史正明 （青海省共和縣畜牧獸醫(yī)站 813000）

仔豬巴氏桿菌病病原的分離與鑒定

史正明 （青海省共和縣畜牧獸醫(yī)站 813000）

采取病死仔豬的心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)等病料，進(jìn)行多殺性巴氏桿菌病病原的分離培養(yǎng)與鑒定。根據(jù)流行病學(xué)資料、臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，確診為仔豬巴氏桿菌病。同時(shí)，通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選出敏感藥物并有效控制了疫情。

豬多殺性巴氏桿菌病又稱“豬肺疫”、“鎖喉風(fēng)”，是由條件性多殺性巴氏桿菌引起豬的一種急性、熱性傳染病。2013年3月，青海省某縣一個(gè)體養(yǎng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)的仔豬突然發(fā)病、死亡。發(fā)病9頭，發(fā)病率13.43%，死亡率44.44%。其臨床癥狀為：病豬體溫升高至40～41℃，個(gè)別體溫超過(guò)42℃，食欲下降，繼而廢絕。頸下咽喉部發(fā)熱、紅腫、堅(jiān)硬，甚至延至耳根、前胸，病豬鼻流粉紅色黏稠液體，呼吸困難，張口吐舌，作犬坐姿勢(shì)，可視黏膜發(fā)紺，頸部有明顯的水腫。病豬初便秘，后腹瀉。病理變化：頸部咽喉及周圍結(jié)締組織，有大量?jī)瞿z樣淡黃或灰青色出血性漿液清潤(rùn)，全身黏膜、實(shí)質(zhì)器官及淋巴結(jié)廣泛出血，切面紅色，心包膜心外膜有出血點(diǎn)，胃腸黏膜出血性炎癥，脾出血腫大，個(gè)別豬肺臟有纖維素性樣變，并伴有水腫和氣腫，胸腔及心包腔有較多量的淡黃色積液?，F(xiàn)將病原的分離培養(yǎng)與鑒定、藥敏試驗(yàn)及治療，結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病料采集 無(wú)菌采取病死仔豬的心、肝、脾、肺、腎及淋巴結(jié)等臟器12份，置4℃箱待檢。

1.1.2 培養(yǎng)基 鮮血瓊脂培養(yǎng)基、血清瓊脂培養(yǎng)基及各種生化試驗(yàn)培養(yǎng)基均由本實(shí)驗(yàn)室自制。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明系小白鼠2只(14～15g)，購(gòu)于青海生物藥廠。

1.1.4 藥敏試驗(yàn) 抗生素藥敏紙片購(gòu)自上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司?？咕胤N類P-G(青霉素)、NOR(氟哌酸)、OXA(苯唑青霉素)、CTX(頭孢噻肟)、CAR(羧芐青霉素)、KAN(卡那霉素)、VAN(萬(wàn)古霉素)、GEN(慶大霉素)CMP(氯霉素)、TET(四環(huán)素)、STR(鏈霉素)、CFZ(頭孢唑啉)12種。

1.2 方法

1.2.1 觸片染色鏡 將病料觸片，進(jìn)行革蘭氏染色、美蘭染色，鏡檢。

1.2.2 分離培養(yǎng) 無(wú)菌采取各病料，分別接種于鮮血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18～24h，隨后進(jìn)行純化培養(yǎng)。

1.2.3 生化試驗(yàn) 用滅菌接種環(huán)勾取少許純培養(yǎng)物接種于各種生化培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18～24h后觀察結(jié)果。

1.2.4 動(dòng)物試驗(yàn) 將純培養(yǎng)物制成懸液注射小白鼠2只，0.2ml/只。

1.2.5 藥敏試驗(yàn) 用滅菌生理鹽水將純化好的培養(yǎng)物洗下，稀釋后并與麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷岷筮x取3×10個(gè)活菌/ml量的濃度，用滅菌棉拭子蘸取菌液均勻涂布到整個(gè)血清瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)溫箱干燥3～5min后，貼上各種藥效紙，每塊平均貼3塊，37℃倒置培養(yǎng)18～24h后判定結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 觸片染色鏡檢

鏡下見革蘭氏陰性、散在小桿菌；美蘭染色鏡檢，見大量?jī)蓸O濃染的小桿菌。

2.2 菌落形態(tài)及培養(yǎng)特性

在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色、圓形、微隆起、半透明、濕潤(rùn)、表面光滑、邊緣整齊的露珠樣小菌落，不溶血。

2.3 生化試驗(yàn)

結(jié)果見表1

表1 巴氏桿菌的生化試驗(yàn)結(jié)果

2.4 動(dòng)物試驗(yàn)

2只小白鼠在24h內(nèi)死亡，從死亡小白鼠的臟器中分離到注射菌株一致的革蘭氏陰性小桿菌。

2.5 藥敏實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表2。

表2 巴氏桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 (mm)

3 討論

（1）根據(jù)病史、臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室診斷，確診為仔豬多殺性布氏桿菌病。（2）由于巴氏桿菌為條件性致病菌，所以巴氏桿菌病的流行與豬的抵抗力有密切關(guān)系，不良因素的刺激易引起該病的發(fā)生和傳染。豬群中發(fā)生巴氏桿菌病時(shí)，一般不易查出傳染源，

這與動(dòng)物在發(fā)病前已經(jīng)帶菌有關(guān)，而且該病多在冬春兩季氣溫驟變及長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激條件下，機(jī)體抵抗力降低時(shí)病原侵入并大量繁殖，經(jīng)淋巴液進(jìn)入血液，發(fā)生內(nèi)源性傳染。本病發(fā)生在2013年3月初，由于寒冷、氣候劇變、營(yíng)養(yǎng)缺乏等因素，造成發(fā)病。（3）發(fā)病后立即隔離病豬，對(duì)圈舍、用具等用生石灰嚴(yán)格消毒，2次/d，連用5d，對(duì)病死仔豬進(jìn)行深埋處理。（4）通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選出敏感藥物對(duì)病仔豬進(jìn)行治療。在12種抗生素中仔豬巴氏桿菌對(duì)P-G(青霉素)、CFZ(頭孢唑啉)、CAR(羧芐青霉素)等抗生素高度敏感；對(duì)CTX(頭孢噻肟)、TET(四環(huán)素)、NOR(氟哌酸)、CMP(氯霉素)等抗生素中度敏感；而對(duì)VAN(萬(wàn)古霉素)、OXA(苯唑青霉素)、KAN(卡那霉素)、STR(鏈霉素)等抗生素不敏感。由于巴氏桿菌病常與其它疫病并發(fā)，所有在治療時(shí)應(yīng)考慮可能存在的其它疫病，采用廣譜抗菌藥與特效抗生素結(jié)合，對(duì)癥治療。發(fā)病后用青霉素(2萬(wàn)μg/㎏)肌肉注射，2次/d，連用5d。通過(guò)采取以上防治措施，疫情得到了及時(shí)控制。（5）多殺性巴氏桿菌不僅在病畜全身各組織、體液、分泌物及排泄物中存在，而且也存在于健康家畜的上呼吸道中，所有接種疫苗是此病的主要防治措施。此外，應(yīng)激反應(yīng)也可以引發(fā)豬肺疫。故平時(shí)還應(yīng)做好豬群的飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。避免各種應(yīng)激因素刺激，加強(qiáng)消毒，有效預(yù)防豬巴氏桿菌病。

S858.28

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1007-1733(2015)09-0032-02

2015–06–19）