張錚

【摘 要】本文對無菌檢查試驗的存在的問題進行介紹并提出應(yīng)對策略。

【關(guān)鍵詞】無菌檢查；試驗；策略

無菌檢查法系指檢查藥品、敷料、縫合線、無菌器具及適用于藥典要求無菌檢查的其他品種是否無菌的一種方法[1-2]。無菌 （asepsis） 物體中無活的微生物存在，稱為無菌。我國開展藥品無菌檢查和微生物限度檢查已有數(shù)十年的歷史。新中國第一部藥典（1953年版）收載了無菌檢查法，以后每部進行了不斷的修訂和完善，從樣品的取樣量到培養(yǎng)時間的變化都更加的科學(xué)，合理[3-4]。本文對無菌檢查試驗的存在的問題進行介紹并提出應(yīng)對策略。

1.無菌檢查試驗的先天缺陷

1.1采樣

由于沒有從統(tǒng)計學(xué)的角度考慮采樣，使無菌檢查試驗檢測污染物的能力受到限制，出現(xiàn)錯誤結(jié)果的可能性很大。有學(xué)者從統(tǒng)計學(xué)角度分析發(fā)現(xiàn)污染率越低對污染物漏檢的可能性越大。由于不可能對一批成品的每一包裝單位進行檢測，所以藥品生產(chǎn)者必須遵守GMP進行生產(chǎn)。無菌生產(chǎn)工藝的驗證、良好廠房設(shè)計、員工的培訓(xùn)，才能取得高水平的無菌保障[5]。

1.2培養(yǎng)條件

研究表明，藥典規(guī)定的微生物培養(yǎng)條件并不是許多細菌和真菌的最適生長條件[6]。細菌生長在二十五攝氏度到四十?dāng)z氏度之間，真菌生長在二十五攝氏度到三十?dāng)z氏度之間，而藥典規(guī)定在二十?dāng)z氏度到二十五攝氏度下培養(yǎng)。 藥典對溫度規(guī)定的目的是檢測環(huán)境中的污染菌。美國藥典無菌試驗專家委員會推薦25～30℃為細菌、酵母菌和霉菌的培養(yǎng)溫度[6]。用不同的培養(yǎng)基檢查不同的細菌、酵母菌和霉菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 二十六攝氏度培養(yǎng)真菌和酵母菌10天后，胰酪胨大豆胨肉湯培養(yǎng)基的效率不及蛋白胨肝消化肉湯等培養(yǎng)基[6]。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基也不適用于苛求厭氧菌的恢復(fù)培養(yǎng)[7]。胰酪胨大豆胨肉湯培養(yǎng)基不適用于對苛求微生物的培養(yǎng)。

2.西方國家相應(yīng)的對策

2.1美國

2012年修訂的美國聯(lián)邦法規(guī)21CFR610.12，規(guī)定了一個不同于藥典描述的無菌檢查方法。FDA修訂該法規(guī)的目的是為了確保生物制品的安全性。21CFR61O.12取消了微生物、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基、取樣量和采樣計劃等內(nèi)容并允許使用非培養(yǎng)的檢測方法。

2.2歐洲

歐洲藥典的非強制章節(jié)“5.1.9無菌試驗使用指南”指出，無菌試驗合格結(jié)果的保證水平取決于批次的均一性、生產(chǎn)條件、采樣方法等的有效性；對于最終滅菌產(chǎn)品提供滅菌過程的證據(jù)比無菌試驗更重要。2007年新載入歐洲藥典的“細胞產(chǎn)品的微生物控制”中指的方法可代替無菌檢查。

2.3澳大利亞

在2006年發(fā)布的《治療產(chǎn)品無菌檢查指南》中提出了控制無菌檢查試驗的附加試驗一停滯試驗。停滯試驗?zāi)康氖且C明使用的培養(yǎng)基在整個培養(yǎng)期是否具有支持生長的能力。《治療產(chǎn)品無菌檢查指南》的原理部分指出：統(tǒng)計學(xué)考慮也是無菌檢驗成功的重要一環(huán)；藥典無沒有對所使用的培養(yǎng)基作具體要求，只是從原則上菌檢查方法不利于對低水平污染的檢出。

3.對規(guī)范我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中無菌檢查試驗的思考

3.1應(yīng)對無菌檢查試驗做出充分的解釋

我國少數(shù)藥品生產(chǎn)企業(yè)的部分從業(yè)人員對藥品無菌檢查試驗的原理理解不深，導(dǎo)致無菌檢查試驗方法不規(guī)范。藥品監(jiān)督管理部門對生產(chǎn)企業(yè)加強監(jiān)管的同時，應(yīng)制訂與歐洲藥典“無菌試驗使用指南”相類似的文件，促進我國藥品質(zhì)量的提高。我國藥典沒有對無菌檢查試驗的原理、所起作用等做詳細的解釋說明。這樣導(dǎo)致了部分企業(yè)重?zé)o菌檢查結(jié)果，輕質(zhì)量管理。我國藥典或相關(guān)法規(guī)應(yīng)以適當(dāng)方式提示至少注意以下幾點：對于最終滅菌的產(chǎn)品提供滅菌過程的證據(jù)比無菌檢查試驗更重要；沒有絕對的無菌保證，通過驗證很重要；即使整個批次均一，能檢測出低水平污染的可能性也是非常小的。

3.2無菌檢查方法的制訂要考慮生物制品的特殊性

美國、歐洲、澳大利亞的藥典或其它法規(guī)中，對生物制品的無菌檢查方法都另有專門的規(guī)定[8-10]。生物制品因為其原料、生產(chǎn)過程、內(nèi)含成份、具有生物活性等特點，使用單一的無菌檢查方法會存在風(fēng)險[11]。我國也應(yīng)對生物制品的無菌檢查做專門規(guī)定，特別在使用培養(yǎng)基和相應(yīng)培養(yǎng)條件等方面。

3.3抽樣方案

國藥典規(guī)定了不同藥物產(chǎn)品的原液、半成品、成品最少抽驗數(shù)量，沒有對抽樣方式做具體規(guī)定。我國應(yīng)參考歐洲、美國、澳大利亞的相關(guān)規(guī)定并結(jié)合自身特點，增加對抽樣方式的規(guī)定。

3.4對培養(yǎng)基的規(guī)定

中國藥典無菌檢查法規(guī)定使用2個培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基，用兩個培養(yǎng)基完全覆蓋所有需要無菌檢查的藥品并不現(xiàn)實。歐洲藥典“細胞產(chǎn)品微生物控制”沒有指定培養(yǎng)基，但規(guī)定了更嚴(yán)格的培養(yǎng)基促生長性能檢查法和基于實踐中最可能污染微生物的方法驗證。中國應(yīng)對于某些特殊藥品應(yīng)允許使用經(jīng)驗證的替代培養(yǎng)基。

3.5微生物檢驗的新技術(shù)

應(yīng)用微生物檢驗的新技術(shù)如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法、固相細胞計數(shù)法、流式細胞計數(shù)法、脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。微生物檢驗的新技術(shù)與傳統(tǒng)的檢驗方法比較，具有檢驗簡便，速度快的特點，有實時或近實時監(jiān)控的潛力，能夠?qū)ιa(chǎn)過程的關(guān)鍵工藝環(huán)節(jié)作出及時的微生物質(zhì)量評價，因此在醫(yī)藥行業(yè)完全有必要也有可能使用微生物檢驗的替代方法。采用非藥典規(guī)定的替代方法進行微生物檢驗時，應(yīng)進行替代方法的驗證，確認其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。 [科]

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