申海鵬

本著“良心事業(yè)，潤(rùn)澤民生”的宗旨和“以技術(shù)為引領(lǐng)，以人才為依托，專注食品安全，打造健康生活”的理念，北京良潤(rùn)生物科技有限公司（以下簡(jiǎn)稱“良潤(rùn)生物”）一直致力于提升微生物快速檢測(cè)技術(shù)，研發(fā)多種優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。近日，良潤(rùn)生物推出了檢測(cè)金黃色葡萄球菌腸毒素（簡(jiǎn)稱“金葡腸毒素”）的新品——MicroFast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡，—款能夠檢測(cè)出5種腸毒素SEA/SEB/SEC/SED/SEE的國(guó)際領(lǐng)先產(chǎn)品，新產(chǎn)品的檢測(cè)原理是怎樣的？與傳統(tǒng)方法相比有哪些優(yōu)勢(shì)？帶著眾多疑問，本刊記者采訪了北京良潤(rùn)生物科技有限公司總經(jīng)理劉磊先生。

記者：金葡腸毒素引起的食物中毒是一個(gè)世界性難題，能否介紹下該毒素的危害有哪些？主要存在于哪些食品中？

劉磊：金葡腸毒素是金黃色葡萄球菌分泌的一種具有超抗原活性的細(xì)菌毒素，易溶于水和鹽溶液，對(duì)熱很穩(wěn)定，在100℃條件下煮沸30min仍具有致病性，而且能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用。依據(jù)腸毒素抗原性和等電點(diǎn)的不同，至今為止已發(fā)現(xiàn)金葡菌可產(chǎn)生A、B、C、D、E、F等多種腸毒素，其中以A型毒力最強(qiáng)，也最為常見約占75%，攝入1μg即能引起中毒。食物在受到金黃色葡萄球菌污染，并且菌落總數(shù)在達(dá)到一定數(shù)量之后，在20～30℃條件下經(jīng)2～4小時(shí)的繁殖就有可能產(chǎn)生金葡腸毒素，進(jìn)食帶有此毒素的食物1～5小時(shí)后，會(huì)出現(xiàn)急性胃腸炎的癥狀，其表現(xiàn)為惡心、嘔吐和腹瀉等，對(duì)于小孩、孕婦等體質(zhì)相對(duì)比較弱的人群癥狀比較明顯。雖然金黃色葡萄球菌在100℃下加熱30min會(huì)被殺死，但金葡腸毒素卻不會(huì)，它非常穩(wěn)定，有時(shí)可能金黃色葡萄球菌沒有了但其腸毒素依然存在。金黃色葡萄球菌腸毒素的產(chǎn)生需要滿足兩個(gè)條件，首先只有高蛋白食物才會(huì)容易產(chǎn)生；其次，金黃色葡萄球菌達(dá)到一定的數(shù)量一般為103以上才可能產(chǎn)生毒素。所以像奶及奶制品、肉及肉制品中都容易產(chǎn)生金黃色葡萄球菌腸毒素。

記者：傳統(tǒng)檢測(cè)金葡腸毒素的方法有哪些？

劉磊：在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)工作中，有多種檢測(cè)金葡腸毒素的方法，最經(jīng)典是動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)，一般是對(duì)幼貓或幼猴腹腔注射或喂食肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物，然后觀察其可能出現(xiàn)的異常生理和形態(tài)變化，一般在4h內(nèi)發(fā)生嘔吐、腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象，就表示有金葡腸毒素存在。該方法使用較早但容易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，因此受到極大限制。免疫法也是較為常見的手段，如國(guó)外的酶聯(lián)免疫試劑盒、96孔板等，但是這些方法的樣品前處理過程比較繁瑣，消耗時(shí)間長(zhǎng)，整個(gè)檢測(cè)過程就需要1.5小時(shí)以上的時(shí)間才能完成，極大地影響了時(shí)效性。

記者：據(jù)了解，貴公司最近針對(duì)金葡萄腸毒素的檢測(cè)研發(fā)出了一種快檢產(chǎn)品——Microfast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡，該檢測(cè)卡的原理是什么？與傳統(tǒng)方法相比有哪些優(yōu)勢(shì)？

劉磊：Microfast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡應(yīng)用“雙抗體夾心法”的原理，納米金顆粒作為標(biāo)記指示物，將一種抗體固定到NC膜上T線處，另外一種抗體標(biāo)記了納米金顆粒。樣品中若有金葡腸毒素，就會(huì)與納米金顆粒標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，并且同預(yù)包被于NC膜T線上的抗體結(jié)合，如此一來，就會(huì)形成一個(gè)“三明治”結(jié)構(gòu)的結(jié)合，檢測(cè)卡顯示明顯的紅線，證明其結(jié)果為陽性；樣品中若沒有金葡腸毒素，金顆粒則不會(huì)聚集，檢測(cè)卡也不會(huì)出現(xiàn)紅線。通過肉眼直接觀察T線處是否變紅，便可判斷樣品中是否含有金黃色葡萄球菌，其檢測(cè)靈敏度低至1ppb。

酶聯(lián)免疫試劑盒與此原理相同，只是將膠體金換成酶，酶可以催化“三明治”結(jié)構(gòu)的底物顯色。而酶聯(lián)免疫法要經(jīng)過加樣品、洗脫、加酶、再次洗脫、顯色等程序，因此操作步驟更多。相比而言，快速檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，基本上是一步操作即可，所有的實(shí)驗(yàn)在保證結(jié)果的情況下，步驟越少，效率越高。

國(guó)標(biāo)規(guī)定某些食品中的致病菌不得檢出或限量檢出，但此限量值非常低。以沙門氏菌為例，假設(shè)其在某類食品中限量值為0.04cfu/g，但檢測(cè)方法靈敏度一般是103～104cfu/g，也就是說，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到103～104cfu/g該檢測(cè)方法才能夠檢出，并得到比較穩(wěn)定的結(jié)果。限量值與檢測(cè)方法產(chǎn)生了矛盾，二者有100萬的差距，此時(shí)就要對(duì)目標(biāo)菌通過增菌的方法來彌補(bǔ)靈敏度的不足，讓如此少的菌數(shù)擴(kuò)增變多之后，再進(jìn)行檢測(cè)，這種方法可以間接地判斷細(xì)菌危害。相較細(xì)菌檢測(cè)而言，檢測(cè)細(xì)菌毒素則更為快速直接，毒素是細(xì)菌危害中較為嚴(yán)重的一種，很多群體性的食品安全事件都由細(xì)菌毒素所引起。如某地方發(fā)生食物中毒，檢測(cè)部門可以帶著某毒素快速檢測(cè)卡到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)，通過采集嘔吐物后使用檢測(cè)卡檢測(cè)的方式來判斷中毒事件是否由這類細(xì)菌所引起。而Microfast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡適用于產(chǎn)品原材料部門、產(chǎn)品監(jiān)控部門、疾控部門等。

總體而言，Microfast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡的優(yōu)勢(shì)有6點(diǎn)，一是時(shí)間短，使用方便快速，便于基層使用和現(xiàn)場(chǎng)使用，所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成；二是成本相對(duì)比較低，不需要特殊的儀器設(shè)備；三是該方法應(yīng)用范圍廣，可適應(yīng)多種檢測(cè)條件；四是該方法準(zhǔn)確，假陽性率低；五是該方法標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記樣品在4℃貯存1年以上，無信號(hào)衰減現(xiàn)象；六是該方法膠體金本身為紅色，不需要加入發(fā)色試劑，省卻了酶標(biāo)的致癌性底物及終止液的步驟，對(duì)人體無毒害。

記者：MicroFast?金葡腸毒素快速檢測(cè)卡的準(zhǔn)確性是如何保證的？

劉磊：首先，是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，我們有非常多的金黃色葡萄球菌菌珠，并對(duì)它們進(jìn)行產(chǎn)毒培養(yǎng)，然后進(jìn)行相應(yīng)的鑒定，從菌種里篩選出可以產(chǎn)生腸毒素的菌株，再通過我們的檢測(cè)卡測(cè)試，也檢測(cè)出了產(chǎn)生腸毒素的菌株，與鑒定結(jié)果是一致的。其次，我們跟國(guó)外同類作用的檢測(cè)盒進(jìn)行了對(duì)比，以保證準(zhǔn)確性。另外，我們也和國(guó)乳中心進(jìn)行積極的溝通，讓他們對(duì)我們的產(chǎn)品進(jìn)行更系統(tǒng)詳細(xì)地評(píng)定。

記者：近期成立的中國(guó)食源性微生物檢測(cè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟中，貴公司成為第一屆理事會(huì)成員單位，您能否介紹下該聯(lián)盟成立的目的是什么嗎？

劉磊：該戰(zhàn)略聯(lián)盟由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所研究員楊瑞馥教授擔(dān)任理事長(zhǎng)，國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心研究員劉秀梅教授擔(dān)任名譽(yù)理事長(zhǎng)，連同檢測(cè)行業(yè)資深專家創(chuàng)辦的一個(gè)相對(duì)松散的學(xué)術(shù)性質(zhì)組織，其宗旨是推動(dòng)國(guó)內(nèi)對(duì)微生物和檢測(cè)的重視。聯(lián)盟會(huì)對(duì)相關(guān)企業(yè)或用戶做一些微生物檢測(cè)方面的培訓(xùn)，給他們解釋一些在微生物檢測(cè)中較常見的關(guān)鍵問題。另外，國(guó)內(nèi)微生物檢測(cè)尤其是快檢領(lǐng)域目前實(shí)力依然較為薄弱，該組織定期有成員之間的交流活動(dòng)，并且很多資深專家也會(huì)對(duì)聯(lián)盟之內(nèi)的企業(yè)進(jìn)行技術(shù)性的指導(dǎo)，促進(jìn)國(guó)內(nèi)企業(yè)快檢領(lǐng)域的發(fā)展。

記者：目前貴公司有哪些用于微生物檢測(cè)的產(chǎn)品？可以檢測(cè)哪些項(xiàng)目？

劉磊：良潤(rùn)生物專注于食品中微生物快速檢測(cè)的研究，目前有4個(gè)產(chǎn)品系列，第一個(gè)是致病菌快速增菌培養(yǎng)基，目的是讓致病菌快速生長(zhǎng)，縮短增菌時(shí)間，可大大縮短整個(gè)檢測(cè)過程的時(shí)間。以沙門氏菌為例，目前我們?cè)?4小時(shí)內(nèi)就可以得到陰性/陽性結(jié)果，比其他方法至少要縮短一天。第二是致病菌快速檢測(cè)卡，就是用免疫的方法來檢測(cè)致病菌。第三是微生物測(cè)試片，細(xì)菌在生長(zhǎng)代謝的過程中，有一些酶參與，這些酶有可能是共性的也有可能是特異性的，對(duì)于共性酶，則檢測(cè)含有這些酶的菌落總數(shù)，對(duì)于特異性酶，只有一類細(xì)菌含有此酶，通過檢測(cè)該酶的存在即可判斷是否有該類細(xì)菌。第四個(gè)產(chǎn)品系列是細(xì)菌毒素系列，金葡腸毒素產(chǎn)品是該系列的第一個(gè)產(chǎn)品。良潤(rùn)生物產(chǎn)品系列為數(shù)不多，但我們專注于把每個(gè)產(chǎn)品做精做細(xì)，并通過持續(xù)地不斷地改進(jìn)，使每一個(gè)產(chǎn)品都有其獨(dú)特的價(jià)值。