王 琦 吳詩哲 齊旻悅

1（中山大學(xué) 中山醫(yī)學(xué)院，廣州510080）

2（中山大學(xué) 生命科學(xué)生命科學(xué)大學(xué)院，廣州510275）

阿斯巴甜（Aspartame），學(xué)名天門冬酰苯丙胺酸甲酯，俗稱甜味素，目前作為甜味劑和增味劑已在多個(gè)國(guó)家的食品工業(yè)中得到了廣泛應(yīng)用。近年來，隨著食品安全問題日益得到重視，阿斯巴甜的生物安全問題再次引起了相關(guān)科研機(jī)構(gòu)的關(guān)注［1］。因此，有必要利用電生理技術(shù)進(jìn)行更進(jìn)一步的細(xì)胞水平研究，通過分析不同劑量阿斯巴甜對(duì)神經(jīng)元的自發(fā)放電、微小興奮性突觸后電流等生物電活動(dòng)的影響，從而為進(jìn)一步評(píng)估阿斯巴甜的生物安全性提供依據(jù)。

果蠅的嗅神經(jīng)環(huán)路是果蠅研究最深入的系統(tǒng)之一，其解剖結(jié)構(gòu)也已被詳細(xì)描述［2，3］，嗅神經(jīng)環(huán)路可以調(diào)控其很多高級(jí)的行為，如求偶、覓食、學(xué)習(xí)記憶等，同時(shí)在解剖學(xué)和形態(tài)與功能方面，具有高度的保守性［4］。從果蠅的嗅神經(jīng)環(huán)路入手，探究物質(zhì)的神經(jīng)毒性以及評(píng)估物質(zhì)對(duì)果蠅中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響是一種重要的實(shí)驗(yàn)手段［5］。

膜片鉗技術(shù)是由德國(guó)生理學(xué)家Neher和Sakmann建立的一種以記錄通過離子通道的離子電流反映離子通道活動(dòng)的技術(shù)［6，7］，是離子通道研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”，可直接為分子水平的生物膜離子通道特性，如門控動(dòng)力學(xué)特征、藥理學(xué)特征、膜的通透性和選擇性等提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。在具體的實(shí)驗(yàn)過程中，利用負(fù)反饋電子線路設(shè)計(jì)，可將已破膜的目標(biāo)細(xì)胞（通常直徑為數(shù)μm2）的膜電位鉗制在一定水平，從而觀察和測(cè)定流過膜通道的離子電流。1980年后，隨著該技術(shù)的日臻完善，其在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸流行，大大促進(jìn)了神經(jīng)藥理、神經(jīng)系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)研究和形態(tài)學(xué)以及神經(jīng)系統(tǒng)電生理特性等相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。應(yīng)用膜片鉗記錄在通道電流，可研究不同時(shí)間、不同部位、細(xì)胞膜內(nèi)外等條件下不同濃度的單體物質(zhì)對(duì)通道功能的影響。這對(duì)深入了物質(zhì)理學(xué)特性，藥物的生物安全性評(píng)估，以及對(duì)人和動(dòng)物的生理功能影響，提供了分子水平的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。在膜片鉗的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上可進(jìn)一步研究相關(guān)通道蛋白質(zhì)亞結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 果蠅品系與飼育

黑腹果蠅Drosophila melanogaster采用野生型Canton-S（CS），飼養(yǎng)環(huán)境為人工氣候箱，溫度為25±0．5℃，相對(duì)濕度為60±5%，光照周期為晝夜各12h循環(huán)光照；使用常規(guī)果蠅培養(yǎng)基飼育。配方如下：

表1 果蠅飼育培養(yǎng)基配方

制作步驟：（以800ml量為例）蔗糖52g，玉米粉68g，瓊脂6g，雙蒸水800ml，攪拌均勻；上述混合液放入電飯鍋煮沸，間斷開蓋攪拌均勻，以防玉米粉沉淀結(jié)塊；煮沸兩次后加酵母粉5．6g攪拌均勻；再次沸騰后加丙酸4ml攪拌均勻；分裝入培養(yǎng)瓶并塞緊海綿塞，防止外來果蠅飛入產(chǎn)卵，造成果蠅品系污染。

1．2 設(shè)備與耗材

果蠅培養(yǎng)人工氣候箱：上海一恒牌 MGC-450HPY-2；激光共聚焦顯微鏡：德國(guó)Zeiss LSM710；膜片鉗實(shí)驗(yàn)平臺(tái)顯微鏡：日本Olympus BX51WI；解剖顯微鏡：德國(guó)Zeiss公司；放大器：美國(guó)Axon公司 Multiclamp 700B；數(shù)模轉(zhuǎn)換器：美國(guó)Axon公司Digidata 1440A；顯微操縱儀：美國(guó)Sutter MP225；浴槽：RC-26chamber；石英電極：美國(guó)Sutter公司。

1．3 實(shí)驗(yàn)試劑

1）果蠅全腦解剖用酶液：木瓜蛋白酶；激動(dòng)劑為L(zhǎng)-半胱氨酸（L-cysteine）；蛋白酶凍存液配制：將純度為≥99%的木瓜蛋白酶冰上分裝為5μL／支，凍存于-20℃。

2）單細(xì)胞記錄用細(xì)胞外液：

表2 單細(xì)胞記錄用細(xì)胞外液母液配比（5L，pH＝7．2，Osm＝250）

上述母液存放于4℃保存，每次實(shí)驗(yàn)前配置細(xì)胞外液，方法如下（以100ml細(xì)胞外液為例）：80ml超純水＋10ml Stock A＋10ml Stock B＋20μl Stock C，得到100ml實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞外液。

3）果蠅細(xì)胞內(nèi)液：

表3 單細(xì)胞自發(fā)放電記錄用細(xì)胞內(nèi)液配比（100ml，pH＝7．2，Osm＝235）

4）Confocal成像用液體：4%formadldehyde，0．01MPBS（pH7．4），Tris-PBS（含0．2%Tris-ton），PBST（含5%BSA），購(gòu)于廣州化學(xué)試劑廠；鼠源nc 82抗體，羊抗鼠 Alexa Fluor 488 抗體，Rhodamine-adidin染料，阿斯巴甜單體；購(gòu)于Sigma試劑公司；

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

將制備好的新鮮細(xì)胞外液通入氧氣（95%O2＋5%CO2）至氧飽和；預(yù)熱電極拉制儀30min，并拉制電極使，確認(rèn)膜片鉗的刺激／記錄電極表面鍍有一層均勻的Agcl；，解凍提前分裝并凍存的細(xì)胞內(nèi)液一支；，制備蛋白酶激動(dòng)液：用上述氧飽和的細(xì)胞外液加入L-半胱氨酸制備濃度為1μmol／L的激動(dòng)液，充分混勻后靜置備用；，配制解剖果蠅全腦用蛋白水解酶：解凍后加細(xì)胞外液稀釋至70倍，按照體積比酶液∶激動(dòng)液＝8∶1的比例制備解剖用蛋白水解酶，充分混勻后靜置備用。

2．2 果蠅全腦急性解剖

黑腹果蠅的三齡幼蟲個(gè)體較大，腦組織最大，蟲體包裹在透明的硬膜內(nèi)，易于神經(jīng)組織的定位和解剖，因此是研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)時(shí)常用的實(shí)驗(yàn)材料。本章實(shí)驗(yàn)果蠅全腦來自孵化前兩天的三期幼蟲。解剖體系使用當(dāng)日配制并氧飽和的細(xì)胞外液。利用一次性注射器將三七幼蟲的頭部取下，剝?nèi)ビ材ひ约暗诙幽ず蠼肱渲坪玫哪竟系鞍酌该敢?。靜置3 min，剝離果蠅腦外殼，此時(shí)可見全腦神經(jīng)組織包裹在氣囊硬膜下。靜置待酶液消化周圍結(jié)締組織鞘，輕輕剝離氣囊，得到膜片鉗記錄用果蠅全腦腦片。利用細(xì)胞外液洗滌腦組織三次，移入記錄浴槽并注入2ml細(xì)胞外液。利用特制的鉑金絲hoder固定浴槽內(nèi)的果蠅腦片，使待記錄的功能區(qū)域暴露。此時(shí)可移入膜片鉗操作臺(tái)進(jìn)行記錄。在電生理記錄過程中全程采用連續(xù)流動(dòng)的含氧細(xì)胞外液灌流貫，并且保持浴槽液面平穩(wěn)［8，9］。

2．3 電生理記錄

使用HEKA Patchmaster記錄軟件。目標(biāo)細(xì)胞形成GΩ級(jí)高阻封接，給與短暫負(fù)壓破膜，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鉗制在-70mV電位進(jìn)行記錄。選取細(xì)胞狀態(tài)良好的數(shù)據(jù)。待電壓鉗電信號(hào)穩(wěn)定后，加入TTX和PTX阻斷鈉離子通道產(chǎn)生的自發(fā)性和動(dòng)作性電流以及GABA通道產(chǎn)生的抑制性電流，加入阻斷劑3min以后讀取數(shù)據(jù)，此時(shí)記錄mEPSC。加入不同濃度阿斯巴甜溶液，3min后記錄給藥后mEPSC。

2．5 目標(biāo)神經(jīng)元的confocal成像

果蠅的PNs神經(jīng)元confocal成像采用注射染料法：實(shí)驗(yàn)前將0．4%生物素（biocytin）加入果蠅內(nèi)液。急性分離出果蠅全腦后在60倍水鏡下找到果蠅的觸角葉（Antennal Lobe，AL），位于 AL上層的神經(jīng)元為PNs。把含有0．4%biocytin的內(nèi)液充盈至微電極約1／3，輕彈電極中部，待尖端氣泡完全排除后安裝在電極夾持器上。用顯微操縱器使電極尖端進(jìn)入浴槽中細(xì)胞外液液面以下，給與適當(dāng)正壓并補(bǔ)償液接電位。本章實(shí)驗(yàn)用微電極充盈細(xì)胞內(nèi)液后尖端如水電阻在10～15MΩ范圍。選取視野內(nèi)細(xì)胞狀態(tài)良好的作為目標(biāo)細(xì)胞，通常要求胞體折光度好、胞體較規(guī)則、表面光滑有立體感的細(xì)胞，細(xì)胞周圍無明顯雜質(zhì)。調(diào)節(jié)微電極至目標(biāo)細(xì)胞附近，靠近并給予負(fù)壓，此時(shí)微電極與目標(biāo)細(xì)胞膜形成GΩ級(jí)的高封接電阻。持續(xù)2min以上，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定，給予適當(dāng)短暫負(fù)壓，此時(shí)細(xì)胞破膜，若漏電流絕對(duì)值低于-50pA，且靜息電位低于-40mV，認(rèn)為細(xì)胞破膜成功且狀態(tài)良好。維持該狀態(tài)40min以上，使電極內(nèi)液中的生物素充分?jǐn)U散到目標(biāo)細(xì)胞胞體，輕輕撤去電極，所得果蠅腦樣本用于confocal成像實(shí)驗(yàn)。

果蠅腦樣品置于200ml的4%福爾馬林溶液中于4℃過夜固定（固定時(shí)長(zhǎng)3h以上即可，過夜固定效果較好）。配制0．01MPBS溶液（pH＝7．2±0．1）。利用該溶液將固定后的果蠅腦樣品洗滌3次。漂洗后的樣品置于200ml含0．2%Triton的PBST透明20min～30min。置于200ml含5%BSA的PBST終止反應(yīng)。然后按照體積比10∶1加入鼠源抗體nc 82，該體系置于4℃孵育24h。孵育后的樣品用PBS溶液重復(fù)洗滌，每次洗滌三次，中間間隔20min。按照體積比加入200∶1的羊抗鼠Alexa Fluor 488抗體、500∶1rhodamine-avidin染料、200∶1streptavidin-CY3抗體，靜置于4℃孵育24h。按照上述重復(fù)洗滌的方法用PBS洗滌樣本后制片、封片。于激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行觀察并拍照。所得數(shù)據(jù)在Imaris 6．4．2軟件中進(jìn)行3D重建并輸出。

2．6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用mini analysis數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行分析：使用Fitmaster打開原始數(shù)據(jù)文件；將文件轉(zhuǎn)換成ABF格式；用mini analysis軟件讀取轉(zhuǎn)換后的文件，進(jìn)行mEPSC分析。數(shù)據(jù)選取條件為：幅值小于20mV、rising time小于10ms、rising time大于decay time。被選取的信號(hào)被mini60計(jì)入統(tǒng)計(jì)并分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，組間差異統(tǒng)計(jì)使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。分析軟件使用clampfit 10．0。圖形和數(shù)據(jù)分析使用SPSS 11．0。數(shù)據(jù)輸出和圖像繪制使用 Origin 8．0、Microsoft Visio 2007。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1 PNs神經(jīng)元在果蠅全腦的激光共聚焦成像

圖1為果蠅腦單個(gè)PN神經(jīng)元的激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)所選擇PNs神經(jīng)元主要位于果蠅觸角葉垂直上方，胞體直徑約為10～20μm。該結(jié)果顯示了果蠅PNs胞體位于Antenna Lobe，其投射可到達(dá)蘑菇體和外側(cè)角。

圖1 蠅PNs神經(jīng)元的形態(tài)和位置

3．2 不同濃度阿斯巴甜對(duì)PNs神經(jīng)元mEPSCs的影響

圖2 加入不同濃度阿斯巴甜后果蠅PNs神經(jīng)元mEPSCs的記錄

圖3 不同濃度阿斯巴甜對(duì)果蠅PNs神經(jīng)元mEPSCs的影響

本實(shí)驗(yàn)采用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，將外液灌流時(shí)加入TTX和PTX以阻斷GABA受體，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給藥3min后mEPSCs的幅值有如下不同：高濃度組 mEPSCs的幅值為（2．75±0．2）pA，與給藥前（2．63±0．3）pA 相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05；n＝12）；低濃度組 mEPSCs的幅值為（2．68±0．2）pA，與給藥前（2．66±0．2）pA相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05；n＝12）；給藥3min后 mEPSCs的頻率有如下不同：高濃度組mEPSCs的頻率為（0．21±0．03）Hz，與給藥前（0．48±0．05）Hz相比頻率明顯降低且具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．01；n＝12）；低濃度組 mEPSCs的頻率為（0．36±0．02）Hz，與給藥前（0．45±0．03）Hz相比差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．05；n＝12）（見圖2、圖3）。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高濃度的阿斯巴甜非常顯著降低果蠅PNs的mEPSCs頻率，而低濃度組降低效果較弱，但依舊具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩個(gè)濃度均對(duì)mEPSCs的幅值沒有影響。

3．3 不同濃度阿斯巴甜對(duì)PNs神經(jīng)元sAP的影響

圖4 加入不同濃度阿斯巴甜后果蠅PNs神經(jīng)元sAP的記錄

圖5 不同濃度阿斯巴甜對(duì)果蠅PNs神經(jīng)元sAP的影響

本實(shí)驗(yàn)采用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，記錄給予不同濃度阿斯巴甜后果蠅投射神經(jīng)元膽堿能突觸電流鉗模式下自發(fā)電活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給藥3min后sAP的幅值有如下不同：高濃度組sAP的幅值為（15．7±0．5）mV，與給藥前（10．8±0．4）mV 相比頻率明顯降低且具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．05；n＝12）；低濃度組sAP的幅值為（11．9±0．7）mV，與給藥前（11．3±0．6）mV相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05；n＝12）；給藥3min后sAP的頻率有如下不同：高濃度組sAP的頻率為（0．13±0．08）Hz，與給藥前（1．78±0．11）Hz相比頻率明顯降低且具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．01；n＝12）；低濃度組sAP的頻率為（1．59±0．07）Hz，與給藥前（1．79±0．13）Hz相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05；n＝12）（見圖4、圖5）。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予急性分離的果蠅腦組織高濃度的阿斯巴甜后可以顯著增加果蠅PNs的sAP幅值，同時(shí)非常顯著降低sAP頻率，而低濃度組在上述實(shí)驗(yàn)中均未表現(xiàn)出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。

4 討論

阿斯巴甜是食品工業(yè)廣泛使用的人造甜味劑，有生化代謝研究表明其在人體內(nèi)的腸道酯酶和肽酶的作用下可產(chǎn)生3種主要代謝產(chǎn)物：天門冬氨酸、苯丙氨酸和甲醇。雖然阿斯巴甜的安全性通過了多個(gè)國(guó)家相關(guān)食品安全部門的檢驗(yàn)，但是越來越多的研究證據(jù)使得人們對(duì)它的安全性提出質(zhì)疑。有歐洲的科研機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)在給與大鼠一定量阿斯巴甜的條件下有引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多臟器腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，包括白血病、神經(jīng)鞘瘤和淋巴細(xì)胞瘤。部分神經(jīng)毒理學(xué)研究顯示，高劑量的阿斯巴甜（＞1000mg／kg）可以改變實(shí)驗(yàn)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)的水平［10，11］，其原因可能是阿斯巴甜的代謝產(chǎn)物之一苯丙氨酸與其他中性氨基酸競(jìng)爭(zhēng)性通過血-腦屏障，并因此改變大腦血液中苯丙氨酸與中性氨基酸的比值，增加腦內(nèi)苯丙氨酸的水平，最終干擾中樞神經(jīng)系統(tǒng)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞［12］。此外，還有報(bào)道顯示阿斯巴甜會(huì)引起偏頭痛、老年癡呆癥［13］等，因此在突觸水平研究阿斯巴甜對(duì)離子通道的影響對(duì)于揭示其生物安全性有重要意義。

果蠅有四對(duì)染色體，包含人類基因80%的同源基因，而且這些同源基因的功能相似［14］。雖然果蠅的中樞神經(jīng)系統(tǒng)簡(jiǎn)單卻調(diào)控著如學(xué)習(xí)記憶、求偶、睡眠、抉擇等一系列復(fù)雜的行為活動(dòng)。在進(jìn)化方面，果蠅的基因具有較高的保守性，因此利用果蠅為研究材料制造疾病模型已廣泛應(yīng)用在當(dāng)前的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中，以果蠅為模型研究神經(jīng)系統(tǒng)的一些基本問題，是一個(gè)簡(jiǎn)捷而有效的途徑［15-17］。本研究所用果蠅全腦組織由急性分離制得，基本保留了完整的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)包括膽堿能通路，符合實(shí)驗(yàn)需要。在果蠅腦的中央?yún)^(qū)，位于觸角葉的投射神經(jīng)元，即PNs約為200個(gè)，是嗅覺信息處理的二級(jí)神經(jīng)元，可接收來自嗅覺神經(jīng)元和中間神經(jīng)元傳遞的信息。PNs既是膽堿神經(jīng)元又是膽堿受體神經(jīng)元，可接受來自嗅覺受體神經(jīng)元的膽堿能突觸傳入信息和潛在的側(cè)枝興奮性輸入，其軸突可進(jìn)一步將投射到蘑菇體和外側(cè)角，將信息整合并傳達(dá)至果蠅的第三級(jí)嗅覺中樞。有研究者通過對(duì)果蠅PNs電活動(dòng)的探究從而探討神經(jīng)藥理學(xué)機(jī)制［18］。

突觸的活動(dòng)是神經(jīng)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)其功能的重要基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。對(duì)于突觸后電流的研究，有助于進(jìn)一步探討不同神經(jīng)元之間網(wǎng)絡(luò)信號(hào)傳遞的發(fā)生，進(jìn)一步揭示相關(guān)的生物學(xué)機(jī)制。突觸可塑性與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)，其中信號(hào)傳遞過程受到囊泡釋放、突觸后神經(jīng)元響應(yīng)等環(huán)節(jié)調(diào)控。全細(xì)胞記錄的神經(jīng)元電活動(dòng)，在時(shí)間和空間上具有總和性。自發(fā)性電活動(dòng)反映的是細(xì)胞膜所有離子通道電活動(dòng)特性的總和，本實(shí)驗(yàn)中高濃度的阿斯巴甜對(duì)于sAP的幅值和頻率均有顯著影響，說明該人造甜味劑對(duì)果蠅中樞神經(jīng)元細(xì)胞膜離子通道活動(dòng)有一定的影響。昆蟲的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，主要興奮性遞質(zhì)系統(tǒng)是膽堿能的，本研究所涉及的果蠅嗅神經(jīng)環(huán)路屬膽堿能系統(tǒng)，是果蠅學(xué)習(xí)記憶神經(jīng)環(huán)路重要的組成部分，因此研究給藥前后微小興奮性突觸后電流變化對(duì)探明藥物作用機(jī)制和突觸可塑性影響有重要作用。實(shí)驗(yàn)中，mEPSCs頻率的變化說明了不同濃度阿斯巴甜對(duì)果蠅PNs的突觸前膜釋放乙酰膽堿的數(shù)量有影響，且高濃度的影響更為顯著。因此，阿斯巴甜可通過調(diào)控果蠅神經(jīng)系統(tǒng)膽堿能輸入環(huán)路從而產(chǎn)生一定的生物學(xué)影響?？紤]到mEPSCs與突觸可塑性具有緊密聯(lián)系，因此可推斷阿斯巴甜可能對(duì)突觸可塑性具有潛在的影響，該影響可能是這種人造甜味劑引起偏頭疼和老年癡呆癥的生物學(xué)機(jī)制之一。mEPSCs反映了突觸前膜和突觸后膜的調(diào)控，涉及囊泡釋放與受體結(jié)合等多個(gè)生物化學(xué)過程，因此阿斯巴甜對(duì)神經(jīng)中樞的影響可從相關(guān)離子通道的角度進(jìn)一步深入探究［19，20］。

果蠅的嗅神經(jīng)環(huán)路與其多個(gè)復(fù)雜的高級(jí)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的行為密切相關(guān)。此外果蠅是研究脊椎動(dòng)物的優(yōu)良模式生物，它的嗅覺反映生理學(xué)和行為學(xué)的相關(guān)研究近年來是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的重要課題［21］，許多毒理學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的發(fā)現(xiàn)均以此為研究基礎(chǔ)。本研究以觸角葉為切入點(diǎn)，探討人造甜味劑阿斯巴甜對(duì)果蠅中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，從而對(duì)評(píng)估其生物安全性提供可靠的參考。

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