楊葵華，邊清泉，呂瑞，秦曉柳

（綿陽(yáng)師范學(xué)院化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，四川綿陽(yáng)621000）

人參果中氨基酸含量的測(cè)定

楊葵華，邊清泉，呂瑞，秦曉柳

（綿陽(yáng)師范學(xué)院化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，四川綿陽(yáng)621000）

采用單因素試驗(yàn)對(duì)提取條件進(jìn)行選擇，氨基酸與茚三酮顯色后，用分光光度法測(cè)定人參果中氨基酸含量。檢測(cè)波長(zhǎng)為565 nm，料液比為1∶15，乙醇濃度為70%，水浴回流4 h，回流兩次；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程A=0.035 2C-0.006 5，r= 0.999 3，氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。平均回收率為99.5%，RSD為2.9%。

人參果；氨基酸；分光光度法；測(cè)定

氨基酸（Amino acid）是構(gòu)成蛋白質(zhì)（protein）的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使它的分子具有生化活性。而蛋白質(zhì)是人體的主要“建筑材料”，是生命得以延續(xù)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。藥理研究表明單體成分在保肝［1］、增強(qiáng)免疫功能［2］、抗氧化［3］等方面作用很明顯。人參果亦稱(chēng)蕨麻［4-6］富含大量蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，藥用保健價(jià)值頗高，開(kāi)發(fā)利用潛力巨大。目前少有對(duì)人參果中氨基酸含量測(cè)定的研究報(bào)告，因此本文采用紫外分光光度法［7］對(duì)人參果中氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)該水果的質(zhì)量評(píng)價(jià)具有一定的意義。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

T6新世紀(jì)紫外分光光度儀：南京華璧科學(xué)儀器有限公司；比色皿、比色管、容量瓶、人參果：阿壩藏族羌族自治州壤塘縣農(nóng)資公司；實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水和二次蒸餾水。

2%茚三酮溶液：稱(chēng)量茚三酮粉末1.000 0 g，加70%的乙醇使之溶解成50 mL，冷藏備用。

磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）：精密稱(chēng)取磷酸二氫鉀1.701 1 g、氫氧化鈉0.236 0 g混合加蒸餾水使其溶解，用二次蒸餾水定容至250 mL。

0.1mg/mL酪氨酸對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取酪氨酸0.010 0 g，加0.02 mol/L的氫氧化鈉溶液10.0 mL，溶解完全后用二次蒸餾水定容至100 mL。

1.2樣品預(yù)處理

用蒸餾水除去樣品表面附著的雜質(zhì)及金屬離子，烘干、粉碎，裝于試劑瓶備用。

取待測(cè)樣品2 g加入定體積、定濃度的乙醇，回流一定時(shí)間并回流兩次，合并濾液，濃縮回收乙醇，浸膏用蒸餾水加熱溶解，定容至50 mL待測(cè)。

2結(jié)果與討論

2.1波長(zhǎng)的選擇

取酪氨酸對(duì)照品溶液1.00 mL于50 mL容量瓶中，加茚三酮溶液1.00 mL和磷酸鹽緩沖液1.00 mL，搖勻，水浴加熱15 min，取出，冷卻，用蒸餾水定容至50 mL。在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)中進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示對(duì)照品溶液在565 nm處有最大吸收。因此，實(shí)驗(yàn)的最佳測(cè)定波長(zhǎng)為565 nm。

2.2顯色時(shí)間的選擇

取2 mL酪氨酸對(duì)照品液于容量瓶中，按照試驗(yàn)方法，在其他條件不變的情況下，以6 min為起點(diǎn)，以3 min為梯度，改變?cè)诜序v水浴鍋中的加熱時(shí)間，測(cè)定其吸光度，測(cè)定結(jié)果顯色時(shí)間為15 min吸收波長(zhǎng)最長(zhǎng)。

2.3乙醇濃度的選擇

精密稱(chēng)取樣品6份，每份2.0000g，分別加入50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇30 mL，回流提取2次，每次2 h，顯色定容后測(cè)吸光度A，并計(jì)算游離氨基酸的含量，結(jié)果表明用70%乙醇提取，氨基酸的含量最高。因此，選用70%的乙醇作為提取溶劑。

2.4料液比的選擇

精密稱(chēng)取樣品5份，每份2.000 0 g，按料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，分別加入70%的乙醇進(jìn)行回流提取，按實(shí)驗(yàn)方案顯色定容后測(cè)吸光度A，并計(jì)算總氨基酸的含量，結(jié)果顯示料液比為1∶15時(shí)提取效率最高。因此，選取料液比為1∶15。

2.5回流時(shí)間的選擇

精密稱(chēng)取樣品4份，回流提取時(shí)間分別為2、3、4、5 h，按實(shí)驗(yàn)方案顯色后，定容測(cè)吸光度A，并計(jì)算樣品中氨基酸的含量，結(jié)果表明回流4 h氨基酸含量最高。

2.6緩沖溶液用量的選擇

按照試驗(yàn)方法，在其他條件不變的情況下，以0.5 mL為梯度，改變磷酸鹽緩沖溶液的用量，測(cè)定其吸光度。結(jié)果表明用量在1.00 mL時(shí)吸光度最大，因此選取磷酸鹽緩沖溶液的用量為1.00 mL。

2.7茚三酮溶液用量的選擇

按照試驗(yàn)方法，在其他條件不變的情況下，以0.5 mL為梯度，改變茚三酮溶液的用量，測(cè)定其吸光度，結(jié)果表明用量在1.00 mL時(shí)吸光度最大，因此茚三酮溶液的用量為1.00 mL。

2.8精密度實(shí)驗(yàn)

精確量取樣品溶液1.00 mL，按實(shí)驗(yàn)方案在565 nm處連續(xù)測(cè)定7次，吸光度值分別為0.489、0.491、0.492、0.492、0.491、0.491，0.490，RSD=0.2%，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精確量取樣品溶液1.00 mL，按實(shí)驗(yàn)方案在565 nm處每隔10分鐘測(cè)一次吸光度值，連續(xù)測(cè)定7次，吸光度值分別為0.491、0.491、0.492、0.490、0.491、0.489、0.491，RSD=0.2%。結(jié)果表明樣品溶液在1 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.10回收率實(shí)驗(yàn)

采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定氨基酸的回收率。結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率為99.5%，RSD=2.9%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

表1　加標(biāo)回收率（n=6）Table 1The recovery of standard addition

2.11樣品液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

由于樣品液本身具有一定的顏色，在進(jìn)行紫外測(cè)定時(shí)空白液里也需要加入相同體積的樣品液，提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。

2.12氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

精取0.10 mg/mL酪氨酸對(duì)照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，各加2%茚三酮溶液1.00 mL，緩沖液1.00 mL，水浴加熱15 min，取出，冷卻，用蒸餾水定容至50 mL在565 nm處測(cè)吸光度。以酪氨酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖1。

圖1　氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖Fig.1The standard curve of amino acid

曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸方程：A=0.035 2C-0.006 5相關(guān)系數(shù)R=0.999 3。氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.13測(cè)定結(jié)果

取待測(cè)樣品粉末3份，各2.000 0 g，加入70%乙醇30 mL后，回流提取2次，回流4 h，合并濾液，濃縮回收乙醇，浸膏用蒸餾水加熱溶解，定容至50 mL，制備成編號(hào)為1、2、3號(hào)樣品液。分別取1.00 mL，加入1.00 mL pH=6.8的磷酸鹽緩沖液、1.00 mL的顯色液，搖勻后放在沸水浴中加熱15 min。取出快速冷卻后，加水定容至50 mL，放置10 min。在565 nm處，以試劑空白溶液作參比，測(cè)定吸光度（A）。測(cè)定結(jié)果按參考公式［8］計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品測(cè)定結(jié)果Table 2Determination results of samples

人參果中氨基酸的平均含量為10.45 mg/g，RSD= 0.8%。實(shí)驗(yàn)證明人參果中含有豐富的氨基酸，用紫外分光光度法測(cè)定人參果中氨基酸的含量，此方法簡(jiǎn)便、快捷，回收率好。

3結(jié)論

人參果中富含大量蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，本文采用紫外分光光度法測(cè)定人參果中游離氨基酸的含量，方法簡(jiǎn)便、快捷，準(zhǔn)確。藥理研究表明單體成分在保肝、增強(qiáng)免疫功能、抗氧化等方面作用很明顯，保健價(jià)值頗高，對(duì)其開(kāi)發(fā)利用潛力巨大。

［1］閔光寧，鹿瓊，閔光濤，等.蕨麻多糖的提取及對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，34（2）：5-7

［2］陳炅然，胡庭俊，程富勝，等.蕨麻多糖的免疫藥理實(shí)驗(yàn)研究［J］.獸藥與飼料添加劑，2005，10（5）：1-2

［3］謝學(xué)淵，王強(qiáng).蕨麻提取物抗衰老作用研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2007，36（8）：734-736

［4］鐵桂春，劉紅獻(xiàn).人參果的特性及應(yīng)用價(jià)值［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007，12（10）：43-45

［5］李棟元，毛東風(fēng)，楊具田，等.蕨麻營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定與分析［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2007（3）：43-44

［6］褚良，王立波，張哲，等.藏藥蕨麻的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008，10（3）：10-12

［7］范婉萍，吳婕.用分光光度法測(cè)定含氨基酸類(lèi)制品中的氨基酸含量［J］.中國(guó)測(cè)試技術(shù)，2007，33（3）：117-119

［8］楊永壽，肖培云，劉光明.蜚蠊藥材質(zhì)量控制方法研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（8）：1808-1809

Determination of the Amino Acids in the Ginseng

YANG Kui-hua，BIAN Qing-quan，Lü Rui，QIN Xiao-liu
（Mianyang Normal University department of Chemistry and Chemical Engineering，Mianyang 621000，Sichuan，China）

To determine the amino acids in the ginseng.Single factor test was employed to optimize the extracting condition of the amino acids，afterward，the amino acids were determined by UV after colored with ninhydrin.The optimal extracting method was：70%alcohol was employed as the extracting agent，with the solid-liquid ratio of 1∶15，the amino acids was extracted for twice of 4 hours，and then the content was detected by UV at 565 nm.It shows that the standard curve equation was A=0.035 2C-0.006 5 with the correlation coefficient of 0.999 3，which explained the amino acids had an good liner relationship between 2 μg/mL-12 μg/mL at the detection wavelength of 565 nm.The recovery was 99.5%with the RSD of 2.9%，which implied a high reliability，precision and accuracy of this method.

Ginseng；amino acids；spectrophotometry；content

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.11.030

2013-12-05

四川省教育廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目（12ZA081）

楊葵華（1963—），女（漢），副教授，本科，主要從事食品化學(xué)的教學(xué)與研究。