熊燦瓊 曹素云

消炎止咳片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

熊燦瓊 曹素云

目的 探討消炎止咳片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法鑒別方中百部、桔梗，采用高效液相色譜法測定穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果 百部、桔梗薄層鑒別效果好；穿心蓮內(nèi)酯9.021～108.250 μg，具有良好的線性關(guān)系（r=0.9997），脫水穿心蓮內(nèi)酯10.070～120.840 μg，具有良好的線性關(guān)系（r=0.9999）；穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為97.9%，RSD為2.4%，脫水穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為98.0%，RSD為2.0%。結(jié)論 該方法簡單、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，能夠較好地控制該制劑的質(zhì)量。

消炎止咳片；穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯；高效液相色譜；薄層色譜鑒別

消炎止咳片由胡頹子葉200 g、桔梗150 g、太子參200 g、百部100 g、罌粟殼12.5 g、麻黃25 g、黃荊子125 g、南沙參37.5 g、穿心蓮125 g等組成，具有消炎、鎮(zhèn)咳、化痰、定喘的功效，用于咳嗽痰多、胸滿氣逆、氣管炎。所采用的標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第5冊(cè)，對(duì)主成分無定性、定量分析。為更好地控制其質(zhì)量，筆者通過查閱大量資料，采用薄層色譜鑒別法（TLC）對(duì)桔梗、百部進(jìn)行鑒別[1]；高效液相色譜法（HPLC）測定該制劑穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[2]，為本制劑提供可定性、定量的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695 Separations Moduie高效液相色譜儀（四元泵、二極管陣列檢測器 1260 Infinity、自動(dòng)進(jìn)樣器）；紫外檢測器（2998 PDA Detector）；色譜數(shù)據(jù)工作站（Empower）；AY120電子天平（SHIMADZH）；潔康TM超聲波清洗器。

1.2 試藥 脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（中國食品藥品檢定所研究院，批號(hào)：110854-201308，含量：99.7%）；穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110854-201108，含量：98.7%）；百部對(duì)照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：200402）、桔梗對(duì)照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：

121028-200909）；消炎止咳片同一生產(chǎn)廠家4個(gè)批號(hào)：130120、140213、140227、140306；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 百部的鑒別

2.1.1 樣品溶液的制備 取本品20片，研細(xì)，加濃氨水l0 ml濕潤，加三氯甲烷50 ml，回流提取2 h，冷卻，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5 ml使其溶解，作為供試品溶液[3]。

2.1.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取百部對(duì)照藥材2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例取缺百部的其他藥材，按樣品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 薄層色譜鑒別結(jié)果 吸取上述溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以苯-三氯甲烷-甲醇-氨水（5:2:2:0.2）為展開劑，展開、取出、晾干，噴以0.5茚三酮溶液（紫外光燈365 nm下檢驗(yàn)）。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)[4]，陰性對(duì)照溶液無干擾，見圖1。

圖1 百部薄層色譜圖（1百部對(duì)照藥材溶液； 2.3.4供試品溶液；5缺百部的陰性對(duì)照溶液）

2.2 桔梗的鑒別

2.2.1 樣品溶液的制備 取本品 l0 片，去糖衣，研碎，取細(xì)粉l.5 g，加鹽酸l ml與三氯甲烷20 ml，加熱回流1 h，冷卻，分取三氯甲烷層，濾過，蒸干，殘?jiān)右掖糽 ml溶解，即得。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取桔梗對(duì)照藥材2 g，按樣品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例取桔缺梗的其他藥材，按樣品溶液。制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 薄層色譜鑒別結(jié)果 吸取上述溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇（10:8:0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%磷酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。樣品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無干擾。見圖2。

圖2 桔梗薄層色譜圖（1缺桔梗的陰性對(duì)照溶液；2.3.4供試品溶液；5桔梗對(duì)照藥材溶液）

2.3 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測定

2.3.1 色譜條件 Diamonsil C18（5 μm，200×4.6 mm）色譜柱。流動(dòng)相：甲醇-水（52:48）；檢測波長：穿心蓮內(nèi)酯225 nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯254 nm[5]；流速為1.0 ml/min；柱溫35 ℃。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品18.28 mg，經(jīng)P2O5減壓干燥12 h的脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品20.20 mg，加甲醇制成每1毫升含穿心蓮內(nèi)酯0.3656 mg、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.4040 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取上述兩種儲(chǔ)備液1 ml置同一10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品 20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，稱取粉末3.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入40%甲醇25 ml浸泡1 h，超聲處理（250 w，25 kHz）30 min，用40%的甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10 ml，置中性氧化鋁柱（200～300目，5 g，內(nèi)徑1.5 cm）上，用甲醇15 ml洗脫，收集洗脫液，置25 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液[6]。

同法按處方比例取不含穿心蓮的其他藥材制備陰性空白溶液。

2.3.4 色譜行為與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 分別取 2.3.2與2.3.3項(xiàng)下制備的對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照溶液，按照2.3.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，如圖3所示，陰性對(duì)照溶液無干擾。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計(jì)算不低于2 000[7]，其他均符合2010年版《中國藥典》的要求。

2.3.5 線性關(guān)系考察 精密量取2.3.2對(duì)照品貯備液適量，加甲醇稀釋至濃度分別為：脫水穿心蓮內(nèi)酯濃度分別為10.07、20.14、40.28、80.56、120.84 μg/ml，穿心蓮內(nèi)酯濃度分別為9.02、18.04、36.08、72.17、108.25 μg/ml的對(duì)照品溶液，按2.3.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，分別測定脫水穿心蓮內(nèi)酯和穿心蓮內(nèi)酯峰，以峰面積（A）作為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度（C）為橫坐標(biāo)，分別得回歸方程為 A=1.7173×104C－9.9377× 103，r=0.9999，脫水穿心蓮內(nèi)酯在 10.07～120.84 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；A=2.0809×104C－3.6576×103，r=0.9997，穿心蓮內(nèi)酯在9.02～108.25 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將2.3.3項(xiàng)下的溶液室溫放置，分別于0、3、6、9、12 h測定，記錄峰面積，結(jié)果RSD分別為1.9%和0.8%（n=5）。可見供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取 2.3.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，RSD分別為1.5%和0.7%。

2.3.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，按樣品溶液制備方法及測試條件測定，結(jié)果脫水穿心蓮內(nèi)酯和穿心蓮內(nèi)酯RSD的平均含量分別為1.8%和0.9%（n=6），表明本法重復(fù)性良好。

圖3 穿心蓮HPLC圖譜

2.3.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)：130120）6份，分別為1.5087g、1.5114g、1.5093g、1.5201g、1.5107g、1.5041g。按照2.3.3項(xiàng)下制備，至“精密加入40%甲醇25ml浸泡1h”，按大、中、小3個(gè)濃度分別精密加入對(duì)照品貯備液脫水穿心蓮內(nèi)酯各1.0、1.5、2.0 ml，穿心蓮內(nèi)酯各2、3、4 ml。同法處理即得。按2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。記錄色譜圖，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、2。

表1 脫水穿心蓮內(nèi)酯回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 穿心蓮內(nèi)酯回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 原計(jì)劃對(duì)制劑中麻黃和罌粟殼進(jìn)行研究，查閱大量相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)有不少研究該制劑中麻黃和罌粟殼的文獻(xiàn)；為能更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證其療效，選擇其中桔梗和百部進(jìn)行鑒別，并測定穿心蓮的含量[6]。

3.2 試驗(yàn)過程中，對(duì)供試品溶液提取對(duì)比不同方法和不同溶劑，結(jié)果表明本文方法提取簡單、完全；方法專屬性強(qiáng)，陰性無干擾，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

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Quality Standard of Xiaoyanzhike Tablets

Xiong Canqiong Cao Suyun

Objective To establish the quality standard of Xiaoyanzhike Tables.Methods TLC method was used in the prescription of stemona root,Platycodon grandiflorum,content by high performance liquid chromatography determination of andrographolide and dehydroandrographolide.Results Stemona root,Platycodon grandiflorum TLC identification effect is good;andrographolide has good linear relationship in the range of 9.021～108.250 μg (r=0.9997);dehydroandrographolide have good linear relation in the range of 10.070～120.840 μg(r=0.9999); andrographolide the average recovery was 97.9%,RSD was 2.4%,dehydroandrographolide,the average recovery was 98%,RSD was 2%.Conclusion The method is simple,rapid,accurate and reproducible,and can better control the quality of this preparation.

Xiaoyanzhike Tablets;Andrographolide and dehydroandrographolide;HPLC;TLC

R927.11

A

1673-5846(2015)05-0017-03

畢節(jié)市食品藥品檢驗(yàn)所，貴州畢節(jié) 551700