李偉，王道奎，王增武，宋仁興

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡配體轉(zhuǎn)染骨髓干細(xì)胞后對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外靶向抗瘤作用

李偉1，王道奎2，王增武2，宋仁興2

（1.濰坊醫(yī)學(xué)院山東濰坊261053；2.山東省濰坊市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，山東濰坊261041）

目的探究腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）體外轉(zhuǎn)染骨髓干細(xì)胞（BMSCs）后對(duì)U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的作用。方法利用Transwells小室研究骨髓干細(xì)胞的腫瘤遷徙性。將攜帶TRAIL的質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染人骨髓干細(xì)胞，采用PCR及Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BMSCs中目的基因的表達(dá)強(qiáng)度。將轉(zhuǎn)染的BMSCs與U251細(xì)胞體外共培養(yǎng)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的BMSCs誘導(dǎo)U251細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果BMSCs具備向腫瘤細(xì)胞的遷徙性。轉(zhuǎn)染后的骨髓干細(xì)胞表達(dá)、分泌TRAIL，且干細(xì)胞凋亡情況無(wú)變化。將轉(zhuǎn)染后的BMSCs與U251細(xì)胞共同培養(yǎng)，可明顯提高U251細(xì)胞的凋亡率，BMSCs TRAIL+U251組U251細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論在體外實(shí)驗(yàn)中，利用BMSCs腫瘤遷徙的特異性，將BMSCs作為基因載體，可提高TRAIL對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的靶向抑癌作用。

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡配體；U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞；基因治療

腦膠質(zhì)瘤為顱內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，死亡率居顱內(nèi)腫瘤的首位，呈浸潤(rùn)侵襲性生長(zhǎng)，術(shù)后極易復(fù)發(fā)，5年生存率不到20%。TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducing ligand，TRAIL）屬于TNFSF中的成員之一，可與膜受體結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，且對(duì)正常的組織和細(xì)胞無(wú)毒性作用［1］。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，BMSCs）具有很強(qiáng)的分化能力，在合適的條件下可以分化成骨、軟骨、脂肪組織等多種組織細(xì)胞［2-4］。BMSCs的這一特點(diǎn)及其靶向遷徙的能力［5］使它在基因治療中具有了獨(dú)特的價(jià)值。BMSCs可作為理想的分子載體，通過(guò)外源治療基因TRAIL修飾后的BMSCs可以向受損組織趨化及發(fā)揮修復(fù)作用。由此可知，BMSCs經(jīng)過(guò)腫瘤殺傷基因修飾后有可能攜帶治療性物質(zhì)靶向殺傷腫瘤細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)將TRAIL的選擇性殺傷細(xì)胞作用與BMSCs的腫瘤細(xì)胞遷徙性相結(jié)合，探究TRAIL轉(zhuǎn)染骨髓干細(xì)胞后靶向治療腦膠質(zhì)瘤的潛在價(jià)值。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1細(xì)胞和主要試劑人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞購(gòu)于美國(guó)Millipore公司，U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞株購(gòu)自南京凱基生物公司，血清和DMEM培養(yǎng)基均購(gòu)于美國(guó)Millipore公司，RT-PCR（Reverse Transcription-Polym erase Chain Reaction，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）試劑盒，美國(guó)BIO-RAD公司，Trizol試劑，Invitrogen公司，質(zhì)粒提取盒，天根生化科技有限公司，轉(zhuǎn)染試劑（Trans IT-2020），Invitrogen公司，流式試劑，美國(guó)BD公司，一抗、二抗，英國(guó)Abcam公司，質(zhì)粒由加拿大UBC大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2細(xì)胞培養(yǎng)與傳代取出BMSC（U251）冷凍保存細(xì)胞于37℃水浴鍋中迅速?gòu)?fù)蘇，將細(xì)胞液移于離心管中離心、收集細(xì)胞，再加入含10%胎牛血清（fatal bovine serum，F(xiàn)BS）的完全培養(yǎng)基，充分吹打懸浮細(xì)胞，移于培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%二氧化碳孵育箱培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)到80%～90%時(shí)，用0.25%胰酶消化、收集細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1BMSCs向腫瘤細(xì)胞遷徙的體外實(shí)驗(yàn)利用8μm孔徑的Transwells小室進(jìn)行BMSCs遷徙實(shí)驗(yàn)。將1×105個(gè)/ml BMSCs置于上室，U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞置于下室，然后置于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中24 h，取下濾膜，用PBS沖洗2遍，并用細(xì)胞鏟刮除黏附的細(xì)胞，甲醛固定30 min，風(fēng)干后用0.1%結(jié)晶紫染色30 min，隨機(jī)選取5個(gè)視野在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。

1.2.2質(zhì)粒的擴(kuò)增與提取質(zhì)粒屬于綠色熒光蛋白的分泌型TRAIL真核表達(dá)質(zhì)粒，內(nèi)含有目的基因TRAIL以及抗AMP（ampicillin，氨芐青霉素）片段，置于-20℃保存?zhèn)溆?。取質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞（由實(shí)驗(yàn)室提供）冰上解凍，將兩者混勻后于42℃水浴90 s，加入LB培養(yǎng)基（Luria-Bertani培養(yǎng)基），搖床振蕩復(fù)蘇細(xì)胞；在選擇性培養(yǎng)板（AMP）上涂板，過(guò)夜培養(yǎng)。挑取單菌落加入含AMP的LB培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，待LB變渾，采用高純度質(zhì)粒小提中量試劑盒（tiangen）進(jìn)行提取，具體參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，提取的質(zhì)粒置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSC細(xì)胞待細(xì)胞達(dá)80%左右時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞用無(wú)雙抗培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h。將含TRAIL的質(zhì)粒溶于Opti-MEM培養(yǎng)基中混勻，另取轉(zhuǎn)染試劑Trans IT-2020溶于Opti-MEM培養(yǎng)基混勻，將兩溶液吹打混勻后立即加入細(xì)胞中，并邊加邊搖，置于37℃、5%二氧化碳孵育箱中培養(yǎng)，6 h后換成完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)24～48 h后于顯微鏡下觀察。

1.2.4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的BMSCs中目的基因的表達(dá)應(yīng)用PCR檢測(cè)TRAIL基因的表達(dá)情況，培養(yǎng)24 h后收集各組BMSC細(xì)胞，用PBS（phosphate belanced solution，磷酸緩沖液）沖洗3次，加入Trizol裂解細(xì)胞，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)提取總RNA（ribonucleic acid，核糖核酸）。引物序列通過(guò)Olig 6軟件設(shè)計(jì)，由寶生物公司合成。擴(kuò)增TRAIL基因編碼序列的引物：正向5'-TGACTGTGGCTGTGACTTA-3'；反向5'-ACTCCCAG GTTTCTATCTT-3'。β-actin的正向5'-GTGGGGCG CCCCAGGCACCA-3'；反向5'-CTCCTTAATGTCACG CACGATTTC-3'。PCR擴(kuò)增條件：共30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃30 s，55℃30 s，72℃60 s。同時(shí)擴(kuò)增管家基因β-actin作為對(duì)照驗(yàn)證。每孔加5μl樣品，并在一側(cè)加入5μl的2 000 Marker，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，20 min后獲取圖片，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

應(yīng)用Western blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，β-actin作為內(nèi)參。培養(yǎng)48 h后收集各組細(xì)胞蛋白產(chǎn)物，取50μl樣本與5×SDS-PAGE緩沖液混合，電泳后經(jīng)轉(zhuǎn)膜儀將樣本轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，經(jīng)漂洗、封閉、一抗（抗TRAIL）孵育、二抗孵育，檢測(cè)結(jié)果并通過(guò)Image J2X軟件掃描圖像及定量分析。

1.2.5流式細(xì)胞儀檢測(cè)U251細(xì)胞的凋亡率各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處理48 h后，收集培養(yǎng)基到新的離心管中，加PBS沖洗3次，將沖洗液吸取到相應(yīng)離心管中（避免丟失懸浮的凋亡細(xì)胞影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。用0.25%胰酶消化、收集細(xì)胞到相應(yīng)的離心管，1 000 r/min，離心5 min。用預(yù)冷的PBS沖洗3次，然后用1×bind buffer將細(xì)胞配成（1-5）×104/ml的細(xì)胞懸液，取100μl加入新的EP管中，每管加5μl Annexin V-FITC和5μl PI（propidium iodide），暗環(huán)境培養(yǎng)15 min后加入400μl 1×bind buffer，立即用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，1 h內(nèi)完成，并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果（實(shí)驗(yàn)需設(shè)置3組質(zhì)控樣本）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用配對(duì)資料t檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，轉(zhuǎn)染后的BMSCs細(xì)胞對(duì)U251細(xì)胞的增抑制率及凋亡率比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1BMSCs向U251細(xì)胞的遷徙能力

應(yīng)用Transwell法驗(yàn)證BMSCs向腫瘤細(xì)胞的遷徙能力，BMSCs與U251細(xì)胞共培養(yǎng)48 h后，隨機(jī)選取5個(gè)視野在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，可見(jiàn)U251細(xì)胞培養(yǎng)液可刺激更多的BMSCs發(fā)生遷徙，與生理鹽水及培養(yǎng)基比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)圖1）。熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)，BMSCs主要聚集于U251細(xì)胞周圍，而在無(wú)U251細(xì)胞的培養(yǎng)基周圍僅散在少量BMSCs（見(jiàn)圖2）。由此可證明，BMSCs向腫瘤細(xì)胞遷徙的特異性。

圖1　BMSCs向腫瘤細(xì)胞的遷徙能力

圖2　熒光顯微鏡下觀察，BMSCs透過(guò)Transwell小室向腫瘤細(xì)胞的遷徙能力（×200）

2.2RT-PCR及Western blot檢測(cè)目的基因表達(dá)

通過(guò)PR-PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增的目的基因分別加樣進(jìn)行瓊脂糖電泳，經(jīng)20 min后觀察結(jié)果并成像（見(jiàn)圖3）。結(jié)果顯示條帶隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)依次由淡變亮，表明TRAIL在BMSCs內(nèi)成功表達(dá)。應(yīng)用Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組目的基因的表達(dá)情況，可見(jiàn)轉(zhuǎn)染組的TRAIL表達(dá)與PCR結(jié)果有相同效果，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量相繼增加，βactin在不同細(xì)胞的表達(dá)量無(wú)差異。見(jiàn)圖4。

圖3　RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后TRAIL基因的表達(dá)情況

圖4　應(yīng)用Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后TRAIL的表達(dá)情況

2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)U251細(xì)胞的凋亡率

采用Annexin V/PI雙染色法進(jìn)行檢測(cè)各組U251細(xì)胞的凋亡情況并記錄數(shù)據(jù)，U251細(xì)胞的凋亡率取右下象限（見(jiàn)圖5），即Annexin V-FITC（+）/PI（-），由表1可見(jiàn)轉(zhuǎn)染組誘導(dǎo)U251細(xì)胞的凋亡率與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而未轉(zhuǎn)染組與空白組比較差異不明顯（P＞0.05）。TRAIL對(duì) BMSCs的凋亡作用見(jiàn)圖6。由表2可見(jiàn)轉(zhuǎn)染的TRAIL對(duì)BMSCs無(wú)明顯毒性作用（P＞0.05）。

圖5　流式細(xì)胞儀檢測(cè)共同培養(yǎng)48 h后U251細(xì)胞的凋亡率

圖6　流式細(xì)胞儀檢測(cè)TRAIL對(duì)BMSCs的促凋亡作用

表1　流式細(xì)胞儀檢測(cè)共同培養(yǎng)48 h后U251細(xì)胞的凋亡率（%，n=3±s）

表1　流式細(xì)胞儀檢測(cè)共同培養(yǎng)48 h后U251細(xì)胞的凋亡率（%，n=3±s）

注：1）與BMSCs+U251組比較，P＜0.05；2）與空白對(duì)照組比較，P＞0.05

項(xiàng)目BMSCsTRAIL+U251BMSCs+U251空白對(duì)照組凋亡率2.98 000±0.15 3951）0.81 330±0.50 0832）0.39 670±0.29 569

表2　流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染48 h后BMSCs的凋亡率（%，n=3±s）

表2　流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染48 h后BMSCs的凋亡率（%，n=3±s）

項(xiàng)目BMSCs TRAILBMSCs對(duì)照組P值凋亡率0.68 000±0.15 3950.67 670±0.29 5690.340

3 討論

人腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)外科最常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病迅速，致死率高［6-7］，目前針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療有放療、化療、手術(shù)治療，但治愈率很低，術(shù)后極易復(fù)發(fā)［8］，5年生存率也不足20%。因此，對(duì)腦膠質(zhì)瘤是治愈要探索新的治療手段，眾所周知，細(xì)胞的分化受到基因的嚴(yán)密調(diào)節(jié)，能否選擇一種方法在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)分化過(guò)程中殺傷腫瘤細(xì)胞呢？許多專家已經(jīng)證實(shí)腫瘤壞死因子和抑癌基因在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)分化中至關(guān)重要［9］，所以，基因治療腦膠質(zhì)瘤可能成為根治膠質(zhì)瘤的有效方法。

TRAIL是腫瘤壞死因子家族的最新成員，可與腫瘤細(xì)胞膜上的DR5結(jié)合，再通過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)組成DR5-FADD-Caspase 8（DISC）死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體，激活Caspase 8，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡［10］，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)影響［11］。另外，也有相關(guān)文獻(xiàn)證明TRAIL聯(lián)合放化療可顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性，增加耐藥性腫瘤的凋亡，因此，TRAIL日益受到人們的重視，但是TRAIL在腫瘤治療中的應(yīng)用較為局限，原因有：①TRAIL在血漿內(nèi)的半衰期極短，大約小于1 h［12］；②具備生物活性的TRAIL必須以三聚體的形式存在，故難以透過(guò)血腦屏障發(fā)揮作用；③應(yīng)用腺病毒基因療法體外能誘導(dǎo)數(shù)種人腫瘤細(xì)胞凋亡，但體內(nèi)有引起宿主抗病毒免疫反應(yīng)的可能。BMSCs的腫瘤遷徙性已在許多文獻(xiàn)中被證實(shí)，可能是腫瘤細(xì)胞分泌相關(guān)性因子，從而誘導(dǎo)BMSCs發(fā)生遷徙，BMSCs的這一特性為靶向殺傷腫瘤細(xì)胞提供了理想的載體。BMSCs可以向腫瘤組織趨化，定位于其間質(zhì)中增殖、分化［13］，所以將目的基因轉(zhuǎn)染入骨髓干細(xì)胞，通過(guò)骨髓干細(xì)胞將治療基因帶入腫瘤組織，由于治療基因的存在及分泌殺傷物質(zhì)從而達(dá)到腫瘤的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)主要是探究TRAIL基因作為目的基因轉(zhuǎn)染骨髓干細(xì)胞后對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外靶向抗瘤作用。

實(shí)驗(yàn)構(gòu)建TRAIL的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染骨髓干細(xì)胞，轉(zhuǎn)染成功后，通過(guò)PCR及Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后TRAIL的表達(dá)，由圖3、4可知轉(zhuǎn)染后的TRAIL基因在BMSCs中表達(dá)，且TRAIL的表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加。選擇第3天的轉(zhuǎn)染組與U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)U251細(xì)胞的凋亡率，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組U251細(xì)胞的凋亡率明顯增加，BMSCs作為基因載體誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，自身卻不發(fā)生凋亡。由此推斷，BMSCs作為有效的基因載體，不僅克服TRAIL基因在血漿中半衰期短的難題，而且TRAIL修飾后的BMSCs具備靶向抗瘤的作用，這為惡性膠質(zhì)瘤的治療提供了新的途徑。

綜上所述，在體外實(shí)驗(yàn)中利用BMSCs腫瘤遷徙的特異性，將BMSCs作為基因載體，可提高TRAIL對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的靶向抑癌作用。但U251細(xì)胞僅屬于腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的一個(gè)細(xì)胞系，不能反映所有顱腦腫瘤的特性，對(duì)其他類型的腦瘤細(xì)胞仍需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

［1］EHTESHAM M，KABOS P，GUTIERREZ MA，et al.Induction of glioblastoma apoptosis using neural stem cellmediated delivery of tumornecrosis factorrelated apoptosisinducing ligand［J］.Cancer Res，2002，62（24）：7170-7174.

［2］CARROLL SH，RAVID K.Differentiation of mesenchymal stem cells to ostebblasts and chondrocytes：a focus on adenosine receptors［J］.Expert Rev Mol Med，2013，15：e1.

［3］DI BERNARDO G，MESSINA G，CAPASSO S，et al.Sera of overweight people promote in vitro adipocyte differentiation of bone marrow stromal cells［J］.Stem Cell Res Ther，2014，5（1）：4.

［4］CHIU LH，LAI WF，CHANG SF，et al.The effect of type IIcollagen on MSC osteogenic differentiation and bone defect repair［J］. Biomaterials，2014，35（9）：2680-2691.

［5］EDITH MJ，NATHALIE MD，EDWARD EL，et al.CD4+T-cell help controls CD8+T-cell memory via TRAIL-mediated activation-induced cell death［J］.Nature，2005，434（7029）：88-93.

［6］苗旺，劉曉東，范益民，等.人腦膠質(zhì)瘤中RhoA的表達(dá)及其臨床意義［J/CD］.中華臨床醫(yī)師雜志，2011，5（9）：2549-2553.

［7］KREISL T，ZHANG W，ODIN Y，et al.A phaseⅡtrail of single-agent bevacizumab in patients with recurrent anaplastic glioma［J］.Neuro Oncol，2011，13（10）：1143-1150.

［8］RAHMAN R，SMITH S，RAHMAN C，et al.Antiangiogenic therapy and mechaisms of tumor Resistance in malignant glioma［J］.Oncol，2010，11（4）：2510-2516.

［9］ADACHI J，OHBAYASHI K，SUZUKI T，et al.Cell cycle arrestand astrocytic differen-tiation resulting from PTEN expression inglioma cells［J］.Neurosurg，1999，91（5）：822-830.

［10］BELLAIL AC，TSE MC，SONG JH，et al.DR5-medical DJSC controls caspase-8 cleavage and initiation of apoptosis in human glioblastomas［J］.J cell Mol Med，2010，14（6A）：1303-1317.

［11］張相華，徐漢軍，張力，等.外源性TRAIL基因轉(zhuǎn)染對(duì)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2012，11（6）：512-515.

［12］FESIK SW.Promoting apoptosis as a strategy for cancer drug discovery［J］.Neruochem，1999，73：2438-2357.

［13］WANG H，CAO F，DE A，et al.Trafficking mesenchymal stem cell engraft ment and differentiation in tumorbearing mice by bioluminescence imaging［J］.Stem Cells，2009，27（7）：1548-1558.

（張西倩編輯）

In vitrotargeted antitumor effects of bone marrow stem cells transfected by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand against U251 glioma cells

Wei LI1，Dao-kui WANG2，Zeng-wu WANG2，Ren-xing SONG2
（1.Weifang Medical University，Weifang，Shandong 261053，P.R.China；2.Department of Neurosurgery，Weifang People's Hospital，Weifang，Shandong 261041，P.R.China）

Abstrct：【Objective】To study the targeted antitumor effects of bone marrow stem cells（BMSCs）transfected by tumor necrosis factor-related apoptosis--inducing ligand（TRAIL）against gliomain vitro.【Methods】The migration capacity of BMSCs toward glioma was investigated using Transwells inserts.Thein vitroexpression of target gene in transfected BMSCs was detected by PCR and Western blot.The apoptosis of U251 cells was analyzed by flow cytometry after the co-culture with the transfected BMSCs.【Results】First，BMSCs had the capacity of mobilizing toward tumor cells.Second，although the BMSCs expressed and secreted TRAIL，their apoptosis was unchanged.Third，the apoptosis rate of U251 cells increased significantly after the co-culture with the transfected BMSCs（P＜0.05）.【Conclusions】Using BMSCs as gene vectors，the targeted antitumor effects of TRAIL against U251 glioma cells can be increased by the specific mobility of BMSCs towards tumorin vitro.

TRAIL；U251 cell；gene therapy；BMSC

R739.41

A

1005-8982（2015）36-0026-05

2015-06-29