)物出現(xiàn)睪丸炎等為主要特征。人感染該病后，表現(xiàn)為長(zhǎng)期發(fā)熱、多汗、關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛及肝、脾腫大等癥狀。該病嚴(yán)重威脅著人和多種動(dòng)物的生命健康［1］。

目前該病控制主要是以“檢疫凈化”為主的綜合防控措施，其中也包括對(duì)重點(diǎn)疫區(qū)的易感動(dòng)物接種疫苗，為了篩選確定針對(duì)不同年齡段山羊及妊娠母羊可以同時(shí)使用的布氏桿菌安全疫苗，該研究通過對(duì)2月齡至6月齡、10月齡至12月齡試驗(yàn)山羊按照試驗(yàn)要求分組后分別口服免疫S2株布氏桿菌減毒活疫苗、M5布氏桿菌株減毒活疫苗，測(cè)定免疫后不同時(shí)期各組試驗(yàn)山羊接種免疫后血清中抗布氏桿菌特異性抗體的消長(zhǎng)規(guī)律及安全性，為科研以及基層獸醫(yī)工作者提供參考。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

選2月齡至6月齡雌雄各半、體質(zhì)量相當(dāng)?shù)耐黄贩N健康山羊18只，隨機(jī)分成3組，每組6只，分別為第1組、第2組、第3組，其中第1組為免疫S2株布氏桿菌減毒活疫苗（S2）組，第2組為免疫M(jìn)5布氏桿菌株減毒活疫苗（M5）組，第3組為空白對(duì)照組；選10～12月齡體質(zhì)量相當(dāng)?shù)耐黄贩N健康母山羊18只，其中妊娠期母羊9只，隨機(jī)分成3組，每組6只（含妊娠母羊3只），分別為第4組、第5組、第6組，其中第4組為免疫S2組，第5組為免疫M(jìn)5組，第6組為空白對(duì)照組。以上試驗(yàn)山羊每組均單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，墊草墊料、糞便及廢棄物無害化處理。

1.2試劑及疫苗

布病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）抗原和布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)（SAT）抗原、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照均由中國疾病預(yù)防控制中心傳染病和流行病研究所生產(chǎn)；S2株布氏桿菌活疫苗購自金宇保靈生物藥品有限公司，每頭份含布氏桿菌弱毒活菌100億CFU；M5株布氏桿菌活疫苗購自新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司，均在有效期內(nèi)使用。

1.3疫苗免疫劑量及方法

按照每年接種1次疫苗的程序進(jìn)行免疫，采取口服方式進(jìn)行免疫，即用滅菌生理鹽水按使用說明稀釋疫苗后以投藥器噴注到山羊舌根及咽喉部。第1組試驗(yàn)山羊口服S2量為100億CFU/只，第2組試驗(yàn)山羊口服M5量為25頭份/只，第3組試驗(yàn)山羊不免疫，第4組試驗(yàn)山羊口服S2量為100億CFU/只，第5組試驗(yàn)山羊口服M5量為25頭份/只，第6組試驗(yàn)山羊不免疫。

1.4疫苗的安全性及免疫效果比較

第1組、第4組與第2組、第5組試驗(yàn)山羊分別口服免疫活疫苗S2、M5后，分別在免疫前1 d、免疫后7 d、14 d、21 d、42 d、90 d對(duì)所有試驗(yàn)山羊采集血液分離血清，定性（RBPT）和定量（SAT）檢測(cè)血清中的布氏桿菌抗體水平，按GB/T18646-2002規(guī)定的程序操作，了解兩種活疫苗分別誘導(dǎo)山羊機(jī)體的抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，并記錄各組試驗(yàn)山羊的免疫反應(yīng)情況及妊娠母山羊流產(chǎn)情況。

2　結(jié)果

2.1疫苗的安全性比較

第1組試驗(yàn)山羊免疫S2后，未觀察到任何免疫副反應(yīng)，包括發(fā)熱、呼吸困難、食欲下降等癥狀；第2組試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后，有1只試驗(yàn)山羊出現(xiàn)了食欲下降等輕微免疫副反應(yīng)癥狀；第3組空白對(duì)照組山羊均未出現(xiàn)任何癥狀。結(jié)果表明S2株布氏桿菌減毒活疫苗對(duì)于2～6月齡山羊口服接種是安全的，M5會(huì)引起個(gè)別山羊出現(xiàn)免疫副反應(yīng)。

第4組試驗(yàn)山羊免疫S2后，未觀察到任何免疫副反應(yīng)，包括發(fā)熱、呼吸困難、食欲下降、流產(chǎn)等癥狀；第5組試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后，所有的試驗(yàn)妊娠母山羊均出現(xiàn)了流產(chǎn)癥狀；空白對(duì)照組羊均未出現(xiàn)任何癥狀。結(jié)果表明S2株布氏桿菌減毒活疫苗對(duì)于10～12月齡山羊口服接種是安全的，并能有效減少羊群流產(chǎn)、死胎，減少能繁母羊因流產(chǎn)、死胎導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失，M5會(huì)引起妊娠母山羊出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀。

2.2疫苗的免疫效果比較

2.2.1第1組、第2組試驗(yàn)山羊分別免疫S2與M5后抗體消長(zhǎng)情況

圖1　第1組、第2組試驗(yàn)羊分別免疫S2、M5后各時(shí)期血清的SAT幾何平均效價(jià)

第1組、第2組試驗(yàn)山羊經(jīng)S2、M5免疫后，通過采血應(yīng)用RBPT、SAT兩種檢測(cè)方法測(cè)定抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，結(jié)果基本一致?？瞻讓?duì)照組均沒有免疫應(yīng)答產(chǎn)生；通過SAT定量檢測(cè)，見圖1，1組、2組試驗(yàn)山羊免疫前后血清抗體滴度出現(xiàn)了明顯變化，第7 d幾何平均效價(jià)均達(dá)到最高，并達(dá)到峰值，隨后1組試驗(yàn)山羊抗體效價(jià)逐漸下降，90 d后接近1∶50臨界值。2組試驗(yàn)山羊抗體效價(jià)峰值從7 d持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d后個(gè)別試驗(yàn)山羊抗體效價(jià)滴度＜1∶50。

2.2.24組、5組試驗(yàn)山羊分別免疫S2與M5后抗體消長(zhǎng)情況4組、5組試驗(yàn)山羊經(jīng)S2、M5免疫后，通過采血應(yīng)用

RBPT、SAT兩種檢測(cè)方法測(cè)定抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，結(jié)果基本一致?？瞻讓?duì)照組均沒有免疫應(yīng)答產(chǎn)生；通過SAT定量檢測(cè)，見圖2，4組、5組試驗(yàn)山羊免疫前后血清抗體滴度出現(xiàn)了明顯變化，第7天幾何平均效價(jià)均達(dá)到最高，并達(dá)到峰值，隨后4組試驗(yàn)山羊抗體效價(jià)逐漸下降，90 d后個(gè)別試驗(yàn)羊抗體效價(jià)滴度＜1∶50。5組試驗(yàn)羊抗體效價(jià)峰值從7 d持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d后接近1∶50臨界值。

圖2　4組、5組試驗(yàn)羊分別免疫S2、M5后各時(shí)期血清的SAT幾何平均效價(jià)

2.2.31組、4組試驗(yàn)山羊分別免疫S2后抗體消長(zhǎng)情況（見表1）

SAT方法測(cè)定的1組、4組山羊免疫S2后抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)與RBPT結(jié)果基本一致。空白對(duì)照組沒有相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)生；由表1可知，兩組試驗(yàn)羊免疫S2后7 d抗體水平達(dá)到峰值，83.3%的血清樣本抗體效價(jià)為1∶400以上，90 d時(shí)，91.67%～100%的血清樣本抗體效價(jià)達(dá)到1∶50以上。

表1　1組、4組試驗(yàn)山羊免疫S2后抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)

1組試驗(yàn)山羊免疫S2，免疫前后血清抗體滴度出現(xiàn)了明顯的變化，見圖3。免疫后7 d，抗體水平達(dá)到了峰值，隨后逐漸下降，抗體水平到90 d后降低至有效保護(hù)下限；4組試驗(yàn)山羊免疫S2，血清抗體幾何平均效價(jià)動(dòng)態(tài)曲線與Ⅰ組基本一致，免疫后90 d個(gè)別試驗(yàn)羊失去有效保護(hù)性，幾何平均效價(jià)＜1∶50。說明S2在不同年齡段山羊群體中使用，免疫效果及效價(jià)的產(chǎn)生時(shí)間、效價(jià)高低、消長(zhǎng)趨勢(shì)等方面無明顯差異。

2.2.42組、5組試驗(yàn)山羊分別免疫M(jìn)5后抗體消長(zhǎng)情況

SAT方法測(cè)定的2組、5組試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)與RBPT結(jié)果基本一致，空白對(duì)照組沒有相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)生；兩組試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后7～14 d抗體水平達(dá)到峰值，75.0%的血清樣本抗體效價(jià)為1∶400以上，90 d時(shí)，91.67%～100%的血清樣本抗體效價(jià)達(dá)到1∶50以上，在有效保護(hù)范圍之內(nèi)，見表2。

表2　2組、5組試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)

圖3　1組、4組試驗(yàn)羊免疫S2后各時(shí)期血清的SAT幾何平均效價(jià)

2組試驗(yàn)羊免疫M(jìn)5 7 d后抗體效價(jià)達(dá)到峰值并持續(xù)至14 d后逐漸下降，90 d時(shí)個(gè)別試驗(yàn)羊抗體水平下降至有效保護(hù)下限外；5組試驗(yàn)羊免疫M(jìn)5后，血清抗體幾何平均效價(jià)動(dòng)態(tài)曲線基本與2組山羊組一致，免疫后90 d個(gè)別試驗(yàn)羊失去有效保護(hù)性，幾何平均效價(jià)＜1∶50。3只妊娠母羊在7～21 d全部出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，流產(chǎn)率達(dá)100%。說明M5在不同年齡段山羊群體中使用，免疫效果及效價(jià)的產(chǎn)生時(shí)間、效價(jià)高低、消長(zhǎng)趨勢(shì)等方面無明顯差異，但M5能引起妊娠期母羊發(fā)生流產(chǎn)，見圖4。

圖4　2組、5組試驗(yàn)羊免疫M(jìn)5后各時(shí)期血清的SAT幾何平均效價(jià)

2.2.5不同性別羊免疫S2、M5后抗體滴度消長(zhǎng)情況（見圖5和圖6）

S2、M5在不同性別山羊群體中使用，免疫效果及效價(jià)的產(chǎn)生時(shí)間、效價(jià)高低、消長(zhǎng)趨勢(shì)等方面無明顯差異，但M5能引起妊娠母羊流產(chǎn)。

3　分析與討論

選擇健康山羊，在試驗(yàn)接種疫苗前進(jìn)行相關(guān)檢疫，確定健康后方可使用，否則影響疫苗效果及試驗(yàn)結(jié)果。

圖5　不同性別試驗(yàn)山羊免疫S2后血清的SAT幾何平均效價(jià)動(dòng)態(tài)圖

圖6　不同性別試驗(yàn)山羊免疫M(jìn)5后血清的SAT幾何平均效價(jià)動(dòng)態(tài)圖

該試驗(yàn)研究表明，S2、M5經(jīng)口服免疫山羊后，免疫前后血清抗體滴度出現(xiàn)了明顯變化，二者均在第7天時(shí)幾何平均效價(jià)達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，3個(gè)月后個(gè)別山羊機(jī)體內(nèi)抗體滴度＜1∶50，在保護(hù)范圍之外。以上試驗(yàn)結(jié)果在羊的性別、年齡等方面無明顯差異。根據(jù)該試驗(yàn)結(jié)果初步認(rèn)為，S2、M5對(duì)山羊的免疫期約為3個(gè)月。下一步將對(duì)3個(gè)月之后山羊體內(nèi)抗體的消長(zhǎng)情況進(jìn)一步跟蹤檢測(cè)，更加科學(xué)掌握山羊體內(nèi)布病抗體衰減規(guī)律。

從以上免疫情況和免疫效果檢測(cè)情況來看，S2、M5經(jīng)口服免疫山羊后，二者就抗體產(chǎn)生時(shí)間、抗體滴度及抗體水平達(dá)到峰值時(shí)間、抗體衰減時(shí)間等方面無太大差異，就免疫效果和安全性而言，S2對(duì)羊的免疫效果是絕對(duì)可靠的，這與王季秋［2］等研究結(jié)果基本一致，可廣泛用于山羊的布病免疫預(yù)防。M5可引起妊娠母羊嚴(yán)重流產(chǎn)，對(duì)除妊娠母羊外的其他山羊也可使用。

該次試驗(yàn)研究，只進(jìn)行了S2、M5一次口服免疫后山羊布病抗體的跟蹤檢測(cè)，下一步將進(jìn)行首免后1個(gè)月加強(qiáng)免疫一次的抗體跟蹤檢測(cè)，并通過口服免疫與其他免疫方式（噴霧、注射等）比較研究，以確定更加科學(xué)的免疫程序。因此，該研究為大面積推廣S2預(yù)防山羊布病提供了科學(xué)依據(jù)，為養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和人群健康提供科學(xué)依據(jù)。

［1］李金平，張繼紅，符玉娟.布魯氏菌病的預(yù)防與控制［J］.新疆畜牧業(yè)，2006，（3）：40.

［2］王季秋，張玉林.S2苗免疫牛、羊安全性及抗體消失規(guī)律的觀察［J］.中國地方病防治雜志，1993，8（5）：313.

S858.27

B

1004-5090（2015）12-0007-03

2015-09-18）