吳英娟

（天津市第四中心醫(yī)院，天津 300140）

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一，病理過程與腫瘤的增殖、侵襲性相關(guān)，針對腫瘤的增殖和侵襲性進(jìn)行的基因治療非常有意義［1］，但目前有效的治療基因尚不清楚。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）是細(xì)胞中的一種核蛋白，與細(xì)胞的增殖狀態(tài)密切相關(guān)，可作為反映腫瘤細(xì)胞增殖程度與判斷預(yù)后的指標(biāo)［2］。高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）屬于高遷移率族蛋白家族，是一種非組蛋白染色體蛋白，主要在胚胎發(fā)育早期表達(dá)，而在高度分化的組織中幾乎不表達(dá)。HMGB-1被證實(shí)與多種腫瘤的惡性程度、侵襲性和預(yù)后相關(guān)［3］。本研究觀察了宮頸癌組織中HMGB-1、PCNA的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年5月 ～2014年6月天津市第四中心醫(yī)院收治的宮頸癌患者70例，年齡22～74（42.6±13.2）歲;所有患者均經(jīng)病理證實(shí)，且術(shù)前均未進(jìn)行放化療及其他針對腫瘤的治療。病理類型:局限型34例，浸潤型36例;分化程度:低分化37例，高中分化33例;浸潤深度:T1+T2 14例，T3+T4 56例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例;按FIGO分類標(biāo)準(zhǔn)［4］，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期28例，Ⅲ+Ⅳ期42例。手術(shù)留取70例份宮頸癌組織（宮頸癌組）、70例份宮頸癌癌旁組織（癌旁組），另取正常宮頸組織20例份（正常組）。

1.2 組織HMGB-1、PCNA檢測 采用免疫組化法。收集石蠟包埋的組織標(biāo)本，切片（厚4～5 μm），通過10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）高壓加熱法對宮頸癌組織以及正常宮頸組織切片進(jìn)行抗原修復(fù)，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。經(jīng)10%山羊血清封閉1 h，滴加一抗（兔抗人PCNA單克隆抗體與兔抗人 HMGB-1單克隆抗體，稀釋濃度均為1∶20），置入4℃孵箱過夜，與辣根酶標(biāo)記的二抗反應(yīng)（北京中杉橋生物公司），DAB顯色，蘇木精復(fù)染胞核，脫水，封片，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照。PBS代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標(biāo)本陽性對照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):HMGB-1陽性染色信號呈棕色細(xì)小顆粒，均位于細(xì)胞質(zhì)。PCNA蛋白分布于細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色乃至棕褐色顆粒。每一張切片選取連續(xù)的10個(gè)高倍視野（400×），每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，分別統(tǒng)計(jì)其中的所有陽性細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HMGB-1、PCNA陽性率比較 宮頸癌組、癌旁組、正常組HMGB-1陽性率分別為95.7%（67/70）、22.9%（16/70）、5.0%（1/20），兩兩比較，P均＜0.05;PCNA 陽性率分別為 90.0%（63/70）、65.0%（45/70）、45.0%（9/20），兩兩比較，P均 ＜0.05。

2.2 HMGB-1、PCNA表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見表1。由表1可知，HMGB-1表達(dá)與宮頸癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，PCNA表達(dá)與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（P均＜0.05）。

表1 HMGB-1、PCNA表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 宮頸癌組織中PCNA、HMGB-1表達(dá)的相關(guān)性宮頸癌組織中PCNA與HMGB-1表達(dá)呈正相關(guān)（r=6.82，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌嚴(yán)重威脅婦女健康，是僅次于乳腺癌的常見惡性腫瘤，其具有惡性程度高、病死率高的特點(diǎn)。近幾年雖然有報(bào)道宮頸癌發(fā)病率和病死率均有顯著降低的情況，但是出現(xiàn)了年輕化趨勢，35歲以下婦女患有宮頸癌的比率顯著上升，因而宮頸癌的早期診斷以及早期治療對于這些患者來說非常重要［5］。探索與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子生物因素及預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移與浸潤的潛在風(fēng)險(xiǎn)是當(dāng)今這個(gè)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。目前認(rèn)為，惡性腫瘤的典型特征為腫瘤侵襲性及轉(zhuǎn)移，一些細(xì)胞調(diào)節(jié)因子及生物活性介質(zhì)在其中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。大量臨床試驗(yàn)表明，高表達(dá)侵襲性生物因子的患者預(yù)后較差。因此，尋找一個(gè)宮頸癌新的基因治療作用靶點(diǎn)顯得尤為重要。

PCNA是一種S期細(xì)胞核內(nèi)大量表達(dá)的核蛋白之一，在 DNA的合成調(diào)控中發(fā)揮至關(guān)重要的作用［6］。PCNA水平在DNA合成周期的改變與細(xì)胞增殖過程一致，是一種衡量腫瘤惡性程度與增殖能力的可靠指標(biāo)。有研究［7，8］證實(shí)，PCNA 參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而細(xì)胞無限增殖被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生機(jī)制之一，腫瘤細(xì)胞的增殖活性與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)［9］。因此，檢測腫瘤組織中PCNA水平有助于預(yù)后判斷。有研究［10，11］表明，正常胃黏膜組織中PCNA不表達(dá)，而胃癌組織中PCNA高表達(dá)，分化程度越低，水平越高。已有學(xué)者利用免疫組化法檢測PCNA在腦膠質(zhì)瘤、肺癌、宮頸癌、乳腺癌等組織中的表達(dá)及其與臨床病理分級的關(guān)系，并對患者預(yù)后進(jìn)行判斷;但宮頸癌組織中PCNA的表達(dá)與臨床分期、病理分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系尚不清楚。本研究顯示，宮頸癌組PCNA陽性率高于癌旁組及正常組，且PCNA表達(dá)與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，這表明PCNA隨著腫瘤病理級別的增高，陽性率明顯升高，其表達(dá)隨腫瘤分級呈遞增趨勢。上述結(jié)果與王暉等［12］和辛海等［13］的結(jié)論一致。

HMGB-1是30年前發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，主要存在于真核細(xì)胞內(nèi)，在結(jié)構(gòu)上高度保守的單鏈多肽，約有215個(gè)氨基酸殘基，其在DNA重組、復(fù)制、修復(fù)和基因轉(zhuǎn)錄的過程中起重要作用［14］。關(guān)于HMGB-1在腫瘤中的作用報(bào)道逐漸增多，隨著深入研究，其在缺血再灌注損傷、自身免疫性疾病、休克中的不同作用也被探索。有研究［15］表明，HMGB-1參與了腫瘤的增殖、生長、浸潤與轉(zhuǎn)移，但關(guān)于它的研究尚處于探索階段，有待進(jìn)一步研究。HMGB-1還與胰腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等腫瘤的臨床分期和不同預(yù)后的結(jié)局有相關(guān)性［16，17］。近年大量研究［18～21］證實(shí)，HMGB-1 與胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌的侵襲和淋巴、血液轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。HMGB-1在多種腫瘤和未成熟細(xì)胞中表達(dá)，趨化作用可被其誘導(dǎo)產(chǎn)生，參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。但是關(guān)于HMGB-1與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系以及具體的作用體制目前尚不明確。本研究顯示，宮頸癌組HMGB-1陽性率高于癌旁組及正常組，且與宮頸癌腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)。目前，對于HMGB-1促進(jìn)腫瘤發(fā)展的機(jī)制尚不清楚，我們認(rèn)為可能與HMGB-1通過 Ras、MAPK途徑，促使 MAPKs磷酸化，進(jìn)而激活核轉(zhuǎn)錄因子 κB（NF-κB），而 NF-κB 是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，存在于真核細(xì)胞中，其與基因上啟動子區(qū)的固定核苷酸序列結(jié)合啟動基因轉(zhuǎn)錄，從而完成細(xì)胞增殖與分化、腫瘤形成與轉(zhuǎn)移等一系列重要生物學(xué)功能［22］。

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