雍蘇南王順民張穩(wěn)譚元生

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

·研究報告·

養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法對自發(fā)性高血壓大鼠血管重塑的影響*

雍蘇南王順民張穩(wěn)譚元生△

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

目的觀察養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）的降壓作用及其對血清一氧化氮（NO）、胸主動脈中膜厚度（MT）、管腔直徑（LD）及MT/LD的影響。方法以12只8周齡Wistar-kyoto（WKY）大鼠為正常組，48只8周齡SHR隨機(jī)分為4組：模型組（SHR-M）、卡托普利組（SHR-K）、復(fù)方七芍降壓片低劑量治療組（SHR-D）、復(fù)方七芍降壓片高劑量治療組（SHR-G）。連續(xù)灌胃8周，觀察血壓、血清NO和胸主動脈中膜形態(tài)學(xué)變化，測定MT、LD，并計算MT/LD。結(jié)果與正常組比較，SHR各組血清NO顯著降低（P＜0.01），MT明顯增厚，LD縮小，MT/LD升高（P＜0.01）；養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法治療后，SHR各組血壓明顯下降（P＜0.01），血清NO升高（P＜0.01），胸主動脈中膜增厚減輕，管腔直徑變大（P＜0.01），MT/LD降低（P＜0.01）。結(jié)論養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法能有效降低SHR血壓，升高血清NO水平，有效逆轉(zhuǎn)SHR血管重塑。

養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法復(fù)方七芍降壓片自發(fā)性高血壓大鼠血管重塑NO

高血壓病是全球面臨的重大心腦血管疾病之一，為全球范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問題。本病易引發(fā)中風(fēng)、心肌梗死、心衰及腎功能衰竭等并發(fā)癥［1］，嚴(yán)重危害人類身體健康。血管重塑既是高血壓所致的病理變化，又是高血壓維持和加劇的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，也是導(dǎo)致心血管事件死亡率和發(fā)生率增高的主要原因［2］。本研究觀察以“養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)”立法的復(fù)方七芍降壓片對自發(fā)性高血壓大鼠血清一氧化氮（NO）、胸主動脈中膜厚度（MT）、管腔直徑（LD）和MT/LD的影響，旨在分析養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血管重塑的影響及可能機(jī)制，進(jìn)一步揭示復(fù)方七芍降壓片的降壓機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1動物8周齡SHR 48只，體質(zhì)量230～270 g，雄性，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬2007-0005）。8周齡Wistar-kyoto（WKY）大鼠12只，體質(zhì)量225～280 g，雄性，清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬2007-0005）。實驗動物環(huán)境設(shè)施合格證號：SYXK（湘）2009-0001。

1.2藥物與試劑復(fù)方七芍降壓片，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科制備，批號20141116?？ㄍ衅绽?5 mg/片），中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，批號20140914。大鼠用血清一氧化氮測定試劑盒，湖北武漢博士德試劑有限公司提供；10%水合氯醛，青島海慈醫(yī)療集團(tuán)藥劑科提供。

1.3儀器DT1000A型電子天平（江蘇省常熟市長春儀器廠制造），BP-2006A型智能無創(chuàng)血壓計（北京軟隆科技有限責(zé)任公司），F(xiàn)reezer超低溫冰箱（Forma Scientific生產(chǎn)，美國），LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī)（廣州市華俊醫(yī)療器械有限公司），BMJ-1n型病理組織包埋機(jī)和包埋冷凍臺（常州），TS-12F型生物組織自動脫水機(jī)（湖北），OLYMPU倒置顯微鏡和照相裝置（日本OLYMPUS公司），KS400型圖像分析儀（德國ZISSE公司）。

1.4分組及給藥將48只SHR隨機(jī)分為模型組（SHR-M）、卡托普利組（SHR-K）、復(fù)方七芍降壓片低劑量治療組（SHR-D）、復(fù)方七芍降壓片高劑量治療組（SHR-G）4組，每組12只，12只WKY大鼠為正常組。復(fù)方七芍降壓片（壓片前）成人每日用量為49 g，SHRD組以成人等效量［大鼠體表面積/成人平均體表面積×成人每日用量］灌胃，SHR-G組以成人等效量4倍灌胃，SHR-K組以成人等效量灌胃。同時，SHR-M組及正常組以等量蒸餾水開始灌胃，給藥體積為10 mL/kg。各組每日灌胃1次，連續(xù)8周，灌胃期間每周測量1次血壓和體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量隨時調(diào)整給藥量。

1.5SHR尾動脈壓的測定分別在實驗開始前、1周、2周、3周、4周、6周、8周后，采用尾動脈測壓法應(yīng)用智能無創(chuàng)血壓計測量給藥前后大鼠血壓。在每周第7日14∶00～17∶00測各組大鼠的血壓平均值，為該鼠所在周的血壓值。

1.6血清NO含量的測定最后1次給藥后，實驗動物予以禁食12 h，用10%水合氯醛（0.2 mL/kg）腹腔注射麻醉，做腹部正中切口，腹主動脈取血5 mL，3500 r/min離心10 min，于-70℃低溫下冷凍大鼠血清備用，嚴(yán)格按照試劑盒說明書的步驟，測定血清NO含量。

1.7主動脈血管HE染色摘取胸主動脈，置于10%甲醛溶液固定，酒精梯度脫水，浸蠟包埋，二甲苯透明，常規(guī)切片，將血管橫切，切成厚度約7 μm的薄片，HE染色。于×400高倍鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)變化，并射片、采圖，并對HE染色圖片進(jìn)行圖像分析，依次測定MT、LD，并計算MT/LD。

1.8統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料以（±s）表示，數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用最小顯著差值法（LSD），同一組治療前后比較采用配對t檢驗。P＜0.05為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組SHR尾動脈壓比較見表1。SHR-M組的血壓隨用藥時間的推移逐漸增高，兩治療組及SHR-K組則均有下降；與SHR-M組比較，1周后SHR-K組血壓顯著降低（P＜0.01），2周后SHR-G組血壓開始明顯降低（P＜0.01）；整個療程中，兩治療組血壓均高于SHR-K組（P＜0.01），第3周后，SHR-G組血壓水平開始低于SHR-D組（P＜0.05）。說明復(fù)方七芍降壓片確有降壓效果，且SHR-G組降壓效果優(yōu)于低劑量組。

表1　各組大鼠治療前后血壓變化比較（mmHg，±s）

表1　各組大鼠治療前后血壓變化比較（mmHg，±s）

與WKY組比較，#P＜0.01；與SHR-M組比較，△P＜0.01；與SHR-K組比較，▲P＜0.01；與SHR-D組比較，*P＜0.05；與治療前比較，●P＜0.01。

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2.2大鼠血清NO水平比較治療4周后，與正常組［NO濃度（94.68±26.88）mol/L］比較，SHR-M組血清N0濃度［（52.26±9.65）mol/L］明顯降低（P＜0.01）；與SHR-M組比較，各治療組NO濃度［SHR-D組（168.04±27.4）mol/L，SHR-G組（174.84±34.95）mol/L］均升高（P＜0.01）；兩治療組均較SHR-K組［（98.54± 6.23）mol/L）］明顯升高（P＜0.01），兩治療組間血清NO水平無明顯差異（P＞0.05）。

2.3各組大鼠胸主動脈形態(tài)學(xué)比較正常組胸主動脈壁內(nèi)皮完整、厚薄均勻，中膜平滑肌細(xì)胞排列有序，中間彈力纖維清晰；SHR-M組胸主動脈管壁明顯增厚，內(nèi)皮連續(xù)性差，中膜平滑肌細(xì)胞肥大、排列紊亂，彈力纖維略有增多，紋路欠清。與SHR-M組比較，SHRK組管壁可見輕度增生，內(nèi)皮連續(xù)性尚可，中膜平滑肌層及彈力纖維病理改變不典型；兩治療組鏡下圖像與SHR-K組大致相似，僅見少許內(nèi)膜增生，而高劑量較低劑量增生輕。見圖1。

圖1　各組大鼠胸主動脈形態(tài)學(xué)比較（HE×400）

2.4各組大鼠MT、LD及MT/LD比較見表2。與正常組比較，SHR-M組胸主動脈中膜明顯增厚、管腔直徑縮小，MT/LD升高，與SHR-M組比較，SHR-K組MT明顯變?。≒＜0.01），LD明顯變大（P＜0.01），MT/ LD值明顯降低（P＜0.01）。兩治療組與SHR-K組對中膜厚度、管腔直徑及MT/LD的作用效果相當(dāng)，均有降低MT/LD的趨勢，其中SHR-G組較SHR-D組效果更明顯（P＜0.05）。

3　討論

高血壓病血管重塑是指由血壓升高所導(dǎo)致的機(jī)體血管結(jié)構(gòu)的改變，即在高血壓病發(fā)病過程中，大中血管出現(xiàn)血管壁中膜增厚、管腔變小，血管壁層厚度和腔徑大小的比值增加等慢性重塑性改變，血管重塑還可稀疏微小動脈的血管結(jié)構(gòu)，改變側(cè)枝循環(huán)，從而導(dǎo)致機(jī)體血管功能異常［3］。NO是由NOS以L-精氨酸為底物合成，NOS/NO系統(tǒng)能保護(hù)內(nèi)皮功能，使得內(nèi)膜厚度和狹窄率顯著減低，血管重塑減輕，同時HO-1/CO與NOS/ CO系統(tǒng)可能通過減弱NF-κB活性及降低TNF-α、內(nèi)皮素-1水平而抑制再狹窄進(jìn)展［4］。NO作為最重要的內(nèi)皮舒血管因子，可調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞從而調(diào)節(jié)機(jī)體器官的血流量，使其保持相對穩(wěn)定，發(fā)揮血管自身調(diào)節(jié)作用，最終調(diào)節(jié)機(jī)體血壓水平［5-6］。NO缺乏時，這種調(diào)節(jié)功能受損甚至缺失，可能導(dǎo)致高血壓病的發(fā)?。?］。血管重塑使得血管阻力增加，導(dǎo)致或加重靶器官的損害。目前研究認(rèn)為高血壓病的治療在降低血壓的基礎(chǔ)上，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)保護(hù)靶器官，阻止或逆轉(zhuǎn)高血壓病并發(fā)癥。其中，靶器官損害的共同病理學(xué)基礎(chǔ)——血管重塑現(xiàn)象起著關(guān)鍵性的作用［8］。

表2　各組大鼠MT、LD及MT/LD比較（s，±s）

表2　各組大鼠MT、LD及MT/LD比較（s，±s）

與WKY組比較，#P＜0.05；與SHR-M組比較，△P＜0.01；與SHR-K組比較，*P＞0.05；與SHR-D組比較，●P＞0.05。

組別nMT/LD WKY組120.078±0.009 SHR-M組120.118±0.007#SHR-K組120.091±0.006#△MT（μm）LD（mm）87.01±7.211.115±0.005 109.55±8.52#0.928±0.006#92.38±6.31#△1.014±0.007#△SHR-D組120.096±0.008#△*96.33±5.89#△*1.005±0.008#△*SHR-G組1294.36±5.95#△*●1.011±0.006#△*●0.093±0.007#△*●

高血壓病屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”“頭痛”范疇。眩暈可定位于肝腎，肝腎陰虛，水不涵木，陰不維陽，肝陽上亢，肝風(fēng)內(nèi)動，發(fā)為眩暈，即肝陽化風(fēng)。肝腎陰虛，一方面陰虛可致血枯脈澀，日久成瘀，瘀血阻絡(luò)，髓海失濡；另一方面，陰虛陽亢，肝失疏泄，氣血運(yùn)行不暢，日久亦可致瘀血阻絡(luò)，氣血不能上達(dá)，清竅失養(yǎng)，眩暈發(fā)作，即瘀血化風(fēng)。故高血壓患者中醫(yī)病機(jī)可用“虛、瘀、風(fēng)”來概括，并且中醫(yī)理論認(rèn)為瘀血停滯導(dǎo)致脈絡(luò)損傷，脈絡(luò)損傷反過來又能加重瘀血停滯，這與高血壓病與血管重塑的關(guān)系有類似性，現(xiàn)代一些研究證實高血壓病血管重塑與血瘀證型有密切關(guān)系［9］?；诟哐獕翰　疤摗薄梆觥薄帮L(fēng)”病機(jī)特點而創(chuàng)制的復(fù)方七芍降壓片主要由鉤藤、川芎等組成，具有養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)之效。前期臨床及動物實驗研究［10-12］表明該方降壓療效明確，兼改善血管內(nèi)皮功能，亦可上調(diào)心肌組織IL-10的表達(dá)而逆轉(zhuǎn)SHR左室肥厚。本實驗通過檢測SHR大鼠主動脈中層厚度和腔徑大小的比值說明血管重塑的程度，結(jié)果顯示采用養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)立法的復(fù)方七芍降壓片能有效升高SHR血清NO水平，調(diào)節(jié)SHR血管重塑效果明顯，說明養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)法可抑制SHR的血管重塑，這種影響對于降低血壓、延緩高血壓病病程進(jìn)展、保護(hù)患者靶器官、改善預(yù)后可能有極為重要的意義。

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Effects of the Treatment of Enriching Yin to Emolliate Liver and Resolving Stasis to Extinguish Wind on Vascular Remodeling in Rats with Spontaneously Hypertension

YONG Sunan，WANG Shunmin，ZHANG Wen，et al.
The First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Hunan，Changsha 410007，China

Objective：To explore the effects of the treatment of enriching yin to emolliate liver and resolving stasis to extinguish wind on blood pressure，serum nitric oxide（NO）and thoracic aortic tissue samples in rats with spontaneously hypertension.Methods：Twelve 8-week-old Wistar-kyoto（WKY）rats were used as the normal group（n=12）.Forty-eight 8-week-old spontaneous hypertension rats（SHR）were divided into 4 groups at random：the model group（n=12），the captopril group，the Chinese medicine group of low and high dose.In the following treatment of 8 weeks，blood pressure was measured from tail artery，and the 1evels of serum NO were measured and thoracic aortic tissue samples were clipped to observe the morphology under HE staining，measuring MT，LD and MT/LD of thoracic aortas by using computer aided imaging measurement system.Results：Compared with the normal group，in the model group，the level of serum NO decreased significantly（P＜0.01）and thoracic aortic wall was thickened.MT/LD of thoracic aorta had a significant increase（P＜0.01）.In the following treatment of traditional Chinese medicine，blood pressure dropped sharply（P＜0.01）and serum NO had a significant increase（P＜0.01）；thoracic aortic wall became thinner and MT/LD of thoracic aorta had a significant decrease（P＜0.01）.Conclusion：The treatment of enriching yin to emolliate liver and resolving stasis to extinguish wind can lower blood pressure，and increase the level of serum NO，with a protective effect on vascular remodeling in the SHR.

Enrich yin to emolliate liver and resolve stasis to extinguish wind treatment；Compound Qishaojiangya tablets；Spontaneously hypertensive rats；Vascular remodeling；NO

R285.5

A

1004-745X（2015）10-1696-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.002

2015-07-03）

國家自然科學(xué)基金面上項目（81473616）；湖南省科技計劃項目（2013SK2025）；湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目（201403）；湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物研究省部共建國家重點實驗室培育基地開放基金項目（ZYFT201407）

（電子郵箱：sunan0526@163.com）