丁然然楊帆劉洋李寧劉思娣

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)研究所，安徽合肥230038）

·研究報告·

針刺列缺穴對過敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜病理學(xué)的影響*

丁然然1楊帆2△劉洋1李寧1劉思娣1

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)研究所，安徽合肥230038）

目的觀察針刺列缺穴對過敏性鼻炎大鼠行為學(xué)和鼻黏膜病理學(xué)的影響。方法卵白蛋白建造大鼠過敏性鼻炎模型。60只SD雄性健康大鼠隨機分為空白組、對照組和針刺組每組各20只。觀察針刺列缺穴對大鼠行為學(xué)和病理學(xué)的影響。結(jié)果實驗前（第1日）3組行為學(xué)差別不大（P＞0.05）；第7日（模型復(fù)制局部激發(fā)結(jié)束后），與空白組比較，對照組、針刺組18只大鼠鼻癢、噴嚏和流涕等行為學(xué)總積分增加（P＜0.01）；第14日（干預(yù)后），針刺組行為學(xué)總積分與模型組比較明顯降低（P＜0.05）?？瞻捉M大鼠鼻黏膜肉眼觀無充血、無腫脹，顏色淡紅；光鏡下無嗜酸性粒細胞浸潤；對照組大鼠鼻黏膜肉眼觀蒼白，可見多處潰瘍，充血水腫，鼻甲腫脹，時有清稀分泌物，光鏡下腺體增生，嗜酸性粒細胞浸潤明顯增多；針刺組鼻黏膜充血、水腫、潰瘍較對照組明顯好轉(zhuǎn)，且嗜酸性粒細胞數(shù)目較對照組明顯減少。結(jié)論針刺列缺可加快修復(fù)鼻黏膜上皮細胞，減少嗜酸性粒細胞等炎癥細胞浸潤而改善過敏癥狀。

過敏性鼻炎針刺列缺實驗學(xué)

過敏性鼻炎（AR）是一種吸入刺激物而致的以鼻黏膜嗜酸性粒細胞等多種炎性細胞浸潤，IgE介導(dǎo)的免疫細胞釋放化學(xué)介質(zhì)引起的I型變態(tài)反應(yīng)炎癥性疾?。?］。與中醫(yī)學(xué)“鼻鼽”接近，其原因多為情志不遂，外感六邪，飲食不潔，勞逸失調(diào)致鼻道壅塞從而發(fā)鼻塞、鼻涕、噴嚏、鼻癢等臨床癥狀。近年來由于全球自然環(huán)境惡化、城市污染加劇、生活節(jié)奏加快等等原因，過敏性鼻炎的患病率明顯增加，嚴(yán)重影響患者工作、學(xué)習(xí)、生活，已成為全球性健康問題之一。針灸臨床已經(jīng)證實針刺列缺穴對過敏性鼻炎有一定的治療作用［2］，但作用機制并不十分清楚。本實驗通過建立卵白蛋白致大鼠過敏性鼻炎模型，觀察針刺列缺對大鼠行為學(xué)和鼻黏膜病理學(xué)的改變，揭示針刺列缺通利鼻竅的可能機制。現(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1動物及分組選用健康SD雄性大鼠（購于蘇州工業(yè)園區(qū)愛爾麥特科技有限公司），體質(zhì)量（450±30）g。采用曠場實驗法［3］作行為學(xué)評分，選擇得分相近的60只SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，再采用隨機數(shù)字表法分為空白組、針刺組和對照組，每組各20只。實驗過程中對動物的處置符合2006年國家科技部《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》的規(guī)定［4］。

1.2試劑與儀器卵白蛋白（A5378：美國Sigma公司）。氫氧化鋁（天津市光復(fù)精細化工研究所，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號為津Q/HG NK 204-2000）。針灸針（天協(xié)牌，蘇州，規(guī)格：0.25 mm×13 mm）。世泰粘附載玻片（規(guī)格為25 mm× 75 mm）；冷凍切片機（Leica CM1900）；HE染色常規(guī)試劑；曠場試驗箱（自制80 cm×80 cm×40 cm，并將曠場等分為25小格）。腹腔注射基礎(chǔ)致敏劑配制：佐劑卵白蛋白30 mg，氫氧化鋁3 g，0.9%氯化鈉溶液100 mL，配制后放冰箱冷藏備用。2%卵清蛋白滴鼻液配制：用卵清蛋白加入0.9%氯化鈉溶液配制成濃度為2%的卵清蛋白滴鼻液冰箱冷藏備用。

1.3模型制備模型制備采用目前常用的“基礎(chǔ)致敏與局部攻擊法”［5-7］，具體方法為對照組和針刺組用腹腔注射基礎(chǔ)致敏劑腹腔注射，每次1 mL，隔日1次，共7次。用2%卵清蛋白滴鼻液每側(cè)50 μL滴鼻做局部激發(fā)，每日1次，共7次，2種致敏方法同時進行?？瞻捉M大鼠隔日用0.9%氯化鈉溶液1 mL腹腔注射，共7次，每日50 μL 0.9%氯化鈉溶液每側(cè)滴鼻，共7次。模型評判標(biāo)準(zhǔn)主要是通過1998年Nabe等［8］癥狀學(xué)的觀察：依據(jù)致敏后30 min鼻癢、噴嚏、流涕等癥狀記錄并計分。第7日，各癥狀計分疊加，總分＞5分者為模型成功［9］。模型成功情況：模型復(fù)制第7日時，對照組大鼠在腹腔注射過程中死亡1只，行為學(xué)總積分＞5分有18只，針刺組大鼠行為學(xué)總積分＞5分有19只。每組存留18只模型成功大鼠進行下一步實驗。

1.4針刺治療針刺組大鼠放到大鼠治療臺上，選用天協(xié)牌25 mm×75 mm針灸針，參照林文注主編的全國協(xié)編教材《實驗針灸學(xué)》取穴，在大鼠安靜狀態(tài)下，針刺大鼠雙側(cè)前腿的“列缺”穴，進針約2～3 mm，行平補平瀉手法，留針20 min?？瞻捉M與對照組：每日放上治療架20 min固定而不針刺。各組于第8～14日，每日9∶00進行。

1.5觀察指標(biāo)1）行為學(xué)積分。對所有實驗大鼠在實驗進行的第1日（開始實驗前）、第7日（模型復(fù)制局部激發(fā)結(jié)束后）、第14日（針刺干預(yù)后）進行行為學(xué)觀察并計分。每日建造模型后30 min，用電子攝像機記錄大鼠鼻癢、噴嚏、流涕等行為并疊加計分（鼻癢程度：撓鼻，計1分；撓鼻不止，計2分。噴嚏：1～3個為1分，4～10個為2分，11個以上為3分。流涕：流至鼻前孔為1分，超過鼻前孔為2分，流涕滿面為3分）。2）鼻黏膜取材及觀察。所有動物實驗結(jié)束后，對3組大鼠行心臟空氣針處死，游離出上頜骨，取出鼻中隔前中段組織。10%甲醛固定，蔗糖脫水，冷凍機切片，常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡（×200倍鏡）下觀察病理改變。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示。組間比較若滿足正態(tài)性者，使用單因素方差分析，不滿足正態(tài)性資料用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠行為學(xué)積分比較見表1。實驗前（第1日）3組行為學(xué)差別不大（P＞0.05）；第7日（模型復(fù)制局部激發(fā)結(jié)束后），與空白組比較，對照組、針刺組18只大鼠鼻癢、噴嚏和流涕等行為學(xué)總積分增加（P＜0.01）；第14日（干預(yù)后），針刺組針刺列缺后，行為學(xué)總積分與模型組比較有明顯降低（P＜0.05）。

表1　各組大鼠行為學(xué)積分比較（分，±s）

表1　各組大鼠行為學(xué)積分比較（分，±s）

與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05。

組別第7日第14日n第1日空白組0.28±0.460.33±0.49對照組6.28±1.22**4.72±1.77 180.28±0.57 180.44±0.61針刺組6.00±1.08**3.00±1.81△180.33±0.59

2.2各組大鼠鼻黏膜病理組織的觀察見圖1～圖3。各組大鼠鼻黏膜10×20倍鏡下病理組織切片觀察發(fā)現(xiàn)，空白組大鼠鼻黏膜肉眼觀無充血、無腫脹，顏色淡紅；光鏡下無嗜酸性粒細胞浸潤；對照組大鼠鼻黏膜肉眼觀蒼白，可見多處潰瘍，充血水腫，鼻甲腫脹，時有清稀分泌物，光鏡下腺體增生，嗜酸性粒細胞浸潤明顯增多；針刺組大鼠針刺列缺后，肉眼觀，光鏡下，上述病理學(xué)特征得到明顯改善，說明針刺列缺可改善過敏性鼻炎癥狀，進一步證實了針刺列缺通利鼻竅的治療可行性。

圖1　各組鼻黏膜病理組織觀察（HE，×200）

3　討論

鼻炎治療西醫(yī)多采用免疫療法和藥物治療。免疫療法過敏原較難確定而且標(biāo)準(zhǔn)難統(tǒng)一，起效慢，療程長，患者依從性差。藥物治療以抗組胺藥、糖皮質(zhì)激素等為主，雖然改善癥狀明顯，但毒副作用大［10］，治療效果往往不令人滿意。

近年來治療鼻炎的中醫(yī)療法，如中藥、針灸、推拿等具有毒副作用小、效果明顯等自然資源優(yōu)勢，受到人們的廣泛重視［11］。列缺出自《靈樞·經(jīng)脈》，屬手太陰肺經(jīng)絡(luò)穴，四總穴之一。鼻的通氣和嗅覺功能必須依賴肺氣的宣發(fā)運動［12］，故列缺可宣通肺氣，通利鼻竅；《四總穴歌》謂“頭項尋列缺”，因此列缺穴可用作治療頭面鼻腔的遠取穴。大量的臨床實踐中發(fā)現(xiàn)，對于治療急、慢鼻炎，選取列缺穴，往往可以得到良好效果［13-15］。

過敏性鼻炎模型的建立，以陳忠［16］為代表的多數(shù)學(xué)者采用卵白蛋白對大鼠行全身致敏和局部攻擊的方式，采用豚草花粉［17］、蛔蟲變應(yīng)原［18］方式致敏等。研究表明卵白蛋白致敏可行性高，動物存活率高，有效率高。本實驗采用此模型復(fù)制方法復(fù)制過敏性鼻炎模型，成功率較高。本實驗結(jié)果示，針刺列缺穴對過敏性鼻炎模型大鼠行為學(xué)及病理學(xué)的改變具有一定的研究意義，針刺組針刺后，行為學(xué)總積分較對照組明顯下降，鼻黏膜病理切片嗜酸性粒細胞數(shù)目明顯減少，表明針刺列缺穴一定程度上可加快鼻黏膜上皮的自我修復(fù)，抑制炎癥細胞，特別是嗜酸性細胞在浸潤而改善過敏癥狀。

針刺對過敏性鼻炎的作用機制目前尚無定論，賴新生［19］認為針刺可影響患者總IgE和特異性IgE水平；婁述［20］認為取“碟愕神經(jīng)節(jié)”為主穴可刺激鼻腔內(nèi)植物神經(jīng)而達到治療目的；周小寧［21］、馮建國［22］認為與“低皮質(zhì)醇水平”有關(guān)，針刺后血漿皮質(zhì)醇含量升高。而針刺列缺對過敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜病理學(xué)的影響研究未見文獻報道，本實驗揭示了針刺列缺通利鼻竅的部分實驗原理，為進一步探討針刺對過敏性鼻炎大鼠的作用機理提供了一定依據(jù)。

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Exprimental Research on the Effect of Acupuncturing at Lieque on the Nasal Mucosa Pathology Changes of Model Rats with Allergic Rhinitis

DING Ranran，YANG Fan，LIU Yang，et al.
Anhui University of TCM，Anhui，Hefei 230038，China

Objective：To observate the AR rat′s ethology and nasal mucosa pathology changes after acupuncturing at Lieque.Methods：60 SD healthy male rats were randomly divided into the blank group，the model group and the acupuncture group，built with the model of allergic rhinitis.Results：Bofore experiment，there were no significant behavioral differences in the three groups（P＞0.05）.On the 7th day，compared with the blank group，18 rats in the control group and the acupuncture group had an increasing general behavior score，such as nasal itching，sneezing and runny nose（P＜0.01）.On the 14th day，after acupuncturing at Lieque，compared with the model group，the general behavior score of the acupuncture group had an obvious reduce（P＜0.05）.In the blank group，there was no obvious congestion and swelling in nasal mucosa with pink color and no eosinophilic infiltration under mircoscope.In the control group，there were obvious pale nasal mucosa，ulcers，congestion，swelling，Turbinate swelling，sometimes clear dilute secretion，gland hyperplasia under microscope，and an increase of eosinophilic infiltration.In the acupuncture group，nasal mucosa congestion，edema and ulcers were improved obviously，and the number of EOS was significantly reduced.Conclusion：Acupuncturing at Lieque can speed up the repair of nasal mucosa，decrease EOS and improve the symptoms of allergy.

Acupuncture；Lieque；AR；Expriment

R245.3

A

1004-745X（2015）10-1743-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.017

2015-05-02）

安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目（AH201410369201）

（電子郵箱：811375706@qq.com）