楊 林，胡 秀，宮 麗，龍 坤，蘭 艷，王雨來

（1. 黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院）藥學(xué)部，湖北 黃石 435000；2. 腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 435000）

清營湯對(duì)大鼠體內(nèi)非那西汀與咪達(dá)唑侖藥動(dòng)學(xué)的影響

楊 林1，2，胡 秀1，2，宮 麗1，2，龍 坤1，2，蘭 艷1，2，王雨來1，2

（1. 黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院）藥學(xué)部，湖北 黃石 435000；2. 腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 435000）

考察清營湯對(duì)非那西丁和咪達(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響，進(jìn)而探討清營湯對(duì)CYP1A2和CYP3A1酶活性的影響。將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組和清營湯組，清營湯組大鼠連續(xù)給藥10 d，空白對(duì)照組大鼠給予相同體積生理鹽水。第11 d，大鼠分別靜脈注射非那西丁和咪達(dá)唑侖，高效液相色譜法分別測(cè)定非那西丁和咪達(dá)唑侖的血藥濃度，DAS2.0軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果清營湯組大鼠體內(nèi)的非那西丁藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)較正常對(duì)照組出現(xiàn)顯著差異，代謝速率加快；但是清營湯對(duì)咪達(dá)唑侖在大鼠的藥代動(dòng)力學(xué)特征沒有顯著影響。實(shí)驗(yàn)清營湯可能誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)的CYP1A2活性，但是對(duì)CYP3A1沒有顯著影響。

清營湯；CYP1A2；CYP3A1；非那西?。贿溥_(dá)唑侖

清營湯是治療溫病熱邪入營分的經(jīng)典方。最早在《臨證指南醫(yī)案》中，葉天士選用玄參、丹參、竹葉心、犀角、生地、連翹等藥治療溫病熱入營分，效果較為顯著。在清代著名溫病學(xué)家吳鞠通的《溫病條辨》中，其根據(jù)葉氏的方藥組方總結(jié)歸納，整理命名為清營湯。該方由生地、連翹、玄參、竹葉、麥冬、黃連、丹參、犀角、銀花組成，具有清營養(yǎng)陰、透熱轉(zhuǎn)氣、清心安神和活血化疲等多種功能［1，2］。

清營湯證之病機(jī)為熱邪入營，營分證的基本病機(jī)是溫邪入營，灼傷營陰，心神被擾。該經(jīng)典方養(yǎng)陰不留邪，祛邪不傷正，視為治熱傷營陰證候的代表方［3，4］。我院多采用其輔助治療各類病癥的發(fā)熱。隨著清營湯臨床應(yīng)用的增加，了解其安全性特別是與其它藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的安全性，即藥物之間的相互作用的要求也越來越迫切。

本研究采用大鼠細(xì)胞色素 P450 CYP1A2和CYP3A1的特異性探針底物非那西丁（CYP1A2）和咪達(dá)唑侖（CYP3A1）對(duì)大鼠體內(nèi)的 CYP1A2和CYP3A1活性改變進(jìn)行研究［5］。大鼠預(yù)先連續(xù)灌胃清營湯進(jìn)行預(yù)處理，然后分別考察非那西丁和咪達(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征的改變，來判斷CYP1A2和CYP3A1活性的變化。本研究結(jié)果對(duì)清營湯的臨床應(yīng)用具有參考價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 動(dòng)物

普通級(jí)雄性SD大鼠，體重180～220 g，由北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（京）2010-0016。

1.2 藥品與試劑

清營湯由本院藥學(xué)部自制，經(jīng)濃縮成1 g生藥/1 mL水煎劑的濃度。非那西丁、咪達(dá)唑侖（美國Sigma公司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國Fisher Scientific公司）；磷酸二氫鉀（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為純凈水。

1.3 儀器

日立 L-7000型高效液相色譜系統(tǒng)，配有L-7110 型泵，L-7200 型自動(dòng)進(jìn)樣器，L-7420 型UV檢測(cè)器；DCY-24S水浴式氮吹儀（青島?？苾x器有限公司）；Sigma 3K15 高速低溫離心機(jī)（Sigma公司）；XW-80A 旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；BS110S型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；KQ 500DE型數(shù)控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

采用前期已經(jīng)驗(yàn)證的色譜方法，具體條件如下：

非那西?。荷V柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：10 mm 磷酸氫二鉀溶液—甲醇（體積比55∶45）；檢測(cè)波長為254 nm；柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min。

咪達(dá)唑侖：色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：水—乙腈（體積比50∶50）；檢測(cè)波長為225 nm；柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min。

1.4.2 血漿樣品處理

取血漿樣品200 μL，加入沉淀劑（乙腈：甲醇1∶1，含內(nèi)標(biāo)）600 μL，充分渦旋振蕩1 min，14 000 r/min離心5 min，取上清500 μL置1.5 mL離心管中，氮?dú)獯蹈?，?00 μL甲醇復(fù)溶，進(jìn)樣40 μL進(jìn)行分析。

1.4.3 大鼠分組及預(yù)處理

20只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組和清營湯組，每組 10只。清營湯組的大鼠每只每次灌胃清營湯 2 mL，每天早晚各一次，連續(xù)給藥10 d?？瞻讓?duì)照組大鼠給予同體積生理鹽水。在第11 d進(jìn)行非那西丁和咪達(dá)唑侖的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，空白對(duì)照組和清營湯組大鼠再分別隨機(jī)分為兩組，每組5只，分別給予非那西丁和咪達(dá)唑侖。

1.4.4 非那西丁大鼠藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法［6，7］

將5只空白對(duì)照組大鼠和5只清營湯組大鼠按照5 mg/kg劑量靜脈注射非那西丁。分別于0、0.033、0.083、0.167、0.333、0.5、1、1.5和2 h眼球靜脈叢取血0.3 mL。3 000 r/min離心15 min，取血漿-30℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.5 咪達(dá)唑侖大鼠藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法［8-11］

將另外5只空白對(duì)照組大鼠和5只清營湯組大鼠按照5 mg/kg劑量靜脈注射咪達(dá)唑侖。分別于0、0.033、0.083、0.167、0.333、0.5、1、1.5和2 h眼球靜脈叢取血0.3 mL。3 000 r/min離心15 min，取血漿-30 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 18.0軟件，計(jì)數(shù)資料以mean ± SD表示，采用t 檢驗(yàn)方法，數(shù)據(jù)組間比較P＜ 0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用DAS 2.0軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，Origin 8.0繪制藥物血漿濃度-時(shí)間曲線。

2 結(jié) 果

2.1 非那西丁大鼠藥動(dòng)學(xué)

空白對(duì)照組和清營湯組大鼠靜脈注射非那西丁（5 mg/kg）后的藥物血漿濃度-時(shí)間曲線和主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別見圖1和表1。

圖1 非那西丁在大鼠體內(nèi)的藥時(shí)曲線Fig.1 The mean concentration-time curves of phenacetin inrats （mean ± SD， n=5）

表1 大鼠靜注非那西丁后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 1 Pharmacokinetic parameters of phenacetin after iv administration in rats （mean ± SD， n=5）

由主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)觀察到，清營湯組大鼠與空白對(duì)照組比較，非那西丁的AUC、CLz、Vz和Cmax具有顯著性差異（P＜0.05），t1/2z的差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明，清營湯的干預(yù)作用，使非那西丁在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征出現(xiàn)顯著改變，其代謝速率明顯提高，推斷清營湯可以誘導(dǎo)大鼠內(nèi)體CYP1A2酶的活性。

2.2 咪達(dá)唑侖大鼠藥動(dòng)學(xué)

空白對(duì)照組和清營湯組大鼠靜脈注射咪達(dá)唑侖（5 mg/kg）后的藥物血漿濃度-時(shí)間曲線和主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別見圖2和表2。

由藥時(shí)曲線和藥動(dòng)參數(shù)可以看出，清營湯對(duì)咪達(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征沒有顯著影響，推斷清營湯對(duì)大鼠CYP3A1酶的活性可能沒有顯著影響。

圖2 咪達(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)的藥時(shí)曲線Fig.2 The mean concentration-time curves of midazolam in rats （mean ± SD， n=5）

表2 大鼠靜注咪達(dá)唑侖后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 2 Pharmacokinetic parameters of midazolam after iv administration in rats （mean ± SD， n=5）

3 討 論

隨著近年來對(duì)營分證實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究的逐步深入，清營湯的藥效研究以及臨床應(yīng)用取得了長足的進(jìn)步?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，清營湯具有抗炎、退熱、抗氧化、改善血液流變學(xué)、調(diào)節(jié)免疫、保護(hù)內(nèi)皮損傷和心肌細(xì)胞因子的作用。并且在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，主要應(yīng)用在眼科疾病、皮膚科疾病、感染性疾病以及某些外科疾病的治療［12］。

藥物的相互作用研究對(duì)于闡明中藥的配伍機(jī)理和臨床的用藥安全具有重要意義，而CYP450酶和P-糖蛋白在藥物的相互作用起主要作用，其中以基于肝微粒體CYP450酶的藥物相互作用研究更為廣泛［13］。CYP450酶為一類亞鐵血紅素—硫醇鹽蛋白的超家族，它參與內(nèi)源性物質(zhì)和包括藥物、環(huán)境化合物在內(nèi)的外源性物質(zhì)的代謝，是參與藥物I相代謝反應(yīng)的主要超家族酶系，介導(dǎo)藥物的氧化、還原或水解反應(yīng)［14］。CYP450酶是與藥物相互作用關(guān)系最為密切的是酶系，凡參與代謝的酶亞型都與藥物相互作用有關(guān)［15］。而CYP 1A2和CYP3A1是肝臟中比較重要的兩種CYP450酶亞型，在藥物代謝中具有重要作用［16］。

4 結(jié) 論

為了探討基于細(xì)胞色素 P450酶的清營湯藥物相互作用，本文采用CYP1A2和CYP3A1特異性探針底物非那西丁和咪達(dá)唑侖來研究清營湯對(duì)CYP1A2和CYP3A1活性的影響。本研究結(jié)果顯示，大鼠連續(xù)灌胃清營湯后，咪達(dá)唑侖的藥動(dòng)學(xué)特征無明顯變化，推斷清營湯對(duì)大鼠CYP3A1的酶活性無明顯誘導(dǎo)或抑制作用，提示清營湯可能不會(huì)影響與其合用的CYP3A1酶底物藥物的安全性。但是清營湯組的非那西丁藥物代謝速率加快，血漿暴露量減少，據(jù)此判斷，清營湯可能對(duì)CYP1A2的活性具有誘導(dǎo)作用，臨床上合用CYP1A2酶的底物藥物應(yīng)該調(diào)整給藥劑量。盡管存在種屬差異，該研究結(jié)果對(duì)于闡明清營湯的藥物相互作用機(jī)理以及臨床應(yīng)用的安全性仍具有重要意義。

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Effect of Qingying Decoction on the Pharmacokinetics of Phenacetin and Midazolam in Rats

YANG Lin1，2， HU Xiu1，2， GONG Li1，2， LONG Kun1，2， LAN Yan1，2， WANG Yu-lai1，2
（1. Department of Pharmacy， Huangshi Central Hospital， Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University， Hubei Huangshi 435000， China； 2. Hubei Key Laboratory of Kidney Disease Pathogenesis and Intervention， Hubei Huangshi 435000， China）

The influence of Qingying Decoction on the pharmacokinetics of phenacetin and midazolam in rats was studied， and the effect of Qingying Decoction on the activity of CYP1A2 and CYP3A1 enzymes was discussed. Rats were randomly divided into control group and Qingying decoction group. Each rat in Qingying decoction group was given Qingying decoction for 10 consecutive days and each rat in control group was given equal volume of saline. On day 11， rats were received a single dose of phenacetin and midazolam by intravenous injection， respectively. The concentrations of phenacetin and midazolam were determined by HPLC method. The pharmacokinetic parameters of the two chemicals were calculated with DAS2.0 software. Comparing with the control group， the pharmacokinetic parameters of phenacetin were significant changed in Qingying Decoction group. And the metabolic rate of phenacetin was speed up. But there was no significant difference in the pharmacokinetic parameters of midazolam. The results indicate that Qingying decoction can induce the activity of CYP1A2， but it has no effect on CYP3A1.

Qingying decoction； CYP1A2； CYP3A1； Phenacetin； Midazolam

TQ 460

A

1671-0460（2015）12-2752-03

2015-07-29

楊林（1971-），男，湖北省黃石市人，主管藥師，1990年畢業(yè)于黃石衛(wèi)校藥劑專業(yè)，研究方向：從事臨床藥學(xué)工作。E-mail：yanglinhs@hotmail.com。

王雨來（1972-），男，副主任藥師，研究方向：心血管臨床藥師。E-mail：wangyulaihs@hotmail.com。