吳 芳，閻 博，樊寶娟，黃 艷，楊瑞瑞，劉海靜，

(1.陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710065;2.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽 712046)

強力定眩膠囊為2012年國家藥品標準提高品種，現(xiàn)行質(zhì)量標準為國家食品藥品監(jiān)督管理局標準，處方由天麻、杜仲、野菊花、杜仲葉和川芎五味中藥組成。降壓降脂、定眩的功效，用于高血壓、動脈硬化、高血脂癥以及上述諸病引起的頭痛、頭暈、目眩、耳鳴、失眠等癥。文獻報道［1］:強力定眩膠囊在眩暈患者上的臨床療效顯著，具有推廣價值;另有報道［2］建立強力定眩膠囊的質(zhì)量標準，對其中主要藥味進行了薄層色譜定性研究和高效液相色譜的含量測定。

作為能體現(xiàn)中藥整體特征的指紋圖譜、特征圖譜分析技術(shù)在近年來的質(zhì)量標準研究中得到了廣泛的關(guān)注和認可［3-8］，《中國藥典》2010年版一部中增加了桂枝茯苓膠囊等制劑的指紋圖譜項目和烏靈膠囊等的特征圖譜項目。本文對處方中各味藥材主要化學(xué)成分進行了分析，對強力定眩膠囊的HPLC特征圖譜進行了系統(tǒng)的方法學(xué)考察并對試驗結(jié)果進行了分析總結(jié)，以期合理提高該制劑的質(zhì)控標準，控制該制劑的穩(wěn)定性和有效性。

1 儀器、試劑及樣品

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，2996二極管陣列檢測器;SHISEIDO色譜柱;Sartorius AG ME電子天平、Mettler AE-240S電子天平、Sartorius BS 223S電子天平。

1.2 試劑及樣品 乙腈為色譜純，水為高純水，其余試劑為分析純。天麻素對照品(批號:110807-200205)、松脂醇二葡萄糖苷對照品(批號:11537-201103)、阿魏酸對照品(批號:0773-9910)、綠原酸對照品(批號:110753-200413)、蒙花苷對照品(批號:111528-200607)、天麻對照藥材(批號120944-201009)，杜仲對照藥材(批號:121202-200502)，野菊花對照藥材(批號:120995-201105)，杜仲葉對照藥材(批號:1068-9901)，川芎對照藥材(批號:120918-200809)，均由中國食品藥品檢定研究院提供;強力定眩膠囊樣品、生產(chǎn)用藥材及陰性樣品由生產(chǎn)企業(yè)提供。

2 方法

2.1 色譜條件 SHISEIDO MGⅡC18色譜柱;柱溫35℃;流速為1.0 mL·min-1;進樣量為10 μL，流動相為梯度洗脫，見表1。

表1 流動相及比例

2.2 對照品溶液的制備 取天麻素對照品、松脂醇二葡萄糖苷對照品、阿魏酸對照品、綠原酸對照品、蒙花苷對照品各約5 mg，精密稱定，置同一50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL各含0.1 mg的混合對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 取樣品適量，研細，稱取相當于5粒重，加稀乙醇50 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙腈—水(3∶97)適量使溶解，并定容于10 mL容量瓶中。

2.4 測定方法 分別精密量取混合對照品溶液和樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀。以阿魏酸色譜峰為S峰，其余各峰的保留時間與之的比值為相對保留時間。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗 取同一批號的樣品溶液，在相同色譜條件下連續(xù)進樣6次，結(jié)果各色譜峰的相對保留時間RSD均小于0.05%。表明本實驗儀器及色譜條件的精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗 取同批次樣品供試品溶液在制備后0、5、15、20 h進樣，結(jié)果各峰相對保留時間RSD均小于0.2%。表明樣品制備后20 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.3 重現(xiàn)性試驗 取同一批號的樣品，按“2.3”項下方法，重復(fù)制備6份溶液，按上述色譜條件進樣，結(jié)果各峰相對保留時間RSD均小于0.1%。表明方法重現(xiàn)性良好。

2.5.4 色譜峰歸屬 取企業(yè)提供的生產(chǎn)用藥材及天麻對照藥材、杜仲對照藥材、野菊花對照藥材、杜仲葉對照藥材、川芎對照藥材，按照處方量及“2.2”項下方法，制備溶液。比較企業(yè)提供的藥材和對照藥材的色譜圖的一致性，確定各藥材主峰的保留時間，與樣品色譜圖進行比較，結(jié)果各藥材主峰均在樣品色譜圖中呈現(xiàn)，且分離良好。

2.5.5 專屬性考察 取不含每種藥材的陰性樣品，按照“2.3”項下的方法制備陰性溶液，在相同色譜條件下進樣，按照各峰的保留時間對主要色譜峰進行峰歸屬。

3 樣品特征圖譜的建立

取企業(yè)提供的9批樣品，按照“2.2”項下的處理方法制備供試品溶液，并記錄色譜圖，通過對9批樣品的色譜圖的比較，選定其中10個峰為特征峰，并以阿魏酸峰為S峰，計算其余峰的相對保留時間。確定的強力定眩膠囊特征圖譜見圖1，各峰保留時間及峰歸屬結(jié)果見表2。

4 討論

4.1 方法特點 該制劑處方由天麻、杜仲葉、杜仲、野菊花和川芎五味中藥組成。其中杜仲和杜仲葉屬于同一藥用植物的不同藥用部位，采用TLC法很難進行區(qū)分并鑒別。阿魏酸和綠原酸雖含量較高，很多質(zhì)量標準中以此為含量測定的指標成分，但專屬性不強，不能說明任何一種藥材的質(zhì)量。本實驗通過篩選色譜條件，使這五味中藥在同一色譜條件下得以鑒別，每種藥材都呈現(xiàn)了具有專屬性的色譜峰，為中藥制劑中這五味藥材的質(zhì)量標準的研究提供了參考和依據(jù)。

表2 色譜峰歸屬結(jié)果

4.2 色譜峰歸屬 樣品中各味藥材的主要色譜峰在280 nm處均能體現(xiàn)，且在此波長處檢測處的色譜峰數(shù)量較多，響應(yīng)值較好，故選擇280 nm為檢測波長。在此波長處，五種藥材均有特征峰呈現(xiàn)，根據(jù)峰歸屬結(jié)果，天麻的特征峰為1、2號峰，杜仲葉的特征峰為3、4號峰，杜仲特征峰為5號峰，川芎的特征峰為7、8號峰，野菊花特征峰為9號峰，S峰阿魏酸由野菊花、杜仲葉和川芎共同貢獻，綠原酸由野菊花和杜仲葉共同貢獻。

4.3 提取溶劑選擇 比較了稀乙醇和甲醇分別作為提取溶劑時樣品的色譜圖，結(jié)果稀乙醇提取液比甲醇提取液的色譜圖呈現(xiàn)更多的色譜峰，且峰面積相對較大，故選擇稀乙醇作為提取溶劑。

4.4 關(guān)于系統(tǒng)適用性考察 從柱溫、進樣量、柱流速、色譜柱和儀器5個方面對方法的系統(tǒng)適用性進行了的考察?？疾炝酥鶞胤謩e在30℃、35℃、40℃時各峰的相對保留時間，結(jié)果三者的相對保留時間RSD在1%之內(nèi);考察了進樣量為5、10、20μL時各峰的相對保留時間，結(jié)果三者的相對保留時間RSD在1% 之內(nèi);考察了柱流速為 0.8、1.0、1.1 mL·min-1時，各峰的相對保留時間，結(jié)果3種色譜條件下，峰2的3個相對保留時間的RSD值超過了5%，所以規(guī)定流動相的流速為1.0 mL·min-1;換用了不同品牌的三根色譜柱，結(jié)果峰7、8、9的相對保留時間的RSD值均超出5%的范圍，表明色譜柱對色譜峰具有較明顯的影響，所以規(guī)定了色譜柱的品牌;另外，換用不同商品名稱的液相色譜儀測定各峰的相對保留時間，結(jié)果三者的相對保留時間RSD在±1%之內(nèi)，儀器對色譜峰相對保留時間的影響較小。

4.5 關(guān)于檢測波長 標準中含量測定的指標性成分天麻素色譜峰在220 nm附近色譜峰明顯，但在此波長處基線較高且其它色譜峰不能呈現(xiàn)。在280 nm處，各藥材均有特征峰呈現(xiàn)。但企業(yè)提供的天麻藥材和天麻對照藥材呈現(xiàn)的色譜峰峰面積懸殊較大，關(guān)于此色譜峰我們將繼續(xù)進行研究。

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