張高林龐大勇程衛(wèi)東張文君邢文婷

（1.蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅蘭州730050；3.甘肅省武威職業(yè)學(xué)院，甘肅武威733000；4.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515；5.蘭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000）

·研究報告·

玫參顆粒對去卵巢大鼠血脂代謝的影響*

張高林1，2龐大勇1，3程衛(wèi)東1，4△張文君1邢文婷5

（1.蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅蘭州730050；3.甘肅省武威職業(yè)學(xué)院，甘肅武威733000；4.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515；5.蘭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000）

目的觀察玫參顆粒對去卵巢大鼠血脂代謝的影響。方法將70只Wistar大鼠中60只行切除雙側(cè)卵巢手術(shù)后隨機分為假手術(shù)組、模型組、戊酸雌二醇片組（雌激素組）、坤寶丸陽性對照組，玫參顆粒高、中、低劑量組。除了假手術(shù)組外，其他各組手術(shù)后5 d進行陰道涂片，連續(xù)5 d，觀察到無規(guī)律的動情周期則為成模大鼠，每組給予相應(yīng)的藥物灌胃，假手術(shù)組和模型組給予蒸餾水。每日1次，連續(xù)4周，給藥同時每周稱量體質(zhì)量1次。末次灌胃后，麻醉后進行腹主動脈采血測定高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（TC）。結(jié)果與假手術(shù)組相比，其余各組大鼠體質(zhì)量均有增加（P＜0.05或P＜0.01）；玫參顆粒低、中、高劑量組和雌激素組都可以降低因去卵巢而升高的血清TC（P＜0.05或P＜0.01）；模型組大鼠HDL-C含量與假手術(shù)組比較均顯著降低（P＜0.01），玫參顆粒中、高劑量組，雌激素組能明顯升高降低的HDL-C含量（P＜0.05或P＜0.01）。模型組大鼠LDL-C含量與假手術(shù)組比較均顯著升高（P＜0.01），玫參顆粒低、中、高劑量組，雌激素組能明顯降低升高的LDL-C含量（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論玫參顆?？梢约m正因去除卵巢導(dǎo)致的血脂代謝異常，為臨床上應(yīng)用于治療圍絕經(jīng)后雌激素缺乏相關(guān)疾病尤其是脂代謝相關(guān)疾病和新藥的開發(fā)應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。

玫參顆粒去卵巢大鼠膽固醇高密度脂蛋白低密度脂蛋白

婦女進入更年期后，因卵巢功能衰退，雌激素減少，會表現(xiàn)為潮熱、盜汗、心悸、抑郁等的一系列的內(nèi)分泌失調(diào)現(xiàn)象，出現(xiàn)脂肪代謝紊亂及骨鈣丟失現(xiàn)象，容易患高血壓、冠心病、心血管疾病和骨質(zhì)疏松等疾?。?］。據(jù)資料顯示心血管疾?。–VD）的發(fā)病率是婦女絕經(jīng)前的4倍［2］，約占絕經(jīng)后女性死亡原因的30%［3］，同時研究發(fā)現(xiàn)脂代謝是導(dǎo)致心血管疾病的主要原因。本課題實驗在玫參顆粒對去卵巢大鼠更年期綜合征的基礎(chǔ)上，對去卵巢大鼠灌胃給予玫參顆粒30 d，重點觀察并探討對去卵巢大鼠血脂代謝的影響變化，以期能更全面地研究治療更年期綜合征的機理?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物選取SPF級6周齡雌性wistar大鼠70只，清潔級，體質(zhì)量165～185 g［北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，SCXK（京）2012-0001］。實驗前置動物于室溫20℃室內(nèi)1周，大鼠每籠5～6只，自由進食與飲水，置于塑料盒中。

1.2實驗藥物選取玫參顆粒（所選藥物經(jīng)蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合研究所程衛(wèi)東教授鑒定為正品），藥物組成包括紅芪、女貞子、酸棗仁、白芍、枸杞子、熟地黃、牡蠣、遠志組成，由蘭州大學(xué)藥學(xué)院制備成顆粒劑。按處方量，水煮藥材，得到浸膏，提取稠膏，溫度低于70℃進行真空干燥，對干膏粉進行優(yōu)選，選擇標(biāo)準(zhǔn)以提取的總黃酮、總皂苷和芍藥苷含量為準(zhǔn)。按配方比例取紅芪、酸棗仁等八味藥材，對其進行提取，制備干膏和顆粒，確定得出玫參顆粒每47.63 g相當(dāng)于成人每日用的原藥材61 g（即1 g玫參顆粒相當(dāng)于1.28 g的原藥材）；坤寶丸0.1g丸（北京同仁堂股份有限公司生產(chǎn)，批號Z11020185）；戊酸雌二醇片1 mg片（DELPHARM lilleS.A.S生產(chǎn)，H20120368）

1.3試劑與儀器Sc-3616低速離心機low speed centrifuge，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。日立7600全自動生化儀。倒置相差顯微鏡（OLYMPUS，日本）。

1.4實驗方法1）造模。將70只大鼠進行腹腔注射麻醉，采用10%的水合氯醛以0.4 mL/100 g。待麻醉完全，將大鼠腹位固定，于最末肋骨下、腋中線與脊柱外側(cè)2 cm交叉處剃毛。常規(guī)消毒后，用尖頭剪刀依次剪開皮膚層、筋膜層、肌肉層，做約1 cm的切口，分離組織，將脂肪團拉出腹腔，分離脂肪組織找到卵巢，手術(shù)線結(jié)扎后將卵巢切除，將組織送回入腹腔，縫合傷口。將對側(cè)卵巢切除，采取同上方法。在傷口滴加阿莫西林預(yù)防感染。共60只完全摘除卵巢，假手術(shù)組10只開腹，不切除卵巢，只切除卵巢旁邊相同大小脂肪組織。術(shù)后第5日，觀察動情周期，采用陰道涂片法，連續(xù)5 d，如未出現(xiàn)規(guī)則動情期變化，則造模成功。2）分組與給藥。將70只大鼠隨機分為模型組、假手術(shù)組、戊酸雌二醇組（雌激素組）、玫參顆粒高、中、低劑量組、坤寶丸陽性對照組。玫參顆粒低、中、高劑量組給藥，劑量分別為2.5 g/kg、5 g/kg及10 g/kg；戊酸雌二醇組0.1 mg/kg，坤寶丸組1 g/kg，用蒸餾水配成混懸液1 ml/100 g體質(zhì)量灌胃。假手術(shù)組和模型組用等量蒸餾水。以上各組給藥體積均為10 mL/kg，每天灌胃1次，連續(xù)30 d。

1.5檢測指標(biāo)大鼠血清中血脂檢測：總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測定采用日立7600全自動生化分析儀檢測試劑具體方法按試劑盒說明書要求進行操作。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（±s）表示，并對數(shù)據(jù)采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠的體質(zhì)量比較見表1。大鼠每周稱量體質(zhì)量1次，分別選取大鼠造模后1周、給藥后2周和給藥后4周體質(zhì)量統(tǒng)計結(jié)果可知，造模后1周與假手術(shù)對照組相比，其余各組大鼠體質(zhì)量均有增加（P＜0.05或P＜0.01）。給藥后2周和4周時可以發(fā)現(xiàn)玫參顆粒中、高劑量組能抑制因去卵巢而導(dǎo)致的體質(zhì)量增加。提示玫參顆粒可以抑制去卵巢后因機體內(nèi)分泌失調(diào)導(dǎo)致的體質(zhì)量增加。

表1　各組大鼠體質(zhì)量比較（g，±s）

表1　各組大鼠體質(zhì)量比較（g，±s）

與假手術(shù)組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與坤寶丸陽性對照組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。下同。

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2.2各組大鼠血清TC水平比較結(jié)果示模型組大鼠TC含量為（1.84±0.46）mmol/L，高于假手術(shù)組的（1.32±0.22）mmol/L（P＜0.01）；玫參顆粒低、中、高劑量組TC含量分別為（1.53±0.26）mmol/L、（1.34±0.34）mmol/L、（1.54±0.30）mmol/L，雌激素組為（1.51±0.26）均能明顯降低升高的TC含量（P＜0.05或P＜0.01），說明玫參顆粒低、中、高劑量組和雌激素組都可以降低因去卵巢而升高的血清TC。坤寶丸陽性對照為（1.87± 0.14）mmol/L，血清TC未明顯降低（P＞0.05）。

2.3對大鼠HDL-C、LDL-C的影響見表2。結(jié)果示模型組大鼠HDL-C含量與假手術(shù)組比較均顯著降低（P＜0.01），玫參顆粒中、高劑量組，雌激素組能明顯升高降低的HDL-C含量（P＜0.05或P＜0.01）。模型組大鼠LDL-C含量與假手術(shù)組比較均顯著升高（P＜0.01），玫參顆粒低、中、高劑量組，雌激素組能明顯降低升高的LDL-C含量（P＜0.05或P＜0.01）。

3　討論

有研究表明，雌激素可以促進血脂降解，降低TC和LDL-C水平，減少TC在動脈血管沉積，因而在預(yù)防心血管疾病中有著重要的作用［4］。也有學(xué)者認(rèn)為雌激素直接通過與受體結(jié)合的方式直接作用在血管壁，從而發(fā)揮作用［5］。絕經(jīng)后女性會表現(xiàn)卵巢功能的衰竭，雌性激素分泌不足的癥狀，更重要的是因雌激素分泌不足所造成的一系列內(nèi)分泌失調(diào)及由此引起的糖脂代謝障礙等遠期的一些并發(fā)癥危害，同時也會增加了患有心血管疾病的風(fēng)險。流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)血清TC的增加會增加CHD的發(fā)病危險［6］。目前，針對更年期脂類代謝異常，最常用的是激素替代治療（HRT）療法，且療效顯著［7］。雖然HRT療法在臨床上被廣泛應(yīng)用，但利弊一直存在著較大的爭議，婦女健康協(xié)會（WHI）發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后使用雌激素長期進行治療，危害很大，會導(dǎo)致腦卒中、老年性癡呆和輕度認(rèn)知障礙、乳腺癌等疾病的增加［8］。因此，對HRT的應(yīng)用利弊評價還需要大量的臨床試驗來進行論證。

表2　大鼠血清HDL-C、LDL-C統(tǒng)計結(jié)果比較（mmol/L，±s）

表2　大鼠血清HDL-C、LDL-C統(tǒng)計結(jié)果比較（mmol/L，±s）

組別n假手術(shù)組10模型組10玫參顆粒低劑量組10 HDL-CLDL-C 1.33±0.310.236±0.056 0.90±0.17△△0.374±0.103△△0.92±0.200.277±0.073**玫參顆粒中劑量組91.22±0.26*0.241±0.064**玫參顆粒高劑量組101.37±0.27**0.23±0.053**坤寶丸陽性對照組81.30±0.13**0.397±0.073**雌激素組81.29±0.36**0.298±0.056*

研究發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)藥不僅表現(xiàn)雌激素樣作用，還對更年期綜合征的性腺軸有獨特的調(diào)節(jié)作用，能使卵巢延緩老化，這是單純HRT療法不能比擬的［9］。中藥在治療更年期綜合征時也能提高更年期婦女的免疫功能［10］，整體調(diào)控婦女即將老化的機體功能狀態(tài)，從而達到治療的目的，顯示了很好的發(fā)展前景。玫參顆粒是由紅芪為君藥，伍以熟地黃、女貞子、白芍、枸杞子養(yǎng)血滋陰、滋補肝腎；酸棗仁、遠志養(yǎng)心安神、補虛斂汗；牡蠣具有鎮(zhèn)靜潛陽功效，總藥達滋養(yǎng)肝腎、交通心腎、養(yǎng)心安神、調(diào)和氣血之效。紅芪為甘肅道地藥材，與黃芪同種不同屬，均可補中益氣、扶正固本。紅芪中的紅芪多糖能抑制糖尿病患者的TC、TG、LDL-C升高，抑制HDL-C降低［11］；女貞子含有齊墩果酸，可降低動脈粥樣硬化的發(fā)生率，主要通過降低血清總膽甾醇過氧化脂質(zhì)動脈壁總膽甾醇含量［12］；朱彩平等研究發(fā)現(xiàn)枸杞中主要生物活性成分枸杞多糖可顯著降低血脂水平［13］；酸棗仁脂肪油具有調(diào)節(jié)血脂作用，并可增強SOD、CAT活性，減少脂質(zhì)過氧化損傷［14］；白芍中的白芍總苷可明顯降低脂肪肝大鼠血漿TC、TG、LDL-C水平，提高血漿HDL-C水平［15］。諸藥合用，玫參顆粒在治療更年期的基礎(chǔ)上能很好地預(yù)防和治療更年期綜合征所導(dǎo)致脂代謝紊亂的并發(fā)癥，從而可以減少由于脂代謝失常而引發(fā)的心腦血管疾病的危害。

實驗結(jié)果顯示，去卵巢大鼠經(jīng)玫參顆粒治4周后能夠顯著降低TC和LDL-C，升高HDL-C水平。本實驗研究表明玫參顆?？梢院芎玫馗纳拼笫笠蛉ヂ殉仓麓菩约に厝狈Χ鸬闹惍惓Ｗ兓?。綜上所述，玫參顆粒能促進去卵巢雌性激素的分泌，同時改善脂代謝。該研究可以為其應(yīng)用于臨床治療圍絕經(jīng)期后雌激素缺乏相關(guān)疾病尤其是脂代謝相關(guān)疾病提供了實驗依據(jù)。

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The Effect of Meishen Granule on Sex Hormone and Serum Lipid in Ovariectomy Rats

ZHANG Gaolin，PANG Dayong，CHENG Weidong，et al.
School of Basic Medical Sciences，Lanzhou University，Gansu，Lanzhou 730000，China

Objective：To detect and observe the effect of Meishen granule on sex hormone and serum lipid in ovariectomy rats.Methods：70 female wistar rats were randomly divided into 7 groups，which were the sham-operated group，osteoporosis model group，Kunbaowan granule group，Meishen granule with high doses，medium doses and low doses groups.On the fifth day after operation，the other groups，except the sham-operated group，received vaginal smears，lasting for 5 days，till irregular estrous cycle was observed，for which the rats would become model rats.Every group was given intragastric administration with corresponding drugs，and the sham-operated group and the model group received distilled water distilled water.The treatment was given once per day，lasting for 4 weeks and the weight would be measured each time.After the last time to fill the stomach，abdominal aortic blood after anesthesia，the level of HL-C，LDL-C and TC was measured.Results：Meishen granule could significantly increase the level of HDL-C，and decrease the level of TC and LDL-C，which showed extremely significant difference（P＜0.01 or P＜0.05）.Conclusion：Meishen granule can improve abnora sex hormone and serum lipid in ovariectomy rats，an basis for clinical applications of pharmacodynamics and new perimenopause drugs development.

Meishen granule；Perimenopause；Ovariectomized rats；Endocrine-immune

R285.5

A

1004-745X（2015）10-1725-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.011

2015-06-16）

廣東省高等學(xué)校人才引進項目

（電子郵箱：chengweidong888@sina.com）