周 莉（江西省撫州市第一人民醫(yī)院臨床藥學(xué)室，撫州344000）

金銀花口腔崩解片中綠原酸含量測(cè)定

周 莉
（江西省撫州市第一人民醫(yī)院臨床藥學(xué)室，撫州344000）

目的建立金銀花口腔崩解片中綠原酸含量的測(cè)定方法。方法采用HPLC法測(cè)定金銀花口腔崩解片中綠原酸的含量。HPLC條件乙腈-0.4%磷酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。結(jié)果綠原酸在0.02096 μg～0.2186 μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系(γ2=0.9999，n=10)，平均回收率為100.72%(RSD=1.15%)。結(jié)論該測(cè)定方法精密度高，重現(xiàn)性好，可用于此藥的質(zhì)量控制。

金銀花；綠原酸；高壓液相；質(zhì)量控制

金銀花口腔崩解片由金銀花、連翹、牡丹皮組成，主要用于青春痘，長(zhǎng)痘在不同部位，有不同的臨床癥狀，如：內(nèi)分泌失調(diào)；心悸，胸悶；胃火過(guò)盛，消化系統(tǒng)異常；肺功能失調(diào)，肝功能不順暢，熱毒；便秘；壓力大，脾氣差，造成心火和血液循環(huán)有問(wèn)題等。金銀花為甘，寒。歸肺、心、胃經(jīng)。具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱，用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱血毒痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱。金銀花的現(xiàn)代藥理作用：1）抗菌及抗病毒。即對(duì)金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、痢疾、傷寒、腦膜炎雙球菌、肺炎雙球菌、綠膿以及流感病毒等都有明顯抑制作用。2）有增強(qiáng)免疫的功能。金銀花能促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬功能。3）抗炎、解熱。金銀花能促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的釋放，對(duì)炎癥有明顯抑制作用。為治一切內(nèi)癰外癰之要藥。金銀花主要成分是綠原酸，綠原酸是制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)［1］。金銀花口腔崩解片研究采用高效液相色譜法測(cè)定金銀花口腔崩解片中綠原酸的含量。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP型(日本島津公司)；C18柱：5×200 mm，粒度5 μm(大連依利特公司)。德國(guó)BP211D Sartorius電子天平(十萬(wàn)分之一)，綠原酸對(duì)照品批號(hào)：110753-200608（中國(guó)藥品生物制品檢定所），商品藥材購(gòu)自江西省樟樹(shù)幸福藥材行，經(jīng)廣東江門(mén)中醫(yī)藥學(xué)校鄭小吉主任中藥師鑒定。乙腈(色譜純，SIGM A公司)。水為重蒸水，其它實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

金銀花口腔崩解片(自制，批號(hào)20140320、20140322、20140316)。根據(jù)藥材理化性質(zhì)及藥理作用，擬將金銀花、連翹、牡丹皮提取成浸膏，金銀花提取揮發(fā)油后加水提取制成浸膏。采用β-環(huán)糊精對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行包合，再與浸膏混合，加入粘合劑，崩解劑，稀釋劑，矯味劑，泡騰劑，混勻，加粘合劑制粒，干燥，壓片。并以口感（砂礫感、苦感）、崩解時(shí)間為主要指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)輔料加入量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)乙腈-0.4%磷酸(13∶87)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。理論塔板數(shù)以綠原酸計(jì)不低于4000。取供試品溶液10 μL注入液相色譜儀測(cè)試，綠原酸的保留時(shí)間約為15.6 min，供試品溶液中綠原酸可與其他物質(zhì)基線分離，且陰性對(duì)照供試液無(wú)干擾。

圖1 綠原酸對(duì)照品溶液高效液相色譜圖

圖2 陰性對(duì)照溶液高效液相色譜圖

圖3 供試品溶液高效液相色譜圖

2.2 溶液的制備1）對(duì)照品溶液：取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置量瓶中，置棕色量瓶中，用50%甲醇溶解，制成每1 mL中含5 μg的溶液。2）取金銀花口腔崩解片，研磨，過(guò)四號(hào)篩，取0.5 g，精密稱重，置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，再次精密稱重，以50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取5 ml，置25 ml棕色瓶中，加50%甲醇到刻度，搖勻，即得。3）陰性對(duì)照液，按同樣工藝，制缺金銀花的金銀花口腔崩解片，并按樣品供試液方法制成陰性藥液。

2.3 線性關(guān)系考察精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液2.5，5.0，7.5，10，12.5，15.0，17.5，20 μl，分別注入色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果綠原酸在0.125 μg～1.000 μg范圍，進(jìn)樣量X(μg)與峰面積(A)呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為：Y=3212714X-60485，γ= 0.9998。

2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn)取對(duì)照品溶液供試品溶液(20140320)、陰性對(duì)照溶液分別進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1～3，陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液20 μL，在“2.1”項(xiàng)條件下平行測(cè)定5次，記錄綠原酸峰面積。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)，取同一供試品溶液，于室溫放置0h、4 h、8 h、10 h和24 h后分別取樣測(cè)定，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)精密吸取同一批號(hào)（201403200）供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL，平行操作5份，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果供試品溶液的綠原酸平均含量為0.089552，RSD=1.72%，表明重現(xiàn)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取樣金銀花口腔崩解片品共6份，精密稱定，加入綠原酸對(duì)照品，依法制備供試品溶液，照含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定取金銀花口腔崩解片(自制，批號(hào)201040320、20140322、20140316)按2.2 1）項(xiàng)下對(duì)照品溶液制備方法制備對(duì)照品溶液，按2.2 2）項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μl，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 三批樣品中綠原酸的含量結(jié)果

3 討論

不同產(chǎn)地的金銀花綠原酸含量不同［2］，因此對(duì)成品含量的有影響，實(shí)驗(yàn)對(duì)不同來(lái)源的三批金銀花中綠原酸的含量進(jìn)行測(cè)定，均符合《中國(guó)藥典》2010版一部的標(biāo)準(zhǔn)，暫定金銀花中綠原酸含量不低于1.5%。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，本含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于金銀花口腔崩解片的質(zhì)量控制。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010版一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：205.

［2］彭素琴，劉郁林.不同品種金銀花不同花期綠原酸含量比較［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，38(14):7296-7298.

Content Determination of Chlorogenic Acid in Flos Lonicerae Orally Disintegrating Tablets by High Performance Liquid Chromatography

ZHOU Li

(Department of ClinicalPharmacy，F(xiàn)uzhouFirst People'sHospital，JiangxiProvince，F(xiàn)uzhou344000，China)

Objective To establish a method for content determination of chlorogenic acid in Flos Lonicerae orally disintegrating tablets. Methods Determining the content of chlorogenic acid in Flos Lonicerae orally disintegrating tablets by HPLC method.HPLC acetonitrile and 0.4%phosphoric acid solution(15∶85)as mobile phase，flow rate was 10 ml/min，column temperature was 25℃，the detection wavelength was 327 nm.Results Chlorogenic acid in 0.02096 G～0.2186 g range and peak area showed a good linear relationship(γ= 0.9999 2，n=10)，the average the recovery rate was 100.72%(RSD=1.15%).Conclusion The Method has high precision，good reproducibility，and can be used for quality control of this drug.

Flos Lonicerae；chlorogenic acid；HPLC；quality control

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.12.075

1672-2779（2015）-12-0148-02

：張文娟本文校對(duì)：張文娟

2015-05-15）