馬 錁，張瑞萍，谷 超，尹君樂(lè)，胡銳清，李建國(guó)，羅 詩(shī)*

(1.東莞市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心，廣東東莞 523086;2.東莞市盛唐化工有限公司，廣東東莞 523086;3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，廣州 510642;)

桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis 又名東方果實(shí)蠅，屬雙翅目實(shí)蠅科果實(shí)蠅屬，危害46個(gè)科250 多種水果和蔬菜，并且極易隨果蔬傳播蔓延，是國(guó)際上重要的檢疫性害蟲(chóng)(Clarke et al.，2005)。雌蟲(chóng)產(chǎn)卵于果皮下，幼蟲(chóng)取食果肉為害，直接影響是產(chǎn)量減少和田間控制成本增加，間接影響是需要采取控制措施，而且產(chǎn)品品質(zhì)降低(Clarke et al.，2011)。目前主要是靠化學(xué)農(nóng)藥和性引誘劑甲基丁香酚誘殺來(lái)防治桔小實(shí)蠅。化學(xué)農(nóng)藥不利于水果安全生產(chǎn)和環(huán)境保護(hù)，特別是近年來(lái)，桔小實(shí)蠅田間種群已對(duì)有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑、擬除蟲(chóng)菊酯和阿維菌素等農(nóng)藥產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，因此對(duì)桔小實(shí)蠅進(jìn)行誘殺是一種較好的防治策略(潘志萍等，

2005;Jin et al.，2011;Pagadala et al.，2012);甲基丁香酚只能引誘雄蟲(chóng)，而且是一種致癌物質(zhì)，一定劑量的甲基丁香酚能夠誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物產(chǎn)生肝癌腫瘤并能誘導(dǎo)真核生物的染色體產(chǎn)生結(jié)構(gòu)異常(Schiestl et al.，1989)。

因此，尋找一種安全有效且能引誘桔小實(shí)蠅雌蟲(chóng)的物質(zhì)對(duì)防治桔小實(shí)蠅具有重要意義。桔小實(shí)蠅雌性成蟲(chóng)對(duì)寄主瓜果的選擇，主要根據(jù)瓜果本身和氣味(Prokopy，1990)，筆者在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，裂開(kāi)的龍眼果實(shí)上有桔小實(shí)蠅在產(chǎn)卵、取食，這說(shuō)明龍眼裂果中存在引誘桔小實(shí)蠅的揮發(fā)性成分。本研究選取正常的龍眼果實(shí)和裂開(kāi)的龍眼果實(shí)作為研究材料，利用利用固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)不同龍眼的揮發(fā)性成分進(jìn)行比較分析，旨在找出二者的差異，為進(jìn)一步探索對(duì)桔小實(shí)蠅有引誘活性的物質(zhì)及引誘劑的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

龍眼(石硤)采自廣東省東莞市厚街龍眼果園，裂果為在樹(shù)上自然裂開(kāi)的果實(shí)，正常果與裂果均為成熟果，采集時(shí)間為2013年7月，采果過(guò)程隨機(jī)并快速完成。

內(nèi)標(biāo)(癸酸乙酯，為色譜純)，美國(guó)Sigma公司。

1.2 試驗(yàn)方法

采取頂空固相微萃取(SPME)-氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用儀(Agilent 7980A/5975C)分析法。

樣品處理:首先將頂空固相微萃取裝置的萃取纖維頭在氣相色譜的進(jìn)樣口老化，老化溫度為270℃，載氣流量為1 mL/min，老化時(shí)間1 h。取50 g 龍眼，置于15 mL 樣品瓶中，將萃取針頭通過(guò)聚四氟乙烯隔墊插入到樣品瓶中，推出纖維頭進(jìn)行吸附，等吸附完畢立即縮回纖維頭，從樣品瓶中拔出萃取針頭，再將萃取針頭直接插入氣質(zhì)聯(lián)用儀，推出纖維頭解析，同時(shí)啟動(dòng)儀器采集數(shù)據(jù)。

氣相色譜條件:DB-5 MS 毛細(xì)管柱(122-5532;30 m;I.D:0.25 mm;film:0.25μm，安捷倫);程序升溫:起始溫度35℃，停留5 min，3℃/min 升至150℃，10℃/min 升至240℃，停留2 min;進(jìn)樣口溫度250℃;載氣為氦氣。

質(zhì)譜條件:質(zhì)譜接口溫度280℃，離子源溫度230℃，電離方式EI，電子能量70 eV，質(zhì)譜檢測(cè)器條件為1 sec/scan，m/z 35-500，1 kV。

揮發(fā)性物質(zhì)的定性和定量分析:龍眼果實(shí)揮發(fā)性物質(zhì)經(jīng)過(guò)GC-MS 分析鑒定后，其結(jié)果經(jīng)計(jì)算機(jī)在NIST 08 標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)的檢索及分析，結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)資料確定各個(gè)揮發(fā)性物質(zhì)。龍眼果實(shí)的揮發(fā)性物質(zhì)的定量采用內(nèi)標(biāo)法，加入濃度1∶500 的內(nèi)標(biāo)物癸酸乙酯1μL 于15 mL 頂空瓶中，用面積歸一化法將內(nèi)標(biāo)物的峰面積和每個(gè)組分的峰面積進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算每個(gè)峰的具體含量，計(jì)算公式如下:含量=(單峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積)×內(nèi)標(biāo)物含量(Li et al.，2009;Zhang et al.，2010)。

2 結(jié)果與分析

龍眼正常果、裂果揮發(fā)性物質(zhì)的總離子流色譜圖見(jiàn)圖1-圖2，各組分的含量見(jiàn)表1。兩種龍眼果實(shí)中共檢出81種揮發(fā)性物質(zhì)，其中17種物質(zhì)為二者共有，分別是:羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、亞甲基環(huán)丁烷、乙酸乙酯、對(duì)二甲苯、β-月桂烯、1，3，8-對(duì)三烯、(1S)-3，7，7-三甲基雙環(huán)［4.1.0］庚-3-烯、萜品油烯、鄰二甲苯、對(duì)乙基芐醇、1-氯-4，4-二甲基-2-戊炔、十六烷、石竹烯、香葉烯、杜松烯。

圖1 龍眼裂果揮發(fā)物的總離子流圖Fig.1 Total ion current of volatile from split longan fruit

圖2 龍眼正常果揮發(fā)物的總離子流圖Fig.2 Total ion current of volatile from longan fruit

裂果中檢出52種化學(xué)成分，烯類最多，29種，相對(duì)含量93.27%;醇類3種，相對(duì)含量0.46%;芳香類2種，相對(duì)含量0.31%;酚類1種，相對(duì)含量0.16%;酮類1種，相對(duì)含量0.04%;烷4 類種，相對(duì)含量0.86%;酯類1種，相對(duì)含量0.18%;其它11種，相對(duì)含量2.3%。相對(duì)含量超過(guò)1%的有9種，分別是羅勒烯(61.2%)、別羅勒烯(7.55%)、石竹烯(7.01%)、α-蒎 烯(5.24%)、杜松烯(1.42%)、γ-欖香烯(1.81%)、1，3，8-對(duì)三烯(1.36%)、(1S)-3，7，7-三甲基雙環(huán)［4.1.0］庚-3-烯(1.2%)、1，2，3，4，4a，7-六氫-1，6-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(1.07%)。

正常果中檢出49種化學(xué)成分，烯類最多，20種，相對(duì)含量86.48%;酯類，6種，1.56 %;芳香類，9種，相對(duì)含量0.87%;醇類，4種，相對(duì)含量0.3%;酚類，1種，相對(duì)含量0.25%;烷類，4種，相對(duì)含量0.1%;酮類，2種，相對(duì)含量0.07%;其它2種，相對(duì)含量0.61%。相對(duì)含量超過(guò)1%的有5種，分別是羅勒烯(69.55%)、別羅勒烯(9.27%)、1，3，8-對(duì)三烯(1.7%)、乙酸乙酯(1.25%)、(1S)-3，7，7-三甲基二環(huán)［4.1.0］庚-3-烯(1.2%)。

裂果中的羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、石竹烯在裂果中的含量均大于正常果200 ng/g/h 以上。香葉烯、γ-欖香烯、β-月桂烯、1，3，8-對(duì)三烯在裂果中的含量高于正常果。而α-桉葉烯、α-石竹烯在裂果中的含量高于30 ng/g/h，但在正常果中沒(méi)有檢測(cè)到。

表1 龍眼揮發(fā)物的成分及含量Table 1 Volatile components in 2 Longan samples

(續(xù)上表)

(續(xù)上表)

(續(xù)上表)

3 結(jié)論與討論

桔小實(shí)蠅主要通過(guò)雌蟲(chóng)將卵產(chǎn)于寄主果實(shí)表皮下，幼蟲(chóng)在果實(shí)內(nèi)取食、危害。桔小實(shí)蠅的產(chǎn)卵習(xí)性導(dǎo)致了藥劑防治上的困難。因此，控制桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵便成為防治其危害的重要措施。研究發(fā)現(xiàn)龍眼對(duì)桔小實(shí)蠅具有引誘作用(涂蓉，2012)，而是桔小實(shí)蠅不能在健全的龍眼果實(shí)上產(chǎn)卵成功，但可以在受傷的果實(shí)傷口處成功產(chǎn)卵(梁廣勤等，2001)。筆者發(fā)現(xiàn)桔小實(shí)蠅能在裂開(kāi)的龍眼果實(shí)上成功產(chǎn)卵，說(shuō)明龍眼的揮發(fā)性成分中有引誘桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵的物質(zhì)。本研究對(duì)龍眼裂果和龍眼正常果揮發(fā)性成分的比較分析，發(fā)現(xiàn)裂果中的羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、石竹烯、香葉烯、α-石竹烯、γ-欖香烯、β-月桂烯的含量均比正常果有明顯的增加，裂果中的α-桉葉烯、α-石竹烯在正常果中沒(méi)有檢測(cè)到。有研究表明，這幾種物質(zhì)或者其類似物質(zhì)對(duì)實(shí)蠅具有引誘作用。桔小實(shí)蠅對(duì)羅勒烯、別羅勒烯、月桂烯均有較強(qiáng)的電生理活性(Jayanthi et al.，2012);月桂烯、α-蒎烯、反式-β-羅勒烯的混合物能夠吸引西印度實(shí)蠅的雌、雄成蟲(chóng)(Malo et al.，2012);杧果中的β-蒎烯對(duì)地中海實(shí)蠅有較高引誘作用(Cosse et al.，1995);木瓜中的大根香葉烯對(duì)桔小實(shí)蠅有引誘作用(涂蓉等，2013);β-石竹烯對(duì)桔小實(shí)蠅有引誘作用(馬錁等，2011)。

昆蟲(chóng)與植物揮發(fā)成分的關(guān)系一直以來(lái)是關(guān)注研究重點(diǎn)，植物的揮發(fā)成分誘導(dǎo)昆蟲(chóng)產(chǎn)生寄主定向行為、逃避行為、產(chǎn)卵行為、產(chǎn)卵場(chǎng)所的選擇行為、刺激雌雄交配、取食、聚集和傳粉行為等(杜家緯，2001)。昆蟲(chóng)對(duì)寄主植物化學(xué)指紋圖譜的感知是其對(duì)寄主定向行為主要因素，產(chǎn)卵雌成蟲(chóng)對(duì)植物的接受或拒絕主要取決于植物體內(nèi)的接觸產(chǎn)卵刺激物(唐宇翀等，2010)。因此，桔小實(shí)蠅對(duì)龍眼裂果的趨向性，可能與龍眼裂果中含量較高的幾種烯類物質(zhì)有關(guān)。本文只是初步分析了龍眼果實(shí)的揮發(fā)性物質(zhì)，這些化合物單體或混合物對(duì)桔小實(shí)蠅的引誘活性尚在進(jìn)一步研究中。

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