馬海營 （山東農(nóng)業(yè)大學 山東 泰安 271018） 張衛(wèi)紅 （深圳職業(yè)技術(shù)學院 廣東 深圳）

五加糖肽對雛雞大腸桿菌和新城疫的治療試驗

馬海營 （山東農(nóng)業(yè)大學 山東 泰安 271018） 張衛(wèi)紅 （深圳職業(yè)技術(shù)學院 廣東 深圳）

為研究五加糖肽對雞免疫增效作用及抗感染功效。選擇100羽10日齡的雛雞隨機分成5組。2個試驗組分別攻毒大腸桿菌和雞新城疫病毒，然后用五加糖肽飲水，另外設(shè)2個感染對照組和1個空白對照組。檢測雞的增重率、保護率、死亡率，試驗表明，五加糖肽有較好的免疫增效及抗細菌和病毒感染作用。

五加糖肽 雞 大腸桿菌 新城疫病毒 免疫增強

五加糖肽是深海紅藻中活性成分半乳糖肽類衍生物，由于其獨特的結(jié)構(gòu)，具有多種生物學活性，近年來，對其生物的活性研究表明，在抗氧化、抗腫瘤、抗凝血、抗病毒感染以及免疫調(diào)節(jié)[1,2]等方面具有重要活性。禽大腸桿菌病和新城疫會給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大危害，使用常規(guī)的抗菌和抗病毒藥物達不到預期效果，目前大多數(shù)抗病毒藥物及抗生素已被明令禁止用于禽類，防治疾病發(fā)生的最有效方法是提高機體免疫力。

五加糖肽是一種增強動物機體免疫力的藥物。且對大多數(shù)病毒具有明顯的抑制作用，并能增強抗生素藥物的抗菌作用。本試驗擬選擇該藥物對人工感染大腸桿菌或新城疫病毒的雛雞進行防治療效試驗，檢測統(tǒng)計雞的增重率、保護率、死亡率，以判定五加糖肽對雞的免疫增效及抗病原感染作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 五加糖肽由鶴壁泰德生化科技有限公司提供。

1.2 病原 大腸桿菌由山東農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院實驗室提供，新城疫病毒由哈爾濱獸醫(yī)研究所惠贈，SPF 雞胚購自濟南家禽所，海蘭白雛雞購自泰安市種雞場。

1.3 方法 （1）病原制備：將保存的大腸桿菌菌種接種于鮮血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18h，挑取有典型β-溶血菌落接種于肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)14h，用比濁法測定菌液濃度，復壯后每毫升含菌量達10億。取新城疫病毒液接種9日齡SPF雞胚，0.1ml/枚，37℃培養(yǎng)，收集24～72h死亡雞胚的尿囊液，并測定其效價為106.0EID50/0.1ml。（2）試驗藥物的用法和用量：每日按每g加水25～30kg，連用4d，1次/d。（3）試驗動物及分組：100只10日齡臨床建健康海蘭白雛雞隨機分成5組，公母兼有，每組20只，均在相同的溫度、濕度、光照等條件下嚴格隔離飼養(yǎng)。大腸桿菌病感染雛雞頸部皮下注射接種雞大腸桿菌菌液0.2ml(10億/ml)，新城疫病毒尿囊液0.2ml(106.0EID50/0.1ml)頸部皮下注射9日齡雛雞。 試驗分組及處理見表1。（4）觀察指標：測定試驗前和試驗末雞的體重，計算增重率。感染后每天觀察并記錄各試驗組雞精神、采食、飲水、糞便、呼吸癥狀、死亡數(shù)、對死亡雞進行病理剖檢和細菌分離。試驗期為10d，結(jié)束時，計算每組的死亡率和保護率，檢測2組、4組和5組所剩雞只血清中新城疫抗體水平。

表1 試驗組分組方法

2 結(jié)果

2.1 感染雞癥狀觀察 （1）大腸桿菌感染組，死亡前雛雞主要表現(xiàn)出精神沉郁，食欲下降，羽毛松亂，兩翅下垂，縮頸，閉眼昏睡，排灰白色或土黃色稀糞，有的發(fā)出尖叫聲，嚴重者臥地不起直至死亡。死后剖檢病變主要表現(xiàn)肝充血腫脹、易碎，肝包膜、心包膜、氣囊有大量纖維性滲出物，形成一層灰白色纖維素性膜。脾腫大，有小出血點；肝臟穿刺能分離培養(yǎng)出典型大腸桿菌。（2）新城疫感染組，病雞精神萎靡，飲食欲下降或廢絕；羽毛松亂，翅下垂，縮頸，精神沉郁；雞冠發(fā)紫，口流黏液，呼嚕甩鼻；呼吸困難，張口呼吸；排綠色稀糞。剖檢見口腔有黏液，氣管黏膜環(huán)狀出血；腺胃黏膜附有大量粘液，腺胃黏膜乳頭出血，肌胃角質(zhì)膜易剝離，黏膜有出血斑點；消化道黏膜有出血性卡他性炎癥，腸道黏膜淋巴濾泡處腫脹。有的病雞氣管充血、出血，有黏液，個別病雞支氣管內(nèi)有栓塞；肺臟呈暗紅色淤血。

2.2 藥物對感染雞增重及保護率的影響 大腸桿菌和新城疫治療組增重率分別為32.72%、34.4%，低于空白對照組平均增重率，但是明顯高于感染對照組，結(jié)果見表2。對大腸桿菌和新城疫的保護率分別為75%和65%，顯著高于感染對照組10%，但是仍然低于空白對照組100%。結(jié)果見表3。

表2 藥物對大腸桿菌和新城疫感染雞的增重影響 (g、%)

表3 藥物對雞感染大腸桿菌、新城疫的保護率 (羽、%)

2.2 藥物對新城疫抗體水平的影響 從表4和圖1中可以看出雛雞感染新城疫病毒10d后，新城疫抗體水平顯著升高，不進行新城疫攻毒的試驗組(5組)母源抗體20日齡時基本消失，新城疫治療組(2組)血清中新城疫特異性抗體效價平均值(7.54)明顯高于新城疫感染對照組(4組)的平均值(5.5)，且存活的13只雞機體內(nèi)抗體效價大都在7以上，有的甚至高于9，不用藥的一組(4組)血清中新城疫抗體雖然也明顯升高，但是效價為5和6，明顯低于感染用藥組。

表4 藥物對新城疫抗體水平的影響 (羽、log2)

附圖 新城疫抗體水平分布圖

3 討論

試驗結(jié)果表明五加糖肽有很強的抗菌、抗病毒活性，明顯提高雛雞的體液免疫反應。因此提示該藥物可在平時雞病防疫中搭配使用，以提高機體的免疫力，抑制細菌、病毒感染；在疫苗免疫時使用，能提高機體的免疫反應，減少免疫應激反應。此外，五加糖肽的免疫調(diào)節(jié)作用及增強機體免疫力機制可能與其含有卡拉膠成分有密切關(guān)系。Nicklin等[3]認為卡拉膠可通過對巨噬細胞的釋放炎癥因子功能進行調(diào)節(jié)，魏元臣等[4]報道卡拉膠降解物能顯著促進巨噬細胞增殖，并能增強巨噬細胞的吞噬能力和釋放NO的能力，從而增強其免疫功能。但是卡拉膠尚有免疫抑制作用，Thomson等[2]認為卡拉膠可以通過削弱T細胞依賴性抗原的體液免疫和補體系統(tǒng)的激活，抑制細胞免疫，發(fā)揮免疫抑制作用；Cochran等[5]發(fā)現(xiàn)口服卡拉膠可以顯著抑制T細胞的增殖；Vijayakumar等[6]研究發(fā)現(xiàn)卡拉膠多次注射對BALB/C小鼠具有免疫抑制作用。但是這種作用與抗感染作用的關(guān)系還有待進一步研究。結(jié)論，五加糖肽具有良好的免疫增效作用和抗感染功效。

[1] Richou R, Lallouette P, Legger H. Carrageenan, adjuvating and immunity stimulating substance[J]. Comptes Rendus Hebdomadaires Des Séances de L'Académie Des Sciences, 1968,267(2): 257-259.

[2] Thomson A W, Fowler E F. Carrageenan: a review of its effects on the immune system [J]. Agents and Actions, 1981, 11(3): 265-273.

[3] Nicklin S, Baker K, Miller K. Carrageenan Induced Changes in the Immunomodulatory Capacity of Macrophages: An in Vitro Study[J]. Advances in Experimental Medicine and Biology, 1988, 237: 821-832.

[4] 魏元臣, 周革非, 李樹福等. 峰膠降解組分的體外免疫活性[J]. 食品科學, 2009, 30(11): 232-236.

[5] Cochran F R, Baxter C S. Macrophage-mediated suppression of T lymphocyte proligeration induced by oral carrageenan administration [J]. Immunology, 1984, 53: 291-297.

[6] Vijayakumar R K, Muthukkaruppan V R. Immunoregulatory processes induced by carrageenan in BALB/C mice [J]. Immunological Investigations, 1990, 19: 163-183.

S816.76

A

1007-1733(2015)05-0008-02

2015-03-06）