吳梅梅　常明向.湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北武漢43006；2.湖北中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院，湖北武漢43006

甲氧芐啶與58種中藥聯(lián)用抗菌增效作用的研究

吳梅梅1常明向2▲
1.湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北武漢430061；2.湖北中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院，湖北武漢430061

目的系統(tǒng)研究甲氧芐啶（TMP）對具抗菌作用中藥的抗菌增效作用。方法選擇58種不同功效種類中藥，采用瓊脂稀釋法分別對中藥、TMP、中藥聯(lián)用TMP抗菌作用進行研究。結(jié)果除五倍子外，TMP對所研究的單味中藥基本上均有抗菌增效作用，但對不同中藥、不同菌種增效強度有所不同。總體上，對金葡菌、水弧菌增效作用較強，對銅綠假單胞菌增效作用較弱。大多數(shù)中藥對銅綠假單胞菌無抗菌作用，與TMP聯(lián)用后大多顯示出與TMP相當或增強的抗菌作用。補益類中藥與TMP聯(lián)用后，抗菌增效作用增幅較大。結(jié)論TMP對所研究的57種中藥具抗菌增效作用。

甲氧芐啶；中藥；抗菌增效

甲氧芐啶（TMP）屬抑菌劑，它能大幅度地增強磺胺類藥物的效力，故其有磺胺增效劑之稱。甲氧芐啶和其他抗生素配伍也能更好地發(fā)揮抗生素的殺菌或抑菌作用，同樣能起抗菌增效的效果［1-5］。

隨著對中藥抗菌作用研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)中藥中有多種品種體外對多種致病菌有殺滅或抑制作用，但臨床效果并不佳；究其原因，其一是中藥抗菌效能不夠，筆者曾比較研究中西抗菌作用，發(fā)現(xiàn)1 g菌得治抗菌作用相當于3 kg左右黃連的作用［6］；其二可能是中藥中抗菌有效成分在體內(nèi)的血藥濃度及持續(xù)時間不夠所致，由于中藥使用最大劑量的限制，靠增大劑量來增加體內(nèi)血藥濃度往往難以如愿，如《中國藥典》2010年版所載黃連常用劑量為3～5 g。

為了增強中藥對細菌性疾病的治療效果，方法之一是在中醫(yī)藥理論指導下運用某些西藥，即西藥中藥化；方法之二是將某些西藥（如TMP）與中藥伍用，取其相互增效減毒作用。近年來，TMP與中藥伍用進行增效作用研究也有不少報道［7-12］，結(jié)果均是TMP對中藥抗菌增效作用明顯。筆者曾采用瓊脂稀釋法對比研究了黃連、香連丸、五味消毒飲與TMP聯(lián)用對5種不同細菌的體外抗菌增效作用，結(jié)果TMP對黃連及其復方均有抗菌增效作用。為進一步系統(tǒng)、深入、廣泛地研究TMP與中藥聯(lián)用抗菌增效情況，本研究從具抗菌作用的中藥中，選擇有代表性的不同功效種類58種中藥進行系統(tǒng)研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下：

1　材料與儀器

1.1儀器

XSW-CJ-2A標準型凈化工作臺（吳江市津化設備總廠）；LRH-250A生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠）；LMQR-4060型立式滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）。

1.2培養(yǎng)基

MH瓊脂培養(yǎng)基（江門市凱琳貿(mào)易有限公司）；營養(yǎng)肉湯（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.3菌株

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、水弧菌，以上菌種購置于武漢大學微生物典藏中心。

1.4樣品配制

1.4.1中藥解表藥：麻黃（5 g），桂枝（5 g），桑葉（7.5 g），菊花（5 g），野菊花（5 g）。清熱藥：知母（5 g），夏枯草（7.5 g），梔子（5 g），大青葉（7.5 g），紫草（5 g），赤芍（5 g），丹皮（5 g），黃連（2 g），黃芩（5 g），黃柏（5 g），苦參（5 g），金銀花（5 g），連翹（5 g），蒲公英（15 g），紫花地?。?.5 g），馬齒莧（7.5 g），穿心蓮（2.5 g），天葵子（5 g），地骨皮（7.5 g），胡黃連（5 g）。瀉下藥：大黃（5 g）。利水滲濕藥：車前草（5 g），木通（5 g），茵陳（15 g），金錢草（15 g）?；瘽袼帲汉駱悖? g）。祛風濕藥：威靈仙（5 g），虎杖（7.5 g）。理氣藥：枳實（5 g），烏藥（5 g），旋覆花（5 g）?；钛鏊帲旱ⅲ?.5 g）。止血藥：地榆（5 g），仙鶴草（7.5 g）。消食藥：山楂（5 g）。止咳平喘藥：紫菀（5 g）。祛寒藥：高良姜（5 g）。安神藥：遠志（2.5 g）。補虛藥：黃芪（5 g），甘草（5 g），當歸（5 g），何首烏（7.5 g），白芍（5 g），仙茅（5 g），山茱萸（5 g），天冬（5 g）。收斂藥：訶子（5 g），五倍子（1.5 g）。外用藥：雄黃（0.5 g），硼砂（1.5 g），明礬（1.5 g），硫磺（1.5 g），兒茶（1.5 g）。以上藥物均取自湖北省中醫(yī)院中藥房，經(jīng)張躍軍主任藥師鑒定為正品后進行試驗。以上藥物抗菌試驗時按各藥物名后括號中劑量進行，該劑量為《中國藥典》2010年版所載劑量的一半。以上每種中藥分別常規(guī)煎煮濃縮成50mL。取10 mL濃縮成浸膏狀，加入無菌普通肉湯培養(yǎng)基10 mL，微熱使溶，搖勻即得各種中藥供試藥液。

1.4.2 TMP稱取TMP100mg于試管中，加入肉湯10mL，微熱使溶，搖勻即得TMP供試藥液。

1.4.3中藥+TMP復方取上述每種中藥煎劑10mL濃縮成浸膏狀，再加入TMP 100mg及肉湯培養(yǎng)基10mL，微熱使溶搖勻即得含中藥+TMP復方供試藥液。

2　方法與結(jié)果

2.1藥液的稀釋

無菌試管3排，每排15管，除每排的第14管外，其余各管中均加入無菌普通肉湯培養(yǎng)基5 mL，然后于每排試管的第1管分別加入上述每種中藥3種供試藥液5mL，混勻，吸出5mL加至第2管中，同法依次稀釋至第13管，混勻后取出5mL于第14管中。每排第14管作無菌陰性對照管，第15管作無藥陽性對照管。然后于各管中加5mL熱無菌肉蛋白胨瓊脂，搖勻，趁熱依次傾入到同一型號的無菌培養(yǎng)皿中，放置使瓊脂冷凝。藥物倍比稀釋倍數(shù)依次為1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048倍。

2.2菌液的加入

除14號培養(yǎng)皿外，1～15號培養(yǎng)皿分別劃分為5個近等的區(qū)域，并分別編號，然后在每個區(qū)域中分別加入5種經(jīng)16 h培養(yǎng)的各含菌培養(yǎng)液0.01 mL，37℃培養(yǎng)18～24 h。

2.3結(jié)果判斷

以細菌的生長有無為判斷指標，觀察細菌培養(yǎng)結(jié)果。具抗菌作用（-）指接種區(qū)光滑無可見菌落，無抗菌作用（+）指接種區(qū)可見較多細菌生長。1～11管藥物稀釋倍數(shù)依次為原濃度的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048。藥物稀釋倍數(shù)越大表示藥物最小抑菌（MIC）濃度越小，抗菌作用越強。因藥物種類較多，為方便直觀比較，抗菌作用強度結(jié)果以具抗菌作用（-）最大藥物稀釋倍數(shù)表示。0：表示第1管（1/2倍原濃度）即無抗菌作用。結(jié)果見表1、2。

3　討論

本研究所采用瓊脂稀釋法是在傳統(tǒng)實驗方法基礎上加以改進而成。傳統(tǒng)方法一次只能進行一種細菌的抗菌實驗，而改進后的方法一次可同時進行多種細菌的抗菌實驗，大大提高實驗效率，而且操作簡便、快捷，干擾因素少，重復性好，結(jié)果更準確，可比性更強。結(jié)果表明，在本實驗條件下，不同中藥抗菌作用強度不同。常用的清熱解毒中藥如黃連、黃芩、黃柏、苦參、金銀花、連翹、蒲公英、紫花地丁、馬齒莧、穿心蓮等抗菌作用強度并不強，反而補益類藥中的山茱萸、收斂藥中的訶子、外用藥中的硼砂及明礬顯示出有較強的抗菌作用。TMP與不同功效種類的57種單味中藥聯(lián)用研究表明，TMP對所研究的單味中藥基本上均有抗菌增效作用，但對不同中藥、不同菌種增效強度有不同。

總體上，對不同菌種而言，對金葡菌、水弧菌增效作用較強，對銅綠假單胞菌增效作用較弱。在本實驗條件下，大多數(shù)中藥對銅綠假單胞菌無抗菌作用，而TMP有一定的作用，中藥與TMP聯(lián)用后大多顯示出與TMP相當或增強的抗菌作用，這些中藥與TMP聯(lián)用后客觀上增強了這些中藥的抗菌作用。

補益類藥中除山茱萸外，黃芪、甘草、當歸、何首烏、白芍、仙茅、天冬的抗菌作用均較弱，但與TMP聯(lián)用后，抗菌作用增幅較大。外用藥中硼砂、明礬、兒茶具有較強的抗菌作用，雄黃、硫磺作用較弱，但與TMP聯(lián)用后，抗菌作用均增強。外用藥常直接用于創(chuàng)面，與體內(nèi)影響因素無關(guān)，如與TMP聯(lián)用將直接有益于提高中藥臨床療效。

表1　 TMP（100 m g）與大黃（1 g）聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物稀釋倍數(shù)）

表2　 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

（續(xù)表2）　表2 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

目前，中藥與TMP聯(lián)用研究大多是進行體外抗菌實驗研究［13］，體內(nèi)研究報道不多。筆者曾將TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用進行小鼠體內(nèi)研究［14］，結(jié)果聯(lián)用TMP后對小鼠保護作用明顯增強。還曾將TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用治療菌痢進行初步臨床療效觀察，中藥小兒止瀉灌腸液對照組6例，TMP與小兒止瀉灌腸液聯(lián)用組12例，用藥3 d，結(jié)果聯(lián)用TMP后治療作用大幅增強。韓鐵鎖［15］研究表明中藥增效抗菌復方具有較強的清熱解毒和殺菌作用，還可增強機體免疫力。增強機體免疫力是中藥體內(nèi)發(fā)揮抗菌作用的主要機制之一，但在機體感染期，體內(nèi)病菌大量存在，只靠增強機體免疫力是不夠的，因中藥直接殺菌作用明顯弱于抗生素，結(jié)果是中藥抗菌預防效果明顯優(yōu)于治療效果。孫懷剛等［12］進行了中藥增效抗菌復方對人工誘發(fā)雞大腸埃希菌病的療效試驗，結(jié)果中、高劑量的中藥增效抗菌復方與環(huán)丙沙星的治療效果相當，間接證明中藥增效抗菌復方也具有較強的殺菌作用。

當前，市場上將TMP與中藥聯(lián)用相關(guān)的產(chǎn)品只有增效黃連素片，TMP與中藥聯(lián)用的應用很少。不過從筆者及其他科研工作者所進行的TMP與中藥聯(lián)用的研究結(jié)果看，如果將TMP廣泛引入到中藥的基礎及臨床應用中，加強體內(nèi)及臨床應用研究，進行科學的聯(lián)合應用，取長補短，相信將會增強中藥的抗菌作用強度，提高中藥在細菌性疾病領域的作用。

（續(xù)表2）　表2 TMP與各中藥聯(lián)用抗菌作用結(jié)果（藥物最大稀釋倍數(shù)）

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Study on the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinesemedicine com bined w ith Trim ethoprim

WUMeimei1CHANGMingxiang2▲
1.Department of Pharmaceutical Affairs，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China；2.School of Clinical Medical，Hubei University of Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China

Objective To study the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinese medicine（TCM）combined with Trimethoprim（TMP）systematically.Methods The 58 kinds of TCM were selected according to their types of efficacy and antibacterial effects，then the agar dilutionmethod was adopted to compare the antibacterial effect between TCM，TMP and TCM+TMP.Resu lts Except Gallnut，the result showed that TMP could mainly increase the antibacterial effects of TCM on 6 kinds of germs，but synergistic effect different on different kind of TCM and germ.As a whole，synergistic effect was stronger on Staphylococcus aureus and Vibrio aquatilis and weaker on Pseudomonas aeruginosa.Most of TCM had no antibacterial effect on Pseudomonas aeruginosa，after combined with TMP，their effects against Pseudomonasaeruginosawere increased orequivalent to TMP.Thesynergistic extentoftonic classChinesemedicine were increased largely when combined with TMP.Conclusion TMP posses synergistic effects on 57 kinds of TCM.

Trimethoprim；Traditional Chinesemedicine；Antibacterial synergistic effect

S853.7

A

1673-7210（2015）05（a）-0027-06

2015-01-02本文編輯：衛(wèi)軻）