胡占鋒，李淑全，嚴(yán) 鵬，徐瑞云，鄭紀(jì)寧△（.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；.承德市第三醫(yī)院）

Bmi-1和hTERT在結(jié)直癌組織中的表達(dá)和相關(guān)性

胡占鋒1，李淑全2，嚴(yán) 鵬1，徐瑞云1，鄭紀(jì)寧1△
（1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000；2.承德市第三醫(yī)院）

目的：探討B(tài)mi-1和hTERT在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Bmi-1蛋白和hTERT表達(dá)水平。結(jié)果：結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常黏膜（P ＜0.05）。Bmi-1、hTERT陽性表達(dá)與病理分期、浸潤(rùn)深度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與性別和分化程度無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。結(jié)論：Bmi-1和hTERT與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且二者在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。

結(jié)直腸癌；Bmi-1；hTERT；免疫組織化學(xué)染色

B細(xì)胞特異性莫洛尼鼠白血病毒插入位點(diǎn)1（Bmi-1）是一個(gè)轉(zhuǎn)錄抑制因子，隸屬PcG蛋白家族，在細(xì)胞增殖和多種腫瘤干細(xì)胞自我更新、分化調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用［1］。已有研究表明，Bmi-1在多種腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)［2-5］。hTERT是端粒酶活性亞單位，其表達(dá)與端粒酶活性一致，且是端粒酶的限速劑［6］。85%-90%的腫瘤細(xì)胞可以檢測(cè)到端粒酶活性，而與腫瘤相鄰的良性病變或正常組織僅有4%左右或幾乎沒有端粒酶活性。但目前Bmi-1和hTERT在結(jié)直腸癌中的作用及相關(guān)性尚無報(bào)道。本研究采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達(dá)，探討二者與結(jié)直腸癌生物學(xué)行為的關(guān)系，并分析二者的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 承德醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院2013年7月至2014年3月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的結(jié)直腸癌石蠟標(biāo)本68例（術(shù)前未行放、化療），且有完整的臨床病理資料。其中男43例，女25例；年齡45-82歲，平均62歲。68例中，中高分化27例，低分化41例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例；2010年TNM臨床分期Ⅰ-Ⅱ期28例，Ⅲ-Ⅳ期40例；癌組織浸潤(rùn)至黏膜層8例，浸潤(rùn)至肌層20例，浸潤(rùn)至漿膜層及以下40例。同時(shí)，收集手術(shù)切除的癌周正常腸黏膜（距癌組織＞8cm）標(biāo)本15例作為對(duì)照。

1.2 免疫組化染色 所有標(biāo)本連續(xù)4μm切片，采用免疫組化SABC法分別檢測(cè)Bmi-1蛋白和hTERT的表達(dá)，一抗均為兔抗，稀釋度1：100（一抗購(gòu)于武漢博士德生物科技有限公司），DAB顯色，蘇木素復(fù)染。以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 切片采用盲法由兩位病理醫(yī)師單獨(dú)閱片，采用雙積分半定量法量化［7］。隨機(jī)采集4個(gè)不同高倍（×400）視野，計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞數(shù)，根據(jù)陽性細(xì)胞率打分：1分，≤10%；2分，＞10%且≤50%；3分＞50%且≤75%；4分＞75%。同時(shí)，對(duì)染色程度進(jìn)行評(píng)分：1分，與背景色完全一致；2分，淡黃色；3分，棕黃色；4分，棕褐色。兩種計(jì)分結(jié)果相乘后判定結(jié)果：≤8為陰性，＞8為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資數(shù)行卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性分析行Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達(dá) Bmi-1蛋白和hTERT主要表達(dá)于癌細(xì)胞核，少部分細(xì)胞質(zhì)也有染色；Bmi-1陽性細(xì)胞內(nèi)可見棕黃色或棕褐色顆粒，hTERT陽性細(xì)胞均勻著色，呈棕黃色。結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常黏膜（P＜0.05）。見表1：

表1 結(jié)直腸組織和癌旁正常黏膜Bmi-1和hTERT的表達(dá)情況

2.2 Bmi-1和hTERT表達(dá)與結(jié)直癌生物學(xué)行為的關(guān)系

Bmi-1、hTERT陽性表達(dá)與TNM分期、浸潤(rùn)深度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與性別和分化程度無關(guān)（P＞0.05）。見表2：

表2 Bmi-1和hTERT表達(dá)與結(jié)直癌生物學(xué)行為的關(guān)系

2.3 結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達(dá)的相關(guān)性 結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（rs=0.503，P＜0.05）。見表3：

表3 結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

端粒在大多數(shù)正常細(xì)胞中隨著細(xì)胞周期縮短，當(dāng)縮短到一定長(zhǎng)度時(shí)染色體畸變，失去穩(wěn)定性，最終導(dǎo)致細(xì)胞衰亡。但在造血干細(xì)胞、生殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，端粒酶激活維持端粒長(zhǎng)度，從而使細(xì)胞獲得無限分裂和增殖能力。hTERT是端粒酶的主要催化亞單位，在正常細(xì)胞中其表達(dá)受到抑制。因此，hTERT高表達(dá)是端粒酶激活的標(biāo)志，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Bmi-1基因于1991年由荷蘭癌癥中心在鼠淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)，可通過抑制Ink4a位點(diǎn)、誘導(dǎo)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)、維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新等多種途徑促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展，也是腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的根源之一［8-10］。

本研究顯示，結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT蛋白表達(dá)的陽性率顯著高于癌旁正常黏膜，且二者陽性表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)。因此提示，Bmi-1和hTERT在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。相關(guān)分析顯示，結(jié)直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達(dá)在翻譯水平呈正相關(guān)。與Dimri等［9］的研究結(jié)果一致。

總之，Bmi-1和hTERT與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且二者在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。本研究推測(cè)，聯(lián)合檢測(cè)Bmi-1和hTERT可能有助于結(jié)直腸癌的診斷，以及為結(jié)直腸癌的臨床治療提供新策略。

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EXPRESSIONS AND CORRELATIONS OF BMI-1 AND HTERT IN COLORECTAL CARCINOMA

HU Zhan-feng， LI Shu-quan， YAN Peng， et al

（Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To investigate the actions of Bmi-1 and hTERT in development of colorectal carcinoma. Methods： Immunohistochemical stain was used to detect the expression of Bmi-1 and hTERT. Results：The positive expression rate of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were obviously higher than that in para-carcinoma normal mucosa （P＜0.05）. The positive expression of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were associated with pathological stage， infi ltration depth and lymph node metastasis （P＜0.05）； but not associated with age and differentiated degree （P ＜0.05）. In colorectal carcinoma， the expression of Bmi-1 was positively related to hTERT （P＜0.05）.Conclusions：Bmi-1 and hTERT are closely related to development of colorectal carcinoma； Moreover， they also have synergistic effects in development of colorectal carcinoma.

Colorectal carcinoma； Bmi-1； hTERT； Immunohistochemical stain

R735.3

A

1004-6879（2015）02-0093-03

2014-08-29）