戴樹龍(綜述)，楊坤興(審校)

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院普外科，南京210006)

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熱激蛋白抑制劑與腫瘤的研究進(jìn)展

戴樹龍△(綜述)，楊坤興※(審校)

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院普外科，南京210006)

摘要：熱激蛋白(HSP)在協(xié)助人類細(xì)胞正確折疊、激活以及裝配方面起關(guān)鍵作用，并影響腫瘤細(xì)胞增殖、分化、浸潤、血管生成、轉(zhuǎn)移和細(xì)胞凋亡。同時(shí)，其還能促使腫瘤細(xì)胞刺激免疫系統(tǒng)并產(chǎn)生免疫應(yīng)答，HSP作為新的腫瘤靶向治療位點(diǎn)已經(jīng)進(jìn)入臨床應(yīng)用。最新的研究表明，格爾德霉素類似物以及其他新型小分子HSP抑制劑能抑制與腫瘤相關(guān)的HSP伴侶蛋白的活性，從而發(fā)揮抗腫瘤作用，但仍需進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)對其進(jìn)行評估。該文就HSP抑制劑在抗腫瘤方面的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：熱激蛋白抑制劑；熱激蛋白；腫瘤

熱激蛋白(Heat shock protein,HSP)家族作為分子伴侶在細(xì)胞應(yīng)激狀態(tài)下起重要作用。1962年人們第一次在熱休克、理化刺激下發(fā)現(xiàn)了1組高度保守的蛋白質(zhì)，命名為HSP[1]。HSPs根據(jù)其相對分子質(zhì)量大小，主要被分為4個(gè)家族：HSP90家族、HSP70家族、HSP60家族以及包括HSP27在內(nèi)的小分子HSP[2]。每個(gè)HSPs家族的成員均有不同的功能，但其在細(xì)胞生命活動(dòng)中常常協(xié)同發(fā)揮作用[3]。HSP抑制劑的發(fā)現(xiàn)在腫瘤的治療上是一個(gè)重要的突破。人們已經(jīng)開始漸漸熟悉HSP90抑制劑在細(xì)胞內(nèi)外的重要作用，并將其應(yīng)用到臨床患者的治療中。洪樹坤等[1]已就HSP與胰腺癌之間的關(guān)系進(jìn)行了綜述，現(xiàn)主要探討HSP抑制劑與腫瘤的研究進(jìn)展。

1HSP的功能

1.1細(xì)胞內(nèi)功能HSP細(xì)胞內(nèi)主要功能之一就是作為“分子伴侶”，與細(xì)胞內(nèi)的不同功能蛋白形成復(fù)合體從而參與有關(guān)蛋白的折疊、裝配、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸及蛋白質(zhì)降解的過程，并在應(yīng)激狀態(tài)下維持細(xì)胞的穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用(如促進(jìn)許多蛋白激酶構(gòu)象的成熟)[2]。HSP被抑制后會(huì)導(dǎo)致很多蛋白激酶穩(wěn)定構(gòu)象的改變，進(jìn)而被蛋白酶水解；HSPs能保護(hù)新生的蛋白質(zhì)防止其在熱休克條件下發(fā)生退化以及聚集，并能維持蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定[4]。HSP的表達(dá)主要受熱休克因子(heat shock factor,HSF)的調(diào)節(jié)，HSF家族包括在熱休克應(yīng)答下起到分子協(xié)調(diào)作用的HSF1、HSF2和HSF4；生理狀態(tài)下HSP與HSF1結(jié)合，HSF1以單體形式存在而不能發(fā)揮作用；在應(yīng)激狀態(tài)下HSF1從HSP復(fù)合物內(nèi)釋放出來并促進(jìn)HSPs的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而導(dǎo)致HSPs大量表達(dá)[5]。

1.2細(xì)胞外功能除了在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)外,HSP也存在于細(xì)胞外以及血漿中。HSP的釋放可能作為一種危險(xiǎn)信號刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，HSPs與腫瘤細(xì)胞內(nèi)的肽鏈結(jié)合形成復(fù)合物，并通過與特殊細(xì)胞表面受體或者細(xì)胞通路樣受體結(jié)合進(jìn)入抗原遞呈細(xì)胞，并將其遞呈給主要組織相容性復(fù)合物類分子，經(jīng)抗原識別再將信息傳遞給細(xì)胞毒性T細(xì)胞，激活細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)[6]。HSP的另外一個(gè)功能就是其能刺激自然殺傷細(xì)胞的高表達(dá)，通過影響腫瘤壞死因子的形成過程，自然殺傷細(xì)胞在先天性免疫系統(tǒng)以及獲得性免疫活動(dòng)中均起重要作用[7]。

2HSP90和腫瘤

正常情況下，HSP90占正常細(xì)胞質(zhì)蛋白含量的1%~2%,在應(yīng)激狀態(tài)下其表達(dá)量會(huì)增高[7]。HSP90的主要作用就是維持與細(xì)胞生長相關(guān)的受體、蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，同時(shí)其對維持生長因子介導(dǎo)的信號蛋白的表達(dá)具有重要作用[6]。HSP90還能維持癌基因,突變的抑癌基因(p53等)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定[7]。此外，HSP還能通過多種機(jī)制抑制細(xì)胞的凋亡，據(jù)報(bào)道HSP90能抑制凋亡蛋白酶激活因子的寡聚化進(jìn)而延緩細(xì)胞的凋亡[8]。因此，HSP90在腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展過程中起重要作用。另外，HSP90與胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、白血病等多種惡性腫瘤的發(fā)展均有密切的聯(lián)系。胡鶴本等[9]在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中HSP90的表達(dá)明顯高于正常組織及癌旁組織，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤分化程度有明顯的相關(guān)性；朱勤等[10]同樣發(fā)現(xiàn)，HSP90在結(jié)腸癌組織的表達(dá)明顯高于正常組織。研究還發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織中HSP90信使RNA的表達(dá)明顯增高[11]。分化程度低的癌組織中HSP90的表達(dá)明顯高于分化程度高的癌組織，胰腺癌組織中HSP90的表達(dá)還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性[12]。

3HSP90抑制劑的應(yīng)用進(jìn)展

起初，HSP作為分子伴侶而不是催化劑，并沒有引起科研工作者們的注意,但后來人們成功靶向定位了HSP90的腺苷三磷酸酶區(qū)域，繼而研究出一系列HSP90抑制劑[13]。有人擔(dān)心HSP抑制劑在抗腫瘤的同時(shí)會(huì)危害到人體的正常組織，但后來大量研究發(fā)現(xiàn)，HSP抑制劑能有選擇性地抑制腫瘤組織；其實(shí)HSP抑制劑不僅不會(huì)抑制人體正常的細(xì)胞，反而對正常組織細(xì)胞還具有保護(hù)作用[14]。很多年以前，人們發(fā)現(xiàn)了格爾德霉素并將與HSP90綁定后發(fā)現(xiàn)其明顯抑制HSP90伴侶蛋白的表達(dá)，這為抗腫瘤治療開辟了一條新的思路[13]。

3.1格爾德霉素及其衍生物格爾德霉素是一類能競爭性與HSP90 N端腺苷三磷酸結(jié)合的苯醌袢霉素，這樣就抑制了HSP90伴侶蛋白的活性，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的壞死和凋亡；但是因?yàn)槠漭^高的肝臟毒性以及水溶性差兩個(gè)特性限制了其在臨床上的應(yīng)用[14]。因此人們開始研究格爾德霉素的合成或者半合成衍生物。17-丙烯胺基-17-去甲氧基格爾德霉素(17-Allylamino-17-demethoxygeldamycin,17-AAG)是格爾德霉素的一種衍生物，其結(jié)構(gòu)與格爾德霉素基本相似，抗癌效果更強(qiáng)，并且因?yàn)楦味拘孕?、水溶性好，因此首先進(jìn)入了臨床的應(yīng)用，在實(shí)體腫瘤以及白血病的臨床治療中均有著不錯(cuò)的效果[15]。García Martínez等[16]發(fā)現(xiàn)，將17-AAG與5-氨基-4-甲酰胺核糖核苷聯(lián)用后對頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用，在此過程中p53沒有發(fā)生明顯的改變。Guo等[17]將17-AAG與葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75(HSP70家族中的一員)抑制劑聯(lián)用后發(fā)現(xiàn)，通過促進(jìn)p53與葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75復(fù)合體的解離，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中的p53水平明顯增加，進(jìn)而發(fā)揮強(qiáng)大的促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的效果，提示可以考慮聯(lián)合使用不同的HSPs抑制劑以發(fā)揮更強(qiáng)的抗腫瘤效果。17-二甲氧基-格爾德霉素(17-dimethylaminothylamino,17-demethoxygeldanamycin,17-DAMG)是另一個(gè)水溶性更強(qiáng)的格爾德霉素衍生物，F(xiàn)ukumoto和Kiang[18]發(fā)現(xiàn)，17-DAMG能維持細(xì)胞內(nèi)p53的磷酸化及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，從而發(fā)揮抗腫瘤效果，并能顯著抑制動(dòng)物瘤體的生長。

3.2人工合成及其他HSP90抑制劑由于格爾德霉素及其衍生物的生物學(xué)穩(wěn)定性差、肝毒性強(qiáng)，因此亟需研制出人工合成的HSP90抑制劑及其他HSP抑制劑。YU等[19]發(fā)現(xiàn)，HSP90抑制劑醉茄素A等抑制多種胰腺癌細(xì)胞株的增殖；Gu等[20]在研究醉茄素A的抗腫瘤結(jié)構(gòu)關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，環(huán)氧基C-5(6)結(jié)構(gòu)促進(jìn)醉茄素A與HSP90結(jié)合并導(dǎo)致其伴侶蛋白的破壞，羥基C-4結(jié)構(gòu)有抑制HSP90的活性以及破壞HSP90-Cdc交互作用的效果。Nagaraju等[21]利用新合成的姜黃素類似物抑制了HSP90和核因子κB的活性導(dǎo)致DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1的下調(diào)而對胰腺癌發(fā)揮抗腫瘤效果，其療效明顯超過姜黃素。Milanovic等[22]發(fā)現(xiàn)了一種新型合成的非袢霉素類HSP90抑制劑NVP-HSP990[(R)-2-氨基-7-[4-氟-2-(6-甲氧基吡啶-2-基)苯基]-4-甲基-7,8-二氫-6H-吡啶并[4,3-D]嘧啶-5-酮],其能通過抑制HSP90的伴侶蛋白(表皮生長因子、磷脂酰肌醇3-激酶、B細(xì)胞抗原受體)等的表達(dá)從而發(fā)揮抗腫瘤作用。Moser等[23]發(fā)現(xiàn)了另一種新的HSP90抑制劑NVP-AUY922[5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-[4-(4-嗎啉基甲基)苯基]-3-異惡唑甲酰胺]，能明顯抑制腫瘤的生長及血管形成。Zitzmann等[24]后來發(fā)現(xiàn)，AUY922可通過減少細(xì)胞生長因子和胰島素樣生長因子受體的表達(dá)，并抑制細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶及磷脂酰肌醇3-激酶的磷酸化進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；體外抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，很小劑量就能顯著抑制胰腺癌、肺癌及腸癌細(xì)胞的生長。

3.3HSP90抑制劑與聯(lián)合放化療治療HSP90抑制劑能特異性地與HSP90結(jié)合，抑制其分子伴侶功能并導(dǎo)致被陪伴分子的去穩(wěn)定和降解[13]。一方面，參與細(xì)胞增殖和生存的許多信號(如胰島素樣生長因子1受體、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，癌基因和抑癌基因蛋白、嵌合信號蛋白、甾體激素受體、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子)的穩(wěn)定性(或功能)均因HSP90的功能被抑制而受到影響；另一方面，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶等通路可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對放化療的敏感性,因此HSP90抑制劑聯(lián)合放化療成為了一個(gè)新的研究方向[14]。放療是中晚期惡性腫瘤患者的一個(gè)重要的輔助治療，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NVP-HSP990能顯著提高胰腺癌細(xì)胞株MIAPaca-2以及惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251對放療以及熱療的敏感性[22]。Noguchi等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在X線放療前24 h給予17-AAG能顯著抑制肺癌細(xì)胞株的生長，并能顯著抑制荷瘤裸鼠瘤體的生長，這可能主要是通過抑制DNA斷裂雙鏈修復(fù)系統(tǒng)；后來發(fā)現(xiàn)，在碳粒子放療前給予17-AAG同樣能顯著增強(qiáng)其放療效果[26]?；熓侵型砥趷盒阅[瘤患者的又一個(gè)重要輔助治療方法，但是腫瘤細(xì)胞株對化療藥物的耐藥問題一直困擾著臨床工作者們，Ui等[27]發(fā)現(xiàn)，將17-AAG與順鉑聯(lián)用后通過調(diào)節(jié)蛋白激酶B/X連鎖凋亡抑制蛋白通路對胃腸道腫瘤耐化療細(xì)胞株有很強(qiáng)的抑制作用，這個(gè)作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過單用17-AAG或者順鉑。Mackenzie等[28]發(fā)現(xiàn)，2-丙基戊酸通過阻礙HSP90與線粒體的結(jié)合對大鼠胰腺癌的生長抑制率高達(dá)60%~97%，而與吉西他濱聯(lián)用后腫瘤抑制率可達(dá)100%。Taba等[29]研究發(fā)現(xiàn)，抑制HSP27的表達(dá)能顯著增強(qiáng)吉西他濱對胰腺癌的化療效果。Giessrigl等[30]利用格爾德霉素拮抗HSP90，從而減弱了胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱的耐藥作用。

4小結(jié)

袢霉素家族是最先發(fā)現(xiàn)的HSP90抑制劑，其能通過與HSP90腺苷三磷酸酶的結(jié)合從而顯著限制HSP90的分子伴侶作用，而其衍生物17-AAG具有更好的生物學(xué)活性，并且毒性較低，但是肝功能損害以及胃腸道反應(yīng)的問題仍有待解決。近年來，人們發(fā)現(xiàn)新型小分子HSP抑制劑NVP-AUY922及NVP-HSP990等不良反應(yīng)少、抗癌效果更加明顯。同時(shí)，HSP90抑制劑與放化療的聯(lián)合應(yīng)用以及HSP90抑制劑與其他HSP抑制劑的聯(lián)用的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了單一用藥，提示腫瘤患者的治療應(yīng)是一個(gè)綜合治療。

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Research Progress on the Relationship between Heat Shock Protein Inhibitors and CancerDAIShu-long,YANGKun-xing.(DepartmentofGeneralSurgey,NanjingHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Nanjing210006,China)

Abstract:Heat shock proteins(HSP) play an essential role in assisting correct folding,activation and assembling of human cells,and affect the proliferation,differentiation,infiltration of tumor cells,angiogenesis,metastasis and apoptosis.They also have the ability to stimulate the immune system and produce an immune response.HSP,as the new targeted sites of anticancer treatment,are under clinical evaluation.The latest evidence indicates application of geldanamycin analogues or new synthetics small molecule HSP inhibitors can inhibit the activity of HSP chaperones associated with tumor so as to develop antitumor effect,which needs to be evaluated by further clinical trials.Here is to make a review of application of HSP inhibitors in antitumor therapy.

Key words:Heat shock protein inhibitors； Heat shock proteins； Cancer

收稿日期：2014-06-27修回日期：2014-09-05編輯：鄭雪

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.09.024

中圖分類號:R730.58文獻(xiàn)標(biāo)識號：A

文章編號：1006-2084(2015)09-1599-03