董昕欣，劉 偉，邴國霞，張劭俁，李文京，

王傳彬1，張 倩1，吳佳俊1，李雁冰2，郭建宏3

（1.中國動物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽 100125；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，

黑龍江 哈爾濱 150001；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州 730046）

2015年全國省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析

董昕欣1，劉 偉1，邴國霞1，張劭俁1，李文京1，

王傳彬1，張 倩1，吳佳俊1，李雁冰2，郭建宏3

（1.中國動物疫病預(yù)防控制中心，北京 朝陽 100125；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，

黑龍江 哈爾濱 150001；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州 730046）

獸醫(yī)實驗室作為動物疫病防控的重要技術(shù)支撐機構(gòu)，不管是獸醫(yī)科學(xué)研究、獸醫(yī)藥品研制、還是動物疫病檢測診斷，都離不開實驗室的工作。而實驗室檢測能力和水平則是實驗室的核心，是動物疫病防控提供技術(shù)支撐的固基之本，源之所在。實驗室間能力比對作為一項評價實驗室工作能力的方法一直在全世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用，我國的衛(wèi)生系統(tǒng)、質(zhì)檢系統(tǒng)也將此方法作為評價、管理、提高實驗室檢測水平的手段[1]。2010年以前，獸醫(yī)系統(tǒng)一直沒有系統(tǒng)的實驗室檢測能力比對方法，各級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室只能參加外系統(tǒng)、外部門的能力對比來評價本實驗室的工作能力。2010年農(nóng)業(yè)部印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核工作實施方案》[2]，明確要求每年組織一次實驗室比對試驗，為評價各級獸醫(yī)實驗室檢測水平、提升各級獸醫(yī)實驗室工作能力提供了新的手段。

按農(nóng)業(yè)部要求，中國動物疫病預(yù)防控制中心組織實施了2015年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力比對，全國32個省級獸醫(yī)實驗室全部參加，在規(guī)定時間內(nèi)完成了比對樣品制備、分發(fā)、檢測和結(jié)果回收。比對結(jié)果客觀反映了實驗室的檢測能力和技術(shù)水平，對該結(jié)果進行分析討論有利于進一步做好獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理工作。

1 比對計劃

本次比對依據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和中國動物疫病預(yù)防控制中心有關(guān)2015年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對的文件[3-4]要求，共設(shè)置4個比對項目，分別是H7N9亞型禽流感病毒（H7N9-AIV）檢測、口蹄疫抗體（FMD Ab）檢測、豬偽狂犬病gE抗體（PR gE-Ab）檢測、J亞型禽白血病抗體（J-AL Ab）檢測。全國共有32個省級獸醫(yī)實驗室（含新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團）參加此次比對。

2 比對方法

2.1 試驗方法與標(biāo)準(zhǔn) 針對4個檢測能力比對項目，采用國家獸醫(yī)參考實驗室或?qū)I(yè)實驗室推薦的方法和試劑，其中部分試劑由參加比對的省級實驗室自行準(zhǔn)備，見表1。

表1 比對試驗的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

2.2 比對樣品制備

2.2.1 制備方式 各個國家獸醫(yī)參考實驗室和專業(yè)實驗室分別完成相應(yīng)樣品的制備、標(biāo)定、分裝和編號，并將樣品和標(biāo)定值送交中國動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一保存，作為盲樣下發(fā)使用。

2.2.2 H7N9-AIV樣品 尿囊液提取物樣品6份，參考值分別為強陽性、弱陽性、強陽性、陰性、陰性、陰性。

2.2.3 FMD Ab樣品 免疫牛血清樣品6份，參考值分別為720、720、180、180、＜8、＜8。

2.2.4 PR gE-Ab樣品 豬血清樣品6份，參考值分別為強陽性、強陽性、弱陽性、弱陽性、陰性、陰性。

2.2.5 J-AL Ab樣品 雞血清樣品6份，參考值分

別為弱陽性、弱陽性、強陽性、強陽性、陰性、陰性。

2.3 比對樣品傳遞 比對樣品為具有生物學(xué)活性的血清、尿囊液，為保持其良好的生物學(xué)活性，樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存，由參加比對的省級實驗室派專人在規(guī)定的時間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取，并在12 h之內(nèi)送達參加比對的實驗室。

2.4 評判標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 H7N9-AIV檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 強陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.2 FMD Ab檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 與參考值的偏差不超過一個滴度，判為結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4.3 PR gE-Ab檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 強陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.4.4 J-AL Ab檢測評判標(biāo)準(zhǔn) 強陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

3 比對結(jié)果

3.1 總體結(jié)果 根據(jù)比對結(jié)果評判標(biāo)準(zhǔn)，32個參加省級實驗室的所有項目的檢測結(jié)果全部準(zhǔn)確，具體見表2。

表2 32個實驗室比對結(jié)果統(tǒng)計

3.2 H7N9-AIV檢測比對結(jié)果 32個實驗室對H7N9-AIV弱強陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確，見表3。

表3 各實驗室H7N9-AIV檢測結(jié)果頻次與參考值對照

3.3 FMD Ab檢測比對結(jié)果 32個實驗室的檢測結(jié)果全部正確。對于參考值相同的雙份重復(fù)樣品的檢測，大部分實驗室（30/32）檢測結(jié)果自身重復(fù)性較好，說明絕大部分實驗室的隨機誤差較??；而第1號、第17號兩個實驗室對于參考值相同的兩份樣品檢測值不一致，反映出這兩個實驗室在質(zhì)控體系方面存在問題。具體結(jié)果見圖1。

圖1 各實驗室FMD Ab檢測值離散

3.4 PR gE-Ab檢測比對結(jié)果 32個實驗室對PR gE-Ab弱強陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確。見表4。

表4 各實驗室PR gE-Ab檢測結(jié)果頻次與參考值對照

3.5 J-AL Ab檢測比對結(jié)果 32個實驗室對JAL Ab弱強陽性和陰性樣品的檢測結(jié)果全部正確，見表5。

表5 各實驗室J-ALAb檢測結(jié)果頻次與參考值對照

4 討論

從比對結(jié)果來看，參加能力比對的32個省級獸醫(yī)實驗室4個比對項目的樣品檢測結(jié)果全部準(zhǔn)確，準(zhǔn)確率均為100%。這說明持續(xù)5年開展的檢測能力比對工作起到了發(fā)現(xiàn)問題、促進質(zhì)量體系改進的作用。

4.1 本次實驗室檢測能力比對中設(shè)置了平行樣品，用以評估實驗室檢測體系的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，大部分實驗室的檢測結(jié)果平行性好，但在口蹄疫抗體檢測比對結(jié)果中，有兩個省級獸醫(yī)實驗室對參考值相同的兩份樣品檢測結(jié)果不一致，甚至出現(xiàn)較大差異。這說明，檢測過程存在較多的隨機性誤差，檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性較差。

4.2 本次設(shè)置的H7N9亞型禽流感病毒檢測項目，要求采用熒光RT-PCR方法，但仍有1個省份未能用熒光RT-PCR方法完成檢測，原因是實驗室未配置熒光PCR儀。就目前省級實驗室的工

作內(nèi)容來看，熒光PCR儀應(yīng)該是完成監(jiān)測任務(wù)的基本儀器，熒光PCR技術(shù)也是省級獸醫(yī)實驗室應(yīng)具備的基本能力，這說明該省份的實驗室基礎(chǔ)儀器設(shè)備配備不足。

4.3 本次比對項目的設(shè)計緊密結(jié)合了我國動物疫病防控的要求?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》[5]中明確要求：到2020年，全國種禽場達到禽白血病的凈化標(biāo)準(zhǔn)；種畜場達到偽狂犬病的凈化標(biāo)準(zhǔn)。目前各地開展凈化工作的病種也主要是禽白血病和偽狂犬病，通過開展檢測能力比對驗證了各省禽白血病和偽狂犬病的檢測能力，為凈化工作的順利實施奠定了良好的基礎(chǔ)。今后比對項目的選擇應(yīng)繼續(xù)以《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》為依據(jù)，擴大獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目范圍，逐步覆蓋所有優(yōu)先防治的動物疫病病種。

4.4 部分省份在近幾年比對工作均出現(xiàn)偏差，表明這些省份的實驗室在檢測技術(shù)能力方面存在問題，有針對性的培訓(xùn)能起到良好的矯正作用。以西藏為例，該省級獸醫(yī)實驗室在2011-2014年的能力比對中均出現(xiàn)了錯誤，因此在2014年、2015年連續(xù)兩個年度安排檢測技術(shù)專家前往西藏進行檢測項目的針對性培訓(xùn)，該實驗室在2014年的能力比對只有一個樣品檢測有偏差[6]，2015年4個比對項目全部準(zhǔn)確。這說明對于連續(xù)出現(xiàn)偏差的實驗室，需要引起足夠的重視，應(yīng)針對實驗室操作或管理采取有效措施，增加實驗室檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。

[1]劉來福，張鶴曉，張利峰，等.家禽禽流感病毒AGID抗體定性檢測及H5、H9亞型HI抗體定量檢測能力驗證結(jié)果分析[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理，2004（2）：29-32.

[2]農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》的通知[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)[2009]15號.北京：農(nóng)業(yè)部，2009-08-11.

[3]農(nóng)業(yè)部辦公廳.農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于開展2015年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知[Z].農(nóng)辦醫(yī)[2015]7號.北京：農(nóng)業(yè)部辦公廳，2015-03-02.

[4]中國動物疫病預(yù)防控制中心.關(guān)于印發(fā)《2015年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對實施方案》的通知[Z].疫控（安）[2015]24號.北京:中國動物疫病預(yù)防控制中心，2014-03-06.

[5]國務(wù)院辦公廳.國務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）的通知[Z].國辦發(fā)[2012]31號.北京：國務(wù)院辦公廳，2012-05-20.

[6]董昕欣，劉偉，邴國霞，等.2014年全國省級獸醫(yī)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析[J].中國獸醫(yī)雜志，2014，50（10）：101-102.

2015-09-28

農(nóng)業(yè)部動物疫情監(jiān)測與防治經(jīng)費