呂轉(zhuǎn)平剡根強(qiáng)（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 新疆 庫爾勒）

新疆庫爾勒豬源鏈球菌分離培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)

呂轉(zhuǎn)平①②剡根強(qiáng)①（①石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 新疆 石河子 832003 ②巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 新疆 庫爾勒）

本試驗(yàn)利用常規(guī)的紙片法將20株臨床分離的鏈球菌菌株對11種日常藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，日常所使用的藥品中存在很多類對豬鏈球菌病的作用不明顯，豬鏈球菌菌株對其具有很強(qiáng)的抗性。試驗(yàn)中所分離的菌株對恩諾沙星、青霉素鉀以及慶大霉素都存在超強(qiáng)的抗藥性，耐藥率已經(jīng)達(dá)到100%，氨芐西林的耐藥性雖然沒有達(dá)到100%，但是也表現(xiàn)出了極強(qiáng)的耐藥性；豬鏈球菌對卡那霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋和氟本尼考的敏感度較高，尤其是對環(huán)丙沙星的敏感度已經(jīng)達(dá)到100%，說明這幾種藥品對豬鏈球菌病的防治能夠起到一定的作用；豬鏈球菌對阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈現(xiàn)出中度耐藥性。

豬鏈球菌 藥敏試驗(yàn) 抗藥性 敏感

豬鏈球菌病是由多種不同群的鏈球菌所引起的一種傳染性疾病，最常見的有關(guān)節(jié)炎型、淋巴結(jié)膿腫型和敗血型等幾種類型。近些年豬鏈球菌病在我國發(fā)生較為普遍，對我國的養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。隨著該病情的不斷蔓延，治療此病的多種藥物也開始走向市場，但是經(jīng)過實(shí)驗(yàn)和實(shí)踐使用發(fā)現(xiàn)臨床效果不佳，多種藥物沒有達(dá)到預(yù)期效果。青霉素是治療豬鏈球菌病的常見藥物之一，但是對于革蘭氏陽性菌的治療效果并不顯著，這可能與致病性鏈球菌的抗藥性有關(guān)。甘孟侯(1985-1991)利用雞源葡萄球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，菌株對青霉素的抗藥性由最初的52%上升到100%；鏈霉素的抗藥性由36%上升至50.8%；四環(huán)素的耐藥性由71.2%上升至85%。1967～1975年美國就曾報(bào)道沙門氏菌總的耐藥率由最初的22%上升到55%。通過這兩組數(shù)據(jù)可以看出，菌體的耐藥性是逐漸增強(qiáng)的，這就致使一些抗生素藥類在臨床上的效用不大，最終會導(dǎo)致豬鏈球菌病的流行，提高了豬的死亡率。因此，要加強(qiáng)對細(xì)菌耐藥性的監(jiān)查工作，掌握細(xì)菌的抗藥情況。本論文希望能夠通過對藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)來篩選出對豬鏈球菌病具有敏感反應(yīng)的藥物，為臨床治療提高相關(guān)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品和藥敏紙片

1.1.1 藥敏紙片 YZB/國1748-2006《抗生素藥敏紙片》北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.1.2 試驗(yàn)藥品 環(huán)丙沙星、恩諾沙星、青霉素鉀、氨芐西林(北京端木圣達(dá)生物技術(shù)有限公司)，阿奇霉素、頭孢噻呋、氟本尼考、卡那霉素(楊凌正大獸藥生物科技有限公司)，慶大霉素、土霉素、磺胺嘧啶(廣東利潤生物制藥有限公司)，共11種。

1.2 病例確診

1.2.1 病料來源 選自庫爾勒7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場20頭病豬。

1.2.2 臨床癥狀 20頭病例體溫都存在顯著升高現(xiàn)象，精神萎靡，食欲不振，四肢無力，行走不便，呼吸急促，并且在四肢、頸部、耳廓以及腹下皮膚都出現(xiàn)血點(diǎn)。個(gè)別豬伴有腹瀉和尿血現(xiàn)象。

1.2.3 病理剖析 在病死豬的腹下、頸下和四肢末端皮膚出現(xiàn)紫色出血斑點(diǎn)，急性型死亡的豬從口鼻中流出顏色發(fā)暗的血液。剖檢還可以清晰看到胸腔內(nèi)存有大量的紅色和渾濁的液體，含有黃色纖維素物質(zhì)，并且心包液增量。心機(jī)外膜與心包膜連在一起，心機(jī)柔軟并顏色變淡。機(jī)體的右心室擴(kuò)張，心耳、心冠狀溝和右心室內(nèi)膜有充血現(xiàn)象和出現(xiàn)斑點(diǎn)，脾臟增大，顏色變灰或暗紅色。機(jī)體淋巴結(jié)水腫伴有出血狀?；疾￡P(guān)節(jié)存有漿液纖維素性炎癥。

1.2.4 染色鏡檢 對所取的發(fā)病部位觸片并革蘭氏染色后進(jìn)行鏡檢，鏡檢發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽性球菌，多呈單個(gè)或者成對排列，同時(shí)也存在幾個(gè)相連的短鏈。

1.2.5 細(xì)菌培養(yǎng) 無菌狀態(tài)下取豬的心臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)和腫大的關(guān)節(jié)組織，之后接種到普通的血液瓊脂板上和馬丁瓊脂平板上，在37℃恒溫下培養(yǎng)20～24h。在血液瓊脂平板上可以看到無色的、光滑的、邊緣整齊的、直徑為0.5～1.0mm的細(xì)小菌落，周邊形成無色透明的溶血環(huán)。之后從血液瓊脂平板和馬丁瓊脂平板上選擇典型菌落進(jìn)行涂片，觀察可見單個(gè)的、成對的、短鏈的和極少長鏈的鏈球菌。

1.2.6 生化試驗(yàn) 通過利用典型菌落進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，可發(fā)酵葡萄糖、乳糖以及蔗糖，都不能在0.13%的美蘭牛乳和6.6%的氯化鈉肉湯中生長，但是能夠水解淀粉，這些特性符合豬鏈球菌的特質(zhì)。

1.2.7 藥敏試驗(yàn) 按照常規(guī)紙片法進(jìn)行操作。在無菌狀態(tài)下來挑取鏈球菌菌落，在對其搖勻之后涂在馬丁血清瓊脂平板上，之后將實(shí)驗(yàn)所需要的11種藥敏紙片按照1.5cm的距離放在培養(yǎng)基的表面，并且溫度需要保持在37℃培養(yǎng)18～24h之后取出，觀察是否存在抑菌圈或者抑

菌圈的大小。

2 試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)的判定以抑菌圈的大小為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)中藥敏紙片的周圍會形成抑菌圈，當(dāng)抑菌圈的直徑在15mm以上(包含15mm)說明該藥品是高敏感；當(dāng)抑菌圈的直徑在10～15mm之間，說明藥品具有中毒敏感；當(dāng)抑菌圈的直徑在10mm以內(nèi)，則該藥品表現(xiàn)為低敏感性亦耐藥性。具體藥敏試驗(yàn)結(jié)果如附表。

附表 藥品藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (株、%)

3 討論與小結(jié)

（1）從附表中可以看出，日常所使用的藥品中存在很多類對豬鏈球菌病的作用不明顯，豬鏈球菌菌株對其具有很強(qiáng)的抗性。試驗(yàn)中所分離的菌株對恩諾沙星、青霉素鉀以及慶大霉素都存在超強(qiáng)的抗藥性，耐藥率已經(jīng)達(dá)到100%，氨芐西林的耐藥性雖然沒有達(dá)到100%，但是也表現(xiàn)出了極強(qiáng)的耐藥性；豬鏈球菌對卡那霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋和氟本尼考的敏感度較高，尤其是對環(huán)丙沙星的敏感度已經(jīng)達(dá)到100%，說明這幾種藥品對豬鏈球菌病的防治能夠起到一定的作用；豬鏈球菌對阿奇霉素、土霉素和磺胺嘧啶呈現(xiàn)出中度耐藥性。（2）通過試驗(yàn)可以看出，日常用藥中有很多類對豬鏈球菌是沒有作用的，菌株對其存在耐藥性。而菌株能夠產(chǎn)生耐藥性一定程度上是與藥物的不合理利用有關(guān)。其他實(shí)驗(yàn)報(bào)告曾指出，我國對藥物的利用具有隨意性和不合理性，缺乏科學(xué)用藥的意識，濫用現(xiàn)象較為嚴(yán)重。筆者對庫爾勒地區(qū)多家養(yǎng)殖場進(jìn)行調(diào)研發(fā)現(xiàn)，部分養(yǎng)殖場一直使用常用藥物作為防病添加劑。這些養(yǎng)殖場對某些藥物的使用儼然成為一種習(xí)慣。比如最常用的青霉素，在養(yǎng)殖場中作為萬能藥來使用，豬的消化問題、腸道的問題的首選藥物之一。（3）豬鏈球菌對藥物產(chǎn)生耐藥性與市場環(huán)境也存在關(guān)聯(lián)性。藥品商家的違法行為致使大量假藥流入市場，而這部分藥品對豬鏈球菌并沒有起到殺滅作用，如果不經(jīng)過化驗(yàn)，養(yǎng)殖場很難知道假藥的存在，慢慢其危害性就會顯露出來，豬鏈球菌的發(fā)展擴(kuò)散，最后導(dǎo)致豬的死亡，因此也會加劇養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

[1] 歐陽素貞, 王雙山等. 豬鏈球菌分離株的分群鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].安陽工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào), 2006(01): l.

[2] 乎顯生, 李靜姬. 1株豬源性鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2006(22): l-2.

S852.61+1

A

1007-1733(2015)09-0012-02

2015–06–13）