劉玲　詹平　聶丹等

[摘要] 目的 研究整合素β1與TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征等因素間的關(guān)系。 方法 選取2013年1月～2014年10月本院60例子宮內(nèi)膜腺癌組織作為研究組，20例正常子宮內(nèi)膜組織作為對照組，應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測其整合素β1和TIMP-1的表達(dá)情況，分析兩者與子宮內(nèi)膜腺癌的關(guān)系。 結(jié)果 整合素β1在子宮內(nèi)膜腺癌中的陽性表達(dá)率為76.67%，高于對照組的15.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；整合素β1表達(dá)程度與癌細(xì)胞的組織學(xué)分級呈正相關(guān)（P<0.05），與手術(shù)病理分期呈正相關(guān)（P<0.05）。TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的陽性表達(dá)率為65.00%，高于對照組的25.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。子宮內(nèi)膜腺癌中整合素β1與TIMP-1的陽性表達(dá)率呈正相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 整合素β1和TIMP-1與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，聯(lián)合檢測整合素β1和TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)，對輔助判斷子宮內(nèi)膜腺癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后有重要的參考價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 整合素β1；TIMP-1；子宮內(nèi)膜腺癌

[中圖分類號] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）09（a）-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of intergrin-β1 and TIMP-1 in human endometrial adenocarcinoma and the relationship between each other. Methods From October 2014 to January 2013，60 cases of endometrial adenocarcinoma tissues in our hospital were selected as the research group，and 20 cases of normal endometrial tissues as the control group.The immuno-histochemical method was used to examine the expression of intergrin-β1 and TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue and the normal endometrial tissue separately.The relationship between the two and endometrial adenocarcinoma was analyzed. Results The expression of intergrin-β1 in endometrial adenocarcinoma tissue was 76.67%，higher than 15.00% in control group，it was related with differentiation of cancer cells and operation pathologic staging（P<0.05）.The expression of TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue was 65%， higher than 25.00% in control group，it was related with operation pathologic staging （P<0.05），but not related with differentiation of cancer cells（P>0.05）.Positive correlation was found between intergrin-β1 and TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue. Conclusion Intergrin-β1 and TIMP-1 may be associated with the occurrence and development of endometrial adenocarcinoma，and which may be acted as clinical indexes that they are related to the invasion and metastasis of endometrial adenocarcinoma.

[Key words] Intergrin-β1；TIMP-1；Endometrial adenocarcinoma

細(xì)胞間基質(zhì)和基底膜組成的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中的重要屏障，整合素表達(dá)缺失或過表達(dá)可導(dǎo)致上皮細(xì)胞病變，甚至癌變，其通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）的分泌和活化，促進(jìn)腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[1-4]，整合素β1與腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5-7]，具有抑制金屬蛋白酶的活性而使細(xì)胞外基質(zhì)降解減少的作用，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）過表達(dá)可防止基質(zhì)降解，抑制腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，TIMP-1與腫瘤的惡性進(jìn)展、浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)[8]。本研究應(yīng)用免疫組化方法分析整合素β1和TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013年1月～2014年10月因子宮內(nèi)膜腺癌手術(shù)治療的病理標(biāo)本共60例，其中Ⅰ期23例，Ⅱ期21例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例（2009年FIGO子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期），組織學(xué)分級：G1 18例、G2 26例、G3 16例。所有患者術(shù)前均未接受放、化療和激素治療，平均年齡（54.52±5.79）歲。正常子宮內(nèi)膜組織來源于同期因子宮良性疾病行子宮全切除術(shù)標(biāo)本共20例，術(shù)后病理學(xué)證實(shí)無惡性病變存在，平均年齡（51.04±5.57）歲。

1.2 方法

所有新鮮標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片。兔抗人多克隆的整合素β1抗體、TIMP-1抗體及SP-9001試劑盒均購自北京中杉金橋公司。兩種抗原均行微波修復(fù)，按試劑盒說明書操作，蘇木素復(fù)染。用已知的陽性片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

評分標(biāo)準(zhǔn)參照Birner法[9]。由兩名病理學(xué)專家雙盲法觀察切片，若兩專家結(jié)果不一致則重新判定。染色結(jié)果以半定量方法進(jìn)行判定，根據(jù)染色的強(qiáng)度和范圍評分。兩項(xiàng)評分相乘所得的積分為得分：不管其染色強(qiáng)度，只要陽性細(xì)胞數(shù)<10%者為（-）；3分為（+）；4～5分為（++）；6～7分為（+++）。表達(dá)陽性率=[（+）+（++）+（+++）]例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組間比較采用Mam-Whitneyu U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 整合素β1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)

整合素β1主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞漿（圖1）；子宮內(nèi)膜腺癌組中整合素β1的陽性表達(dá)率為76.67%，高于對照組的15.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宮內(nèi)膜腺癌組織中，整合素β1表達(dá)均于高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；子宮內(nèi)膜腺癌G1、G2、G3組織中整合素β1表達(dá)均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）；整合素β1的表達(dá)與手術(shù)病理分期呈正相關(guān)（r=0.327，P=0.011），與組織學(xué)分級呈正相關(guān)（r=0.626，P=0.000）。

2.2 TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)

TIMP-1主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞胞漿（圖2）；子宮內(nèi)膜腺癌組織中TIMP-1的陽性表達(dá)率為65.00%，高于對照組的25.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宮內(nèi)膜腺癌組織中，TIMP-1表達(dá)均于高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；子宮內(nèi)膜腺癌G1、G2、G3組織中TIMP-1表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）；TIMP-1的表達(dá)與組織學(xué)分級無相關(guān)性（r=0.205，P=0.116），TIMP-1的表達(dá)與手術(shù)病理分期呈正相關(guān)（r=0.472，P=0.000）。

2.3 整合素β1與TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)的相關(guān)性

60例子宮內(nèi)膜腺癌整合素β1與TIMP-1的表達(dá)有相關(guān)性（r=0.258，P=0.046）（表3）。

3 討論

3.1 整合素β1表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的關(guān)系

整合素通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)，調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、生長、分化和凋亡，從而發(fā)揮調(diào)控腫瘤進(jìn)展的作用，整合素β1通過Hedgehog途徑調(diào)節(jié)大腸癌細(xì)胞增殖和遷移[10]。Hecht等[1]研究發(fā)現(xiàn)，整合素α6、α3在子宮內(nèi)膜癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，隨腫瘤組織學(xué)分期的增加其表達(dá)水平升高，而正常子宮內(nèi)膜腺上皮及子宮內(nèi)膜原位癌中呈低表達(dá)。鄧樑卿等[11]研究發(fā)現(xiàn)，整合素α ν β3在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，其表達(dá)從正常子宮內(nèi)膜組織到子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)展過程中逐漸增加，隨臨床分期、肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面的發(fā)展，其表達(dá)均顯著增加，其表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)，而朱婷等[12]與其意見不統(tǒng)一。目前整合素在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用尚不明確，以Hecht等的意見為主流。

本課題前期研究表明，整合素β1在子宮內(nèi)膜癌中呈高表達(dá)[9]，本研究亦顯示，整合素β1在子宮內(nèi)膜腺癌中呈高表達(dá)，主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜組織的腺上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞質(zhì)，且其表達(dá)程度與癌細(xì)胞的組織學(xué)分級和手術(shù)病理分期呈正相關(guān)，由此推測，在子宮內(nèi)膜腺癌組織腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)成分黏附過程中，通過增加細(xì)胞膜整合素β1-受體分子的分布數(shù)量和質(zhì)量并與層粘連蛋白、纖維連接蛋白等ECM配體結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的黏附擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，整合素的表達(dá)或功能的變化可能與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

3.2 TIMP-1與子宮內(nèi)膜腺癌的關(guān)系

TIMPs是重要的內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子，能抑制MMPs的活性[14-15]，MMPs及其抑制劑在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[16-17]。TIMP-1在結(jié)腸癌和乳腺癌組織中呈高表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，TIMP-1表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞漿，在子宮內(nèi)膜腺癌組織中呈高表達(dá)，與臨床病理分期呈正相關(guān)，隨病理分級增高，表達(dá)增加，表明TIMP-1與子宮內(nèi)膜腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TIMP-1對所有類型MMPs均有抑制作用，盡管TIMPs可抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，但本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜腺癌組織TIMP-1的表達(dá)是上調(diào)的，TIMP-1表達(dá)水平增高與腫瘤的較差預(yù)后呈正相關(guān)，其機(jī)制可能是TIMP-1與MMPs表達(dá)水平存在不平衡，這種失衡加速了細(xì)胞外基質(zhì)的降解，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。

3.3 整合素β1與TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的關(guān)系

整合素通過調(diào)控MMPs的生成及激活其對基質(zhì)蛋白的降解，利于癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。TIMP-1對所有類型MMPs均有抑制作用，可抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，但本實(shí)驗(yàn)顯示，整合素β1與TIMP-1在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，兩者與臨床病理分期均呈正相關(guān)，整合素β1表達(dá)與病理分級呈正相關(guān)，但TIMP-1表達(dá)與病理分級無相關(guān)，TIMP-1的表達(dá)并未顯示出其抑制子宮內(nèi)膜腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，也并未顯示出TIMP-1與整合素β1相互間的負(fù)性調(diào)節(jié)作用關(guān)系。整合素β1與TIMP-1與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，兩者協(xié)同參與子宮內(nèi)膜腺癌的惡性行為，影響子宮內(nèi)膜腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，可能并非單獨(dú)簡單、直接正性和負(fù)性調(diào)節(jié)關(guān)系，可能系整合素β1與TIMP-1和MMPs之間的動態(tài)平衡在影響腫瘤浸潤與侵襲過程[20]，其在子宮內(nèi)膜腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用還需要深入研究。

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（收稿日期：2015-07-28 本文編輯：王紅雙）