孫燕芳++劉巧蓮++陳河龍

摘 要 為了解不同蘆筍種質對莖枯病的抗性差異，采用孢子噴霧法對其幼苗進行噴霧后48 h保濕處理，7 d后統(tǒng)計分析各種質的發(fā)病情況并計算病情指數(shù)。結果表明：野生型大理天門冬和B7/TX-4病情指數(shù)均為0，為免疫種質；井岡701、TC山東、井岡全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6，病情指數(shù)均小于20，為中抗種質；太平洋2000病情指數(shù)為81.25，為感病種質。

關鍵詞 蘆筍 ；莖枯病 ；種質 ；抗病性 ；病情指數(shù)

分類號 S644.6 ；S436.44

蘆筍（Asparagus officinalis L.）別名石刁柏、龍須菜，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，是一種深受消費者喜愛的高檔蔬菜，有“蔬菜之王”的美譽[1]。我國從引進蘆筍以來，所種植的國外品種如格蘭德F1、UC157F1等均不抗莖枯病，因國外培育蘆筍品種的國家均為冷涼地區(qū)，蘆筍莖枯病發(fā)生很輕或不發(fā)生，蘆筍抗莖枯病不作為其育種目標[2-5]。進口品種引進后出現(xiàn)“水土不服”，不抗莖枯病而導致該病害大爆發(fā)。又因蘆筍在國內的生長季節(jié)里均為濕熱氣候，莖枯病極易發(fā)生和發(fā)展，尤其在南方地區(qū)，該病害已嚴重影響了蘆筍產業(yè)的發(fā)展[6-7]。目前，我國已經開展了蘆筍品種的選育工作，成功選育出一批國產蘆筍品種，并在生產上大面積應用，如井岡701，京綠蘆1號等。同時，不同蘆筍品種對莖枯病的抗性差異明顯，在蘆筍生產上篩選應用抗病、優(yōu)質品種是一種防治蘆筍莖枯病的有效途徑[8-10]。本實驗采用國內近年選育和收集的蘆筍種質進行苗期抗莖枯病鑒定，以期為生產上選育抗病品種和防治該病害提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試蘆筍種質

26個蘆筍種質來自江西農科院、云南大學和本實驗室收集保存的種質，分別為：B2-a/Tx-6（H）、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、B1-a/SD、B7-a/SD、B2-a/SD、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井岡翠、H666、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/TX、B1/TX-7、B3/TX-6、B7/TX-4、井岡全雄（1）、井岡全雄（2）、TC山東、大理天門冬、紫色太平洋、井岡紅、新世紀、井岡701、冠軍、太平洋2000。

1.1.2 供試菌株

供試菌株為本實驗室大田采集分離后測定的致病力最強的菌株BT05。

1.2 方法

1.2.1 蘆筍種子的浸種催芽

蘆筍種子播種前要先進行浸種催芽，方法為將種子先用清水漂洗，將種子用30～35℃的溫水浸泡48 h，浸泡期間每天換水1～2次，之后將種子濾出，放入盆中，上面蓋上一層濕布，置于25～28℃的環(huán)境中進行催芽，并每天用清水淘洗2次。當種子有10%的胚根開始露白時，即可進行播種。播種后每隔一天澆水一次，直到種子發(fā)芽出苗，之后常規(guī)管理。

1.2.2 接種

當接種有BT05菌株的培養(yǎng)基內長出孢子后，用紗布過濾孢子，置于血球計數(shù)板上測定孢子濃度，播種采用隨機區(qū)組設計，設3個重復和1個對照，每個重復3株。播種后待幼苗生長至15～20 cm時開始接種。之后用移液槍吸取淡黃色孢子粘稠液，用滅菌水配成孢子懸浮液，濃度為106個/mL，用小噴壺噴霧接種。接種后將黑色育苗袋移入鋁缽盤中并用一有機透明塑料袋罩住，在飽和濕度下放置48 h，在溫度25～28℃的條件下讓其自然感病。之后去掉罩子，再按接種前苗期管理程序管理，第8天觀察各處理的發(fā)病情況并根據(jù)分級標準確定每個重復的病級，計算病情指數(shù)。

1.2.3 病情指數(shù)級抗性評價標準

病情分級標準參考文獻[10]。

0級：無發(fā)病；1級：發(fā)病面積占株冠面積的10%以下；2級：發(fā)病面積占株冠面積的11%～30%；3級：發(fā)病面積占株冠面積的31%～50%；4級：發(fā)病面積占株冠面積的50%以上；根據(jù)病級計算病情指數(shù)。見圖1。

病情指數(shù)計算方法參考文獻[5]。

DI=∑（每個重復中各個病級株數(shù)×病級值）/（每個重復總株數(shù)×4）×100

免疫：病情指數(shù)0；抗病：0<病情指數(shù)≤10；中抗：10<病情指數(shù)≤20 中感：20<病情指數(shù)≤40；感?。翰∏橹笖?shù)>40[9]。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

用SAS9.0軟件的Duncan氏新復極差法（DMRT）進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 供試蘆筍種質的抗病性篩選

由表1可知，供試的26個蘆筍種質對莖枯病的抗病性存在顯著性差異。從結果中篩選出免疫種質2個，分別為野生型大理天門冬和B7/TX-4，病情指數(shù)均為0，抗病種質1個為TC山東；中抗種質6個，分別是井岡701、井岡全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6；中感種質為11個，分別為B1-a/SD、B2-a/Tx-6（H）、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井岡翠、H666、B2-a/TX、B1/TX-7、井岡全雄（1）、新世紀，病情指數(shù)在21～40；B7-a（F2）、紫色太平洋、冠軍、井岡紅、B23（05）-①/B2（H）、太平洋2000這6個種質為感病種質；由此表1還可得知，太平洋2000的病情等級最高，平均值達到了5，極顯著高于井岡701、TC山東、井岡全雄（2）、B3/TX-6、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/SD、B19-c（H），而與冠軍、B23（05）-①/B2（H）、紫色太平洋、井岡紅等種質的差異性不明顯。野生型大理天門冬和B7/TX-4病情等級最低，為0，極顯著低于太平洋2000、冠軍、井岡紅、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、紫色太平洋，顯著低于B7-a（F2）、B1/TX-7、新世紀，與其他種質差異不顯著。因此野生型大理天門冬、B7/TX-4、TC山東、井岡701四個種質的抗性可能是最強的，可以為生產上蘆筍種植時品種的選擇上提供依據(jù)。

3 討論

本實驗采用改進的苗期室內人工噴霧孢子的方法做抗病性鑒定實驗，與之前國外文獻Sonoda等所用的貼菌環(huán)繞莖一周的方法[5]相比較，省時、省工，還能較好且真實的反映出蘆筍苗期的抗病性，外界環(huán)境影響較小。該方法也為材料較多情況下的實驗提供了幫助?？共⌒灾笜瞬∏榉旨墭藴屎蛧馕墨I根據(jù)有無病斑、病斑大小、有無分生孢子器等方面制定的4級分級標準[5]相比較，本實驗按照楊迎青等制定的分級標準，試驗證明，該方法具有較高的可信度，能準確的反映出蘆筍莖枯病的發(fā)病狀況、發(fā)病等級，也證明了采用孢子人工接種噴霧法和病情嚴重度分級標準來考察蘆筍種質對莖枯病的抗病性差異是一種高效、快速又方便的鑒定方法。

采用該方法所得實驗結果表明：野生型大理天門冬和B7/TX-4的病情指數(shù)均為0，為高抗種質，這也符合野生型種質抗病性程度較高的特性。野生型大理天門冬是一個野生型種質，還沒有被引種進入大規(guī)模栽培種植，在自然條件下較抗外界惡劣環(huán)境，對各種病蟲害也有較好的抵抗能力。其次，井岡701、TC山東、井岡全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6等種質也相對較抗蘆筍莖枯病，這一結果和周倩[1]所描述的各個品種的抗莖枯病的強弱程度相一致?？剐宰畈畹姆N質為太平洋

2000和B23（05）-①/B2（H），病情指數(shù)分別為81.25和72.5。本實驗篩選到的蘆筍高抗種質可以為以后生產上選種育種提供參考。

參考文獻

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