呂香茹，張小蕓，孫 凱，張 煦

（1.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；3.西安交通大學(xué)，陜西 西安 710000）

Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Yes相關(guān)蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

呂香茹1，2，張小蕓1，孫 凱3，張 煦1

（1.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；3.西安交通大學(xué)，陜西 西安 710000）

目的 探討Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Yes相關(guān)蛋白（YAP）在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測97例乳腺癌組織、32例癌旁正常乳腺組織中YAP的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果YAP在正常乳腺組織中的表達(dá)率明顯高于乳腺癌組織，兩者差異有顯著性（χ2=17.603，P=0.000）。乳腺癌組織中YAP的陽性表達(dá)與組織學(xué)分級、腫瘤大小和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論 Hippo/YAP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，可能為乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)與診療開辟新的途徑。

Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；Yes相關(guān)蛋白；乳腺癌

國際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的全球最新癌癥調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌的發(fā)病率位列第二位（肺癌13.0%，乳腺癌11.9%，結(jié)直腸癌9.7%）。此調(diào)查覆蓋全球184個國家，其中140個國家中的乳腺癌是女性發(fā)病率最高的癌癥。與2008年的數(shù)據(jù)相比，2012年全球乳腺癌發(fā)病率增長20%以上，死亡率增長14%。在我國，1990—2010年，男性癌癥發(fā)病率總體呈下降趨勢，而女性癌癥發(fā)病率呈上升趨勢，這主要與乳腺癌等癌癥發(fā)病率顯著升高有關(guān)。僅2012年，我國就新增18.7萬例乳腺癌患者，因乳腺癌死亡的人數(shù)達(dá)4.8萬，全國共69.7萬人患乳腺癌。

目前研究表明，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常導(dǎo)致的細(xì)胞增殖和凋亡間動態(tài)平衡的破壞與乳腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測相關(guān)通路效應(yīng)因子的蛋白表達(dá)水平，并探討其與臨床病理資料間的關(guān)系，可以對乳腺癌的生物學(xué)行為進(jìn)行及時有效的評估，為臨床診治提供可靠依據(jù)。

YAP（Yes-associated protein）即Yes相關(guān)蛋白，是一種連接蛋白和轉(zhuǎn)錄共激活因子，在正常機(jī)體細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的作用。YAP是經(jīng)典的Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的主要效應(yīng)因子。

YAP在人類多種腫瘤細(xì)胞中都存在高表達(dá)，如在前列腺癌、胰腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、食管癌組織中的表達(dá)水平均顯著高于正常組織。國內(nèi)外均有研究報道YAP在乳腺癌組織中也存在高表達(dá)［1］，但亦有研究顯示，YAP在乳腺癌中的表達(dá)明顯下調(diào)甚至缺失［2］。所以，YAP是癌基因還是抑癌基因，身份還不是很明確。本實驗即探討YAP在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義。

1 材料和方法

1.1 材料

收集張掖市人民醫(yī)院乳腺科2010—2013年乳腺癌行改良根治術(shù)患者的病理標(biāo)本97例，患者術(shù)前均未接受放療和化療，全部為女性，年齡31～73歲，平均年齡52歲。組織學(xué)分級：Ⅰ級（高分化）12例，Ⅱ級（中分化）63例，Ⅲ級（低分化）22例。腫瘤直徑：＜2 cm 18例，2～5 cm 55例，＞5 cm24例。按有無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為：有轉(zhuǎn)移58例，無轉(zhuǎn)移39例。對照組為患者癌旁經(jīng)病理確診為正常的乳腺組織標(biāo)本32例。YAP兔抗人多克隆抗體、免疫組織化學(xué)SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

YAP檢測采用SP免疫組織化學(xué)方法。切片常規(guī)脫蠟和水化后，PBS漂洗3次，每次3 min；于濕盒內(nèi)用3%過氧化氫溶液（A液）室溫孵育10 min，滴加5%～10%封閉用正常動物非免疫血清工作液（B液）。滴加一抗工作液，于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育12 h，PBS漂洗3次，每次3 min，滴加生物素標(biāo)記二抗工作液（C液）；滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素工作液，配制新鮮的DAB顯色劑。蘇木精對比染色細(xì)胞核，染色時間2 min。

1.3 結(jié)果判斷

根據(jù)細(xì)胞陽性率和染色程度進(jìn)行半定量分析。（-）：無顯色反應(yīng)；（+）：陽性細(xì)胞數(shù)＜25%，染色呈棕黃色；（++）：陽性細(xì)胞數(shù)占25%～50%，染色呈棕黃或棕色；（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)＞50%，染色呈棕色或深棕色。細(xì)胞染色積分=A×B，按照記分分值可以分為：陰性表達(dá)或無表達(dá)（-），0～3分：陽性表達(dá)（+），4～8分：強(qiáng)陽性表達(dá)（++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，采用χ2檢驗對兩組YAP陽性表達(dá)率之間的差異進(jìn)行比較，計算χ2值和P值，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)性分析，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

YAP陽性染色主要為核漿表達(dá)，顯示為棕黃色或棕色顆粒沉著。97例乳腺癌組織中有39例為陽性表達(dá)，而在32例正常乳腺組織中陽性表達(dá)的有27例。YAP在正常乳腺組織中的陽性表達(dá)率明顯高于乳腺癌組織，兩者差異有顯著性（χ2=17.603，P=0.000），見表1、圖1。

表1 YAP在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的表達(dá)（n）

圖1 乳腺癌組織中YAP呈陽性表達(dá)（SP×200）

乳腺癌組織中YAP的陽性表達(dá)與組織學(xué)分級、腫瘤大小和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無明顯相關(guān)性（P＞0.05），見表2。

表2 乳腺癌組織中YAP的表達(dá)與臨床病理學(xué)指標(biāo)間的關(guān)系

3 討論

Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是由一系列蛋白激酶及轉(zhuǎn)錄共激活因子所組成的激酶鏈，通過細(xì)胞增生與凋亡之間的動態(tài)平衡調(diào)控組織器官大小及腫瘤發(fā)生發(fā)展。在正常生理狀態(tài)下，當(dāng)組織細(xì)胞增生密度達(dá)到細(xì)胞會合程度時，該通路被激活，發(fā)生接觸抑制效應(yīng)；當(dāng)細(xì)胞密度降低時，這種接觸抑制效應(yīng)即被解除，細(xì)胞增生明顯加快［3］。Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中任何因子發(fā)生異常，都會打破細(xì)胞增生和凋亡之間的平衡，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。YAP是經(jīng)典的Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的主要效應(yīng)因子。在YAP蛋白中存在多個結(jié)構(gòu)域或特異氨基酸序列，通過這些結(jié)構(gòu)域或氨基酸序列，YAP能與多種蛋白質(zhì)相互作用并參與多條細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

2006年，國外研究首次發(fā)現(xiàn)YAP為癌基因，隨后在肝細(xì)胞癌中證實了這一結(jié)果，于是Hippo/YAP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與惡性腫瘤的關(guān)系逐漸引起人們的關(guān)注，研究領(lǐng)域涉及消化系統(tǒng)腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤、女性生殖系統(tǒng)腫瘤等。雖然多數(shù)研究認(rèn)為，YAP作為癌基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生，但經(jīng)本實驗研究驗證，YAP在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯下調(diào)甚至缺失，因此，YAP作為癌基因的角色需要重新考慮。

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，隨著早期檢測手段及綜合治療方案的實施，其死亡率近年來有所下降，但由于乳腺癌高度異質(zhì)性及較高的抗藥性和易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的特點，使它仍為第二大威脅女性生命的惡性腫瘤。因此，尋找個性化的綜合治療方案及有效的、聯(lián)合的進(jìn)展和預(yù)后判斷分子標(biāo)志物是現(xiàn)今乳腺癌研究的重點。

Shyr-Ming等［4］研究顯示，YAP不能獨立作為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)，但YAP缺失的乳腺癌細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的浸潤及轉(zhuǎn)移能力。說明YAP可與其他因子聯(lián)合作為預(yù)后指標(biāo)。Hippo/YAP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，可能為乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)與診療開辟新的途徑。

［1］Xiao dan Wang，Li li Su，Qis hui Ou.Yes-associated Protein promotes tumour development in luminal epithelial derived breast cancer［J］.European Journal of Cancer，2012（48）：1227-1234.

［2］M Yuan，V Tomlinson，R Lara，et al.Yes-associated Protein（YAP）functions as a tumor suppressor in breast［J］.Cell Death and Differentiation，2008（15）：1752-1759.

［3］Bin Zhao，Qun-Ying Lei，Kun Liang Guan.The Hippo-YAP pathway：new connections between regulation of organ size and cancer［J］.Current Opinion in Cell Biology，2008（20）：638-646.

［4］Shyr-Ming Sheen-Chen，Chun-Ying Huang，Ching-Hua Tsai，et al. Yes-associated Protein Is Not an Independent Prognostic Marker in Breast Cancer［J］.Anticancer Research，2012（32）：3321-3326.

R737.9

A

1671-1246（2015）11-0152-02