劉亞樂 葛芹 李張軍 耿松梅 肖生祥 姚翠萍 張鎮(zhèn)西 曾維惠

納米金光熱作用對(duì)ICR小鼠皮膚光老化保護(hù)作用的初步研究

劉亞樂 葛芹 李張軍 耿松梅 肖生祥 姚翠萍 張鎮(zhèn)西 曾維惠

目的 探討納米金光熱作用對(duì)雌性ICR小鼠皮膚光老化的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法 32只健康雌性ICR小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、紅光組、納米金組，每組8只。正常組小鼠不予任何干預(yù)，另3組每次照射前背部脫毛，面積約16 cm2。每次照射紫外線前，模型組暫不予以特殊處理。紅光組小鼠給予紅光照射，納米金組小鼠先涂抹納米金球溶液，用黑色塑料薄膜封包30 min后再照射紅光。經(jīng)上述處理后，將模型組、紅光組、納米金組小鼠分籠放入燈箱中進(jìn)行紫外線照射。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，肉眼及皮膚鏡觀察皮膚外觀變化；取小鼠背部皮膚，組織切片HE染色和Masson染色觀察皮膚組織結(jié)構(gòu)和膠原纖維的改變。ImageJ圖像分析軟件計(jì)算膠原纖維面積。DCFH-DA探針檢測皮膚細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）含量。ELISA檢測皮膚組織中基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP-13）的含量。采用單因素方差分析進(jìn)行組間差異分析，并用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩多重比較。用簡單線性回歸分析ROS變化與MMP-13表達(dá)量之間的相關(guān)性。結(jié)果 與正常組比較，紫外線照射后，模型組小鼠皮膚出現(xiàn)皮屑、褐黃、粗糙肥厚、深皺紋、缺乏彈性等光老化特征；皮膚鏡下小鼠皮膚粗糙，毛細(xì)血管斷裂出血，結(jié)痂，褐色斑點(diǎn)。組織切片顯示，模型組小鼠表皮厚度［（81.32±7.09）μm］和真皮厚度［（352.75±40.08）μm］均較正常組［表皮（38.42±13.64）μm，真皮（188.50±27.83）μm］明顯增加（P＜0.05），膠原纖維面積減少（分別為31.94%± 8.56%和48.63%±11.32%，P＜0.05），異常彈性物質(zhì)增多；模型組ROS含量（5 124 152.80±754 119.22）DCF熒光強(qiáng)度/mg蛋白和MMP-13表達(dá)（3 895.42±136.06）g/L均較正常組（分別為3 502 085.29±135 089.06）DCF熒光強(qiáng)度/mg蛋白和（2 414.73±105.96）g/L明顯增高（P＜0.05）。與模型組比較，納米金組皮膚外觀及組織學(xué)特點(diǎn)均明顯改善，小鼠皮膚厚度明顯變薄，表皮（48.70±13.35）μm，真皮（253.74±36.28）μm（P＜0.05），且其表皮厚度恢復(fù)正常（P＞0.05），膠原纖維面積（41.54%±12.10%）增加（P＜0.05）；納米金組ROS含量（3 516 963.35± 67 436.36）DCF熒光強(qiáng)度/mg蛋白和MMP-13表達(dá)（2 558.25±102.72）g/L均較模型組明顯降低（P＜0.05），且恢復(fù)至正常水平。用簡單線性回歸分析顯示，ROS的產(chǎn)生量與MMP-13的表達(dá)量呈正相關(guān)（r=0.864，P= 0.018）。結(jié)論 納米金的光熱作用對(duì)小鼠光老化有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其減少ICR小鼠皮膚組織中ROS產(chǎn)生，從而減少下游MMP-13表達(dá)有關(guān)。

皮膚衰老；紫外線；活性氧；基質(zhì)金屬蛋白酶13；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；金屬納米粒子；納米金

皮膚光老化是皮膚長期、反復(fù)暴露于紫外線所產(chǎn)生的皮膚早老征象。納米金是非常好的光熱轉(zhuǎn)換顆粒，不同粒徑、不同形態(tài)的納米金能高效地吸收可見光或近紅外光，并迅速轉(zhuǎn)換為熱能［1］，適用于醫(yī)學(xué)靶向清除人體病變組織。同時(shí)納米金還具有表面吸附特性，能穩(wěn)定又迅速地吸附生物大分子，且不改變其性狀［2］，非常適用于醫(yī)學(xué)探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)生物大分子的定位。目前，納米金的光熱作用廣泛應(yīng)用于癌癥治療［3-4］，但在光老化的預(yù)防方面尚未見報(bào)道。由于納米金球的尺寸小、易合成［1］，我們就納米金球的光熱作用在光老化的保護(hù)方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，并初步探討其可能的機(jī)制。

材料與方法

一、試劑和儀器

雌性封閉群ICR小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)0014410，飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)，溫度（25±10）℃，普通飼料和水喂養(yǎng)。40 W紫外線燈管，包括中波紫外線（UVB）管4支、長波紫外線（UVA）管2支（北京譽(yù)朗諾科技有限公司），UVA和UVB輻射計(jì)（上海希格瑪高技術(shù)有限公司），Carnation-88C一體式高能窄譜光子治療儀（紅光模式，中心波長630 nm，深圳普門科技有限公司），VICTO X5多功能酶標(biāo)儀（美國PerkinElmer公司）；氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）（上海精細(xì)化工研究所），支鏈聚乙烯亞胺（BPEI）（德國Sigma-Aldrich公司），活性氧簇（ROS）試劑盒（南京建成生物工程研究所），RIPA裂解液（西安赫特生物科技有限公司），BCA試劑盒（西安晶彩生物科技有限公司），小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）ELISA試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）。

二、方法

1.陽離子納米金球的合成：由于皮膚在生理?xiàng)l件下帶負(fù)電［5］，18 nm納米金具有無毒、不易轉(zhuǎn)位的特性［6］，故制備18 nm粒徑的陽離子納米金球，采用BPEI還原法［7］制備。取3 ml 1%（m/v）的HAuCl4與2.5 g BPEI氯金酸，用超純水定容至50 ml，待溶液混勻后，轉(zhuǎn)移至燒杯中，調(diào)節(jié)恒溫磁力攪拌加熱器至80℃，將燒杯至于恒溫磁力攪拌加熱器上攪拌溶解，可觀察到顏色由淡黃色-無色-淡紅色-深紅色，顏色不再變化時(shí)，停止攪拌；將燒瓶中的溶液轉(zhuǎn)移至棕色容量瓶中定容至50 ml；用超速離心機(jī)100 000×g離心20 min，離心2次，棄上清液，加超純水10 ml，用超純水10倍稀釋，4℃冷藏備用。透射電鏡（TEM，H-7650透射式電子顯微鏡）觀察制備納米金顆粒的形態(tài)，紫外分光光度計(jì)測量納米金的吸收峰。

2.動(dòng)物分組及處理：實(shí)驗(yàn)開始前，小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。32只雌性ICR小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、紅光組、納米金組，每組8只。正常組小鼠不予任何干預(yù)，另3組每次照光前用電推剪給小鼠背部脫毛，脫毛面積約16 cm2。每次照射紫外線前，模型組暫不予以特殊處理。紅光組小鼠給予紅光照射（0.8 W/cm2，30 min，該參數(shù)為預(yù)實(shí)驗(yàn)所定），納米金組小鼠先涂抹納米金球溶液，用黑色塑料薄膜封包30 min后再照射紅光（0.8 W/cm2，30 min）。經(jīng)上述處理后，將模型組、紅光組、納米金組小鼠分籠放入燈箱中進(jìn)行紫外線照射。

3.紫外線照射：40 W紫外燈管（UVB 4支、UVA 2支）并列裝于木箱制成燈箱［8］，小鼠背部距燈源30 cm。用UVA和UVB輻射計(jì)測得的吸光度分別為1 mW/cm2和0.15 mW/cm2，測量小鼠背部皮膚最小紅斑量（minimal erythema dose，MED）。每次照射前燈管預(yù)熱15 min，每周一、三、五照射，第1周照射量為1 MED，以后每周增加1 MED至第4周，然后維持4 MED直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，共照射14周［9］。

4.取材：最后一次照射結(jié)束24 h后，用5%硫化鈉溶液給小鼠背部脫毛。脫毛24 h后腹腔注射水合氯醛（250 mg/kg）麻醉，拍照，德國DELTA20皮膚鏡（×10）觀察，繼而處死。立即取下背部脫毛處全層皮膚。一部分放入4%甲醛溶液中固定過夜，制作病理組織切片，HE染色并用顯微鏡測量真、表皮厚度，Masson染色（用胺本藍(lán)，而不是亮綠）觀察膠原變化和ImageJ圖像分析軟件計(jì)算膠原纖維面積。膠原纖維面積=測量區(qū)真皮膠原染色面積/測量區(qū)真皮面積（真表皮連接至皮下脂肪層上緣）×100%［10］。一部分皮膚去除皮下脂肪，在冰凍的生理氯化鈉溶液中漂洗，冷凍于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

5.皮膚組織勻漿的制備及ROS測定：采用DCFH-DA探針測量皮膚ROS含量。將皮膚用濾紙拭干，稱重放入小燒杯中，加入100 mmol/L冷磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液的總量是皮膚組織塊重量的20倍），盡快剪碎后移入玻璃勻漿器制成勻漿，1 000×g離心10 min后取上清液，依據(jù)試劑說明書測定ROS的產(chǎn)生量。采用VICTO X5多功能酶標(biāo)儀檢測熒光強(qiáng)度，酶標(biāo)儀激發(fā)波長為485 nm，發(fā)射波長為525 nm。結(jié)果表示為熒光強(qiáng)度/mg蛋白。

6.組織蛋白提取及MMP-13檢測：將組織用干凈的剪刀盡量剪碎，置于陶瓷研缽中，加適量液氮研碎組織后再加入組織蛋白裂解液（150～200 μl/ 20 mg），反復(fù)碾壓盡量碾碎組織（整個(gè)過程在冰上進(jìn)行），裂解1～2 min后移至1.5 ml離心管中，4℃離心機(jī)中12 400×g離心5 min；離心完成后取上清分裝于0.5 ml離心管中，-80℃保存。BCA定量試劑盒檢測蛋白含量后ELISA檢測組織中MMP-13含量。

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，數(shù)據(jù)用±s表示，各組間的差異用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)，并用LSD-t檢驗(yàn)作兩兩多重比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用簡單線性回歸分析ROS變化與MMP-13表達(dá)量之間的相關(guān)性。

結(jié)果

一、納米金的形態(tài)及特征

TEM下觀察所制備的陽離子納米金顆粒粒徑大小均勻，直徑約18 nm。紫外可見光吸光度的結(jié)果顯示，其吸收峰出現(xiàn)在約530 nm處［11］。見圖1，2。

圖1 BPEI還原法制備的納米金透射電鏡圖（×20萬，標(biāo)尺：20 μm）和紫外-可見光吸光譜圖（右） 透射電鏡圖可見納米金球顆粒粒徑大小接近均勻，顆粒不團(tuán)聚，直徑18 nm

圖2 BPEI還原法制備的納米金紫外-可見光吸光譜 納米金球吸收峰值在530 nm處

二、臨床和皮膚鏡觀察

肉眼觀察，正常組小鼠皮膚光滑，顏色紅潤，有彈性；模型組小鼠皮膚出現(xiàn)皮屑、褐黃、粗糙肥厚、深皺紋、缺乏彈性等光老化特征；紅光組小鼠皮膚中度粗糙，尾側(cè)皮膚有鱗屑，中度皮革樣外觀；納米金組小鼠皮膚外觀，除隱約可見的褐色斑外，大體接近正常組。皮膚鏡下：正常組小鼠皮膚顏色紅潤，血管清晰可見，而模型組小鼠皮膚粗糙，毛細(xì)血管斷裂出血、結(jié)痂，褐色斑點(diǎn)；紅光組小鼠皮膚改變以散在鱗屑、輕度褐色斑及毛細(xì)血管擴(kuò)張為主；納米金組小鼠皮膚可見散在、不規(guī)則褐色斑片，皮膚紋理稍清晰，明顯較模型組及紅光組的老化現(xiàn)象輕。見圖3。

圖3 4組不同處理小鼠背部皮膚的臨床和皮膚鏡觀察結(jié)果 肉眼觀察：正常組小鼠皮膚光滑，顏色紅潤，有彈性；模型組小鼠皮膚粗糙、大面積鱗屑、結(jié)痂，皮革樣外觀；紅光組小鼠中等程度粗糙，尾側(cè)皮膚有鱗屑，中等程度皮革樣外觀；納米金組小鼠皮膚可見散在褐色斑點(diǎn)，皮膚顏色和質(zhì)地接近正常。皮膚鏡下觀察（×10）：正常組小鼠皮膚光滑，顏色紅潤，血管支清晰；模型對(duì)照組小鼠皮膚大量褐色斑片、結(jié)痂，血管支難以辨認(rèn)；紅光組小鼠皮膚鱗屑、散在褐色斑點(diǎn)及出血點(diǎn)；納米金組小鼠皮膚以褐色斑片為主，無明顯鱗屑、出血和結(jié)痂

三、組織切片HE染色及膠原纖維Masson染色

HE染色顯微鏡觀察可見，正常組表皮連續(xù)，結(jié)構(gòu)完整，皮膚較薄，層次分明，Masson染色真皮層可見規(guī)律分布的膠原纖維束，長軸與皮面平行；模型組表皮增厚，角化過度伴角化不全，表皮及真皮層明顯增厚，膠原纖維減少、斷裂、卷曲，排列紊亂，分布不均。納米金組皮膚基本接近正常，而紅光組組織學(xué)改變介于兩者之間。見圖4。

圖4 4組不同處理小鼠背部皮膚組織HE染色（×40）和膠原纖維Masson染色（×100）結(jié)果 HE染色，正常組小鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)清晰、層次分明，真表皮較??；模型組小鼠表皮角化過度，真表皮厚度明顯增加；紅光組小鼠皮膚較薄，真表皮連接處變平；納米金組小鼠皮膚輕度角化，真表皮厚度較薄。Masson染色，正常組膠原豐富，排列整齊，無增粗或斷裂；模型組小鼠膠原明顯減少，排列紊亂；紅光組小鼠膠原稍增多，但仍較粗、斷裂、卷曲；納米金組小鼠皮膚膠原纖維增加，排列漸趨規(guī)整

表1 4組小鼠表皮和真皮的厚度及真皮膠原纖維面積/真皮面積百分比的變化（±s）

表1 4組小鼠表皮和真皮的厚度及真皮膠原纖維面積/真皮面積百分比的變化（±s）

注：a：與模型組比較，P＜0.05；b：與正常組比較，P＜0.05

組別 只數(shù) 表皮厚度（μm） 真皮厚度（μm） 真皮膠原纖維面積（%）正常組 8 38.42±13.64a 188.50±27.83a 48.63±11.32a模型組 8 81.32±7.09b 352.75±40.08b 31.94±8.56b紅光組 8 53.47±8.37ab 304.87±47.55ab 38.89±6.81b納米金組 8 48.70±13.35a 253.74±36.28ab 41.54±12.10a F值 22.207 26.629 3.380 P值 ＜0.001 ＜0.001 0.035

ImageJ圖像分析軟件分析皮膚結(jié)構(gòu)顯示（表1），與正常組相比，模型組真表皮厚度均明顯增加（P＜0.05），真皮膠原纖維面積減少（P＜0.05）；納米金組較模型組真表皮厚度均明顯降低（P＜0.05），且其表皮厚度恢復(fù)正常（P＞0.05），納米金組真皮膠原纖維面積較模型組增加（P＜0.05）。紅光組的真表皮厚度均高于正常組，又低于模型組（P＜0.05），其真皮膠原纖維面積低于正常組（P＜0.05），但與模型組沒有差異（P＞0.05）。

四、ROS含量測定

正常組、模型組、紅光組、納米金組皮膚組織中ROS含量分別為（3 502 085.29±135 089.06）、（5124152.80±754119.22）、（4078230.66±157934.42）和（3 516 963.36±67 436.36）DCF熒光強(qiáng)度/mg蛋白，經(jīng)單因素方差分析，4組間ROS表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=19.511，P＜0.001）。與正常組相比，模型組ROS含量明顯增多（P＜0.05）；與模型組相比，納米金組含量降低（P＜0.05），且恢復(fù)至正常水平；而紅光組ROS含量介于正常組與模型組之間（P＜0.05）。

五、ELISA檢測皮膚組織中MMP-13含量

正常組、模型組、紅光組、納米金組皮膚組織中MMP-13含量分別為（2 414.73±105.96）、（3 895.42± 136.06）、（2 925.17±71.27）和（2 558.25±102.72）g/L，經(jīng)單因素方差分析，4組間MMP-13表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=37.337，P=0.000）。與正常組比較，模型組皮膚組織中MMP-13含量明顯增多（P＜0.05）；與模型組相比，納米金組含量降低（P＜0.05），且恢復(fù)至正常水平；而紅光組MMP-13水平介于正常組與模型組之間（P＜0.05）。

六、ROS的產(chǎn)生量與MMP-13表達(dá)水平之間的關(guān)系

用簡單線性回歸分析ROS與MMP-13表達(dá)之間的關(guān)系，結(jié)果表明，兩者之間呈正相關(guān)（r=0.864，P=0.018）。

討論

納米金的光熱特性基于其表面等離子體共振，當(dāng)納米金顆粒受到一定強(qiáng)度的光照時(shí)，可強(qiáng)烈地吸收光，并將光能轉(zhuǎn)化為熱能，傳遞給周圍環(huán)境，產(chǎn)生局部光熱作用，造成局部細(xì)胞溫度升高，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的殺傷。同時(shí)納米金還具有良好的熱傳導(dǎo)性和光熱效應(yīng)。已有研究證實(shí)，納米金對(duì)細(xì)胞有熱殺傷作用［3-4］。我們利用納米金光熱作用干預(yù)小鼠皮膚后再進(jìn)行紫外線照射，發(fā)現(xiàn)在皮膚鏡下，小鼠皮膚色素斑、毛細(xì)血管擴(kuò)張及皮革樣外觀明顯改善。組織切片上真、表皮厚度未見明顯增加，膠原纖維面積及分布接近正常組，顯示皮膚未出現(xiàn)明顯光老化表現(xiàn)。

本研究提示，小鼠皮膚在經(jīng)過納米金的光熱作用后，一定程度上可預(yù)防皮膚出現(xiàn)嚴(yán)重的光老化。為初步探討其可能機(jī)制，我們檢測了與光老化密切相關(guān)的ROS和MMP的變化。由于小鼠和人MMP表達(dá)的差異性，人類皮膚光老化膠原的降解以MMP-1為主，小鼠以MMP-13為主［12］，因此，本課題選擇檢測MMP-13在小鼠皮膚組織中的變化。我們的結(jié)果顯示，相比正常組，模型對(duì)照組小鼠皮膚中ROS、MMP-13表達(dá)均明顯升高（P＜0.05），而真皮中膠原纖維面積減少（P＜0.05）；納米金光熱作用干預(yù)后皮膚中ROS、MMP-13表達(dá)明顯降低（P＜0.05），而真皮中膠原纖維面積明顯增加（P＜0.05）。而紅光組改變介于兩者之間，提示紅光在光老化預(yù)防方面亦有一定作用。

我們的研究初步提示，納米金光熱作用預(yù)防光老化的機(jī)制是減少光老化過程中發(fā)揮主要作用的ROS的產(chǎn)生，避免ROS作用于其下游分子，如MMP-13等，達(dá)到預(yù)防光老化的作用。我們將納米金的光熱作用用于光老化保護(hù)方面的研究，為光老化的預(yù)防提供了新方法。

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Gold nanoparticles protect against skin photoaging through photothermal effects in ICR mice:a preliminary study

Liu Yale*,Ge Qin,Li Zhangjun,Geng Songmei,Xiao Shengxiang,Yao Cuiping,Zhang Zhenxi,Zeng Weihui.*Department of Dermatology,Second Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710004,China
< class="emphasis_italic">Corresponding author:Zeng Weihui,Email:zengwh88@163.com

Zeng Weihui,Email:zengwh88@163.com

ObjectiveTo investigate the protective effect of gold nanoparticles against skin photoaging through photothermal effects in female ICR mice,and to explore its possible mechanisms.MethodsA total of 32 healthy female ICR mice were randomly and equally divided into four groups:normal control group receiving no treatment,model group receiving ultraviolet radiation alone,red laser group irradiated with red laser followed by ultraviolet radiation,gold nanoparticle group pretreated with gold nanoparticle solution under occlusion with a black plastic film for 30 minutes followed by red laser and ultraviolet radiation.Ultraviolet radiation was conducted thrice a week for 14 weeks,and the hairs in an area sized about 16 cm2on the back of mice were shaved before each radiation in the model group,red laser group and gold nanoparticle group.At the end of experiment,the skin appearance of mice was observed by naked eyes and dermoscopy.Then,all the mice were sacrificed and skin samples were resected from the tested areas on the back. Haematoxylin-eosin（HE）and Masson′s staining was performed to observe the changes of skin structure and collagen fibers,and the image analysis software ImageJ was used to calculate the area fraction（AA%）occupied by collagen fibers.The DCFH-DA probe was utilized to determine the level of reactive oxygen species（ROS）,and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to measure the expression of matrix metalloproteinase-13（MMP-13）in skin samples.Statistical analysis was carried out by one-way analysis of variance（ANOVA）for intergroup comparisons followed by the least significant difference（LSD）-ttest for multiple pair-wise comparisons.The simple linear regression analysis was performed to assess the relationship between ROS levels and MMP-13 expression.Results After ultraviolet radiation,a series of characteristic photoaging changes were observed in the skin of mice in the model group,such as squamation,brown-yellowish discoloration,coarsening,thickening,appearance of deep wrinkles and lack of flexibility. Dermoscopy also showed skin coarseness,crusting and brown spots with breakage of and hemorrhage from capillaries in the model group.Compared with the normal control group,the model group showed significant increases in epidermal thickness（81.32±7.09 vs.38.42±13.64 μm,P＜0.05）,dermal thickness（352.75±40.08 vs.188.50±27.83 μm,P＜0.05）,ROS levels（5 124 152.80±754 119.22 vs.3 502 085.29±135 089.06 fluorescence intensity of DCF per milligram of protein,P＜0.05）and MMP-13 expression（3 895.42±136.06 vs.2 414.73±105.96 g/L,P＜0.05）,but a significant decrease in the area fraction occupied by collagen fibers（31.94%±8.56%vs.48.63%±11.32%,P＜0.05）with an elevation in abnormal elastic materials.Both skin appearance and histological changes improved obviously in the gold nanoparticle group compared with the model group.The skin was significantly thinner in the gold nanoparticle group（epidermal thickness:48.70±13.35 μm;dermal thickness:253.74±36.28 μm,P＜0.05）than in the model group. Moreover,the gold nanoparticle group showed a significant elevation in the area fraction occupied by collagen fibers（41.54%±12.10%,P＜0.05）,but a significant reduction in ROS levels（3 516 963.35±67 436.36 fluorescence intensity of DCF per milligram of protein,P＜0.05）and MMP-13 expression levels（2558.25±102.72 g/L,P＜0.05）compared with the model group.There were no significant differences between the gold nanoparticle group and normal control group in epidermal thickness,ROS levels or MMP-13 expression（allP＞0.05）.The simple linear regression analysis showed that ROS levels were positively correlated with MMP-13 expression（r=0.864,P=0.018）.Conclusion The photothermal effects of gold nanoparticles can protect ICR mice from skin photoaging to a certain degree,likely by downregulating the generation of ROS and expression of the downstream factor MMP-13.

Skin aging;Ultraviolet rays;Reactive oxygen species;Matrix metalloproteinase 13;Animal experimentation;Metal nanoparticles;Gold nanoparticle

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.10.012

國家自然科學(xué)基金（81172590）；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金（20130201110068）；西安交通大學(xué)學(xué)科綜合交叉項(xiàng)目（xjj20100201）

710004西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院皮膚科（劉亞樂、葛芹、李張軍、耿松梅、肖生祥、曾維惠）；西安交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院（姚翠萍、張鎮(zhèn)西）

曾維惠，Email：zengwh88@163.com

2014-12-02）

（本文編輯：周良佳 顏艷）