耿 薇

（咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽712000）

蕎麥籽油的脂肪酸組成與含量分析*

耿 薇

（咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽712000）

通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）測定蕎麥籽油中的脂肪酸含量，用外標(biāo)法與峰面積歸一法進(jìn)行定量分析。蕎麥籽油脂肪酸種類豐富，以不飽和脂肪酸為主，其中單不飽和脂肪酸為45.10%，多不飽和脂肪酸為32.76%。蕎麥籽油中4種脂肪酸含量：油酸＞亞油酸＞棕櫚酸＞硬脂酸。

蕎麥籽油；脂肪酸；氣質(zhì)聯(lián)用；外標(biāo)法；峰面積歸一法

蕎麥，又名三角麥、花麥，屬蓼科、蕎麥屬雙子葉植物。我國蕎麥栽培歷史悠久，分布甚廣，常年栽培面積和總產(chǎn)量都位居世界前列。蕎麥有苦蕎、甜蕎、野蕎、翅蕎4種，我國常見的有甜蕎（普通蕎麥）和苦蕎（韃靼蕎麥）2個品種。蕎麥富含蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、黃酮類以及脂肪酸等多種對人體有益的生物活性成分，是一種極具研究開發(fā)價值的農(nóng)作物。脂肪酸是人體不可缺少的營養(yǎng)成分之一，與健康密切相關(guān)[1，2]。已有用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）的峰面積歸一法對蕎麥籽中的脂肪酸含量做了分析[3]，本文通過GC-MS的外標(biāo)法與峰面積歸一法兩種方法分別對蕎麥籽中的脂肪酸進(jìn)行定量分析。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

GCMS-QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津SHIMADZU制作所）；Sartorius CP124S電子天平（Max120g，d=0.1mg）；20～200μL移液器（Thermo Finnpipette）；10μL微量進(jìn)樣器（澳大利亞SGE）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海嘉鵬科技有限公司）；SHB-IIIA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省予華儀器有限公司）；SB4200DTD超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）；索氏提取器，標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩（40目，孔徑0.45mm）；HR7625飛利浦食品加工機(jī)。

蕎麥籽，硫酸，正己烷，乙醚，甲醇，KOH，硬脂酸，棕櫚酸，油酸，亞油酸。

所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2 分析條件

氣相色譜條件：J&W DB-WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為高純He，純度≥99.999%；柱溫：130～240℃。柱初溫130℃，保持1min，以20℃·min-1升溫至230℃，保持5min，再以20℃·min-1升溫至240℃，保持6.5min，共18.00 min。進(jìn)樣口溫度250℃；柱前壓84.6kPa，柱流量1.00 mL·min-1，分流比1∶30；用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣1.0μL。

質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度200℃，GC-MS接口溫度200℃，電子能量70eV，電子倍增器電壓0.97kV[3]，質(zhì)量掃描范圍29～450m·z-1，溶劑峰切除時間1.6min，質(zhì)譜檢測起測時間1.7min。

1.3蕎麥籽油的提取

將蕎麥籽烘干粉碎，過40目篩。稱取一定質(zhì)量的樣品，移入濾紙筒內(nèi)，用乙醚作溶劑，采用索式提取器，恒溫水浴30℃回流3h。倒出上清液，抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液蒸去乙醚后，得到蕎麥籽油樣品。

1.4 外標(biāo)法

1.4.1 脂肪酸的甲酯化準(zhǔn)確稱量脂肪酸或樣品于25mL比色管中，準(zhǔn)確加入1%H2SO4-甲醇溶液2.0mL，于70℃水浴加熱60min。再加正己烷定容至10mL，振蕩，加水至25mL，振蕩，靜置24h，吸取上層脂肪酸甲酯，待測[4]。

1.4.2 脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制選取常見的4種脂肪酸：棕櫚酸，硬脂酸，油酸，亞油酸。準(zhǔn)確稱量4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)系列（7份）于25mL比色管中，棕櫚酸0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mg；硬脂酸1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mg；油酸2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5mg；亞油酸1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg。按1.4.1配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，待測。

1.5 峰面積歸一法

樣品的甲酯化：準(zhǔn)確稱量蕎麥籽油于50mL圓底燒瓶中，準(zhǔn)確加入正己烷-乙醚（2∶1）溶液10.0mL，使溶解，再加0.5mol·L-1KOH-甲醇溶液6.0mL，振蕩，60℃恒溫水浴回流進(jìn)行酯化反應(yīng)20min。加水至25mL，振蕩并靜置，吸取上層脂肪酸甲酯，待測。

2 結(jié)果與討論

2.1 外標(biāo)法分析結(jié)果

2.1.14 種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1為4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS總離子流圖。繪制4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)。

圖1 4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS總離子流圖Fig.1 TIC of GC-MS of the four standard substance of fatty acids

2.1.2 樣品分析結(jié)果蕎麥籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖見圖2。

圖2 蕎麥籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖Fig.2 The TIC of GC-MS of fatty acids from the buckwheat seed

蕎麥籽中4種脂肪酸的含量見表1。

表1 蕎麥籽中4種脂肪酸的含量（mg·g-1）Tab.1 Content of four fatty acids from the buckwheat seed

2.2.3 回收率與精密度準(zhǔn)確稱取樣品（5份）30.0mg于25mL比色管中，分別加入棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品，按1.5.1配制溶液，做GC-MS分析。表2是樣品中4種脂肪酸含量的回收率與精密度。

表2 4種脂肪酸的回收率與精密度Tab.2 Recovery and precision of four fatty acids

2.2 峰面積歸一法分析結(jié)果

圖3為蕎麥籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖，對GC-MS譜圖進(jìn)行鑒定和定量分析,應(yīng)用SHIMADZU GCMSsolution Release 2.10專業(yè)分析軟件。

圖3 蕎麥籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖Fig.3 TIC of GC-MS of fatty acids from the buckwheat seed

表3 蕎麥籽中脂肪酸的組成Tab.3 The composition of fatty acids from the buckwheat seed

根據(jù)GC-MS檢測所得到的質(zhì)譜信息，用質(zhì)譜圖計算機(jī)檢索數(shù)據(jù)庫NIST147數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，通過與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照以及質(zhì)譜碎片對峰的分析，確定每一個組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)[2]。采用計算機(jī)檢索與人工解析各峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖，用峰面積歸一法測定了其相對含量，結(jié)果見表3。

2.3 討論

外標(biāo)法與峰面積歸一法分析蕎麥籽中的脂肪酸含量，外標(biāo)法是絕對定量，需要標(biāo)準(zhǔn)樣品，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確度較高，蕎麥籽中4種脂肪酸含量：油酸＞亞油酸＞棕櫚酸＞硬脂酸。峰面積歸一法是相對定量，計算蕎麥籽中各脂肪酸的相對含量，可以看出蕎麥籽脂肪酸種類豐富，以不飽和脂肪酸為主，蕎麥籽中單不飽和脂肪酸為45.10%，多不飽和脂肪酸為32.76%。

普及到常見的油脂而言，可以直接使用峰面積歸一法來檢測相對含量，較簡單易行。

［1］魏永生，鄭敏燕，耿薇，等.常用動、植物食用油中脂肪酸組成的分析［J］.食品科學(xué)，2012,33（16）：188-193.

［2］古元梓，楊杰，魏永生，等.三甲基硅酯化法分析蕎麥籽中的脂肪酸［J］.化學(xué)與生物工程，2011,28（10）：88-90.

［3］楊春英，劉學(xué)銘，陳智毅，等.15種食用植物油脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析［J］.食品科學(xué)，2013,34（6）：211-214.

［4］寇秀穎，于國萍.脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究［J］.食品研究與開發(fā)，2005,26（2）：46-47.

Analysis of fatty acid in buckwheat seed oil*

GENG Wei
（College of Chemistry and Chemical Engineering,Xianyang Normal University,Xianyang 712000，China）

This article analyzed the fatty acid in buckwheat seed oil by GC-MS，comparing external standard method and peak area normalisation method to analyze quantitatively.There are different kinds of fatty acid in buckwheat seed.The main kind is unsaturated fatty acid.The buckwheat seed had 45.10%unsaturated fatty acid and 32.76%polyunsaturated fatty acid.The content of the four fatty acids in buckwheat seed:oleic acid＞linoleic acid＞palmitic acid＞stearic acid.

Buckwheat seed oil；Fatty acid；GC-MS；External standard method；Peak area normalization method

O657.63

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20150429

2015-11-25

咸陽師范學(xué)院專項科研基金項目（14XSYK017）

耿薇（1982-），女（漢族），碩士，工程師，主要從事分析測試方面的研究工作。