·臨床研究·活動期潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞與腸道炎性反應(yīng)的相關(guān)性研究

吳鐵龍薛麗莉戴圓圓薛育政

DOI:10.3969/j.issn.1673-534X.2015.04.019

基金項(xiàng)目：無錫市醫(yī)管中心科研項(xiàng)目(YGZXQ1318)，江蘇省“六大人才高峰”基金(WSN-066)，江蘇省“333工程”科研項(xiàng)目(CAE01101-06)，無錫市社會發(fā)展科技支撐項(xiàng)目(CSE31N1415)

作者單位：214000南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院消化內(nèi)科

通信作者：薛育政，Email: xueyz001@163.com

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因尚不完全清楚的慢性腸道炎性疾病。目前研究認(rèn)為，腸道黏膜免疫系統(tǒng)紊亂在UC發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用。導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂的原因主要是效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量增多或免疫調(diào)節(jié)功能降低。機(jī)體內(nèi)存在數(shù)種免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)，其中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg cell)是發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的主要效應(yīng)細(xì)胞。有研究報道，當(dāng)UC炎性反應(yīng)活動時，外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量減少，但它們之間關(guān)系的研究不多。本文通過研究活動期UC患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平的變化及其與臨床Myao評分、內(nèi)鏡Jeroen評分和病理Matts分級的相關(guān)性，探討外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平變化的臨床意義。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2013年8月至2014年8月就診于南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院消化內(nèi)科的UC患者35例，其中男20例、女15例，年齡20～61歲，平均年齡(39±12)歲。所有UC患者的診斷均符合2012年中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病協(xié)作組擬定的《2012年炎癥性腸病診斷與治療的共識意見》[1]，排除標(biāo)準(zhǔn)為不愿接受檢查者、患有自身免疫性疾病者、近半年服用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素者、有其他嚴(yán)重疾病者。根據(jù)Mayo評分，緩解期15例和活動期20例(輕度7例、中度6例、重度7例)。選擇同期該院健康體檢者20名作為正常對照組，其中男11名、女9名，年齡24～56歲，平均年齡(41±10)歲。所有受試者均知情同意行相關(guān)檢測。

1.2研究方法

所有受試者入院當(dāng)日空腹抽取EDTA-N2抗凝肘靜脈血5 mL，按淋巴細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破饭?說明書分離出外周血單核細(xì)胞(PBMC)，加入生理鹽水，400 g離心20 min，沉淀PBMC，棄上清，重懸PBMC，然后按說明書操作將分離好的100 μL PBMC加入1 μL 異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的CD4抗體和PE熒光素標(biāo)記的CD25抗體(美國BD公司)，避光置4℃冰箱中孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌2次，2 000 g離心5 min后棄上清，加入500 μL PBS洗滌后上機(jī)檢測。用Cxpcytometer軟件分析統(tǒng)計CD4+CD25+Treg細(xì)胞的百分比。免疫散射比濁法方法測定C反應(yīng)蛋白(CRP)。

1.3疾病活動度評價

疾病活動度評價包括臨床Mayo評分(0～2分為緩解期、3～5分為輕度活動期、6～10分為中度活動期、11～12分為重度活動期)、內(nèi)鏡Jeroen評分[2](0～3分為非活動期、4～7分為輕度活動期、8～12分為中度活動期、13～18分為重度活動期)和病理Matts分級[3](1級為1分、2級為2分、3級為3分、4級為4分、5級為5分)?；颊呷朐寒?dāng)日行Mayo評分評估，對Mayo≥3分的UC患者行腸鏡檢查及病理活檢，根據(jù)Jeroen評分系統(tǒng)評估鏡下評分，根據(jù)病理Matts分級進(jìn)行病理評分。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

2結(jié)果

2.1各組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞和CRP水平的比較

活動期UC患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平低于緩解期，緩解期低于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；活動期CRP水平高于緩解期和正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，緩解期CRP水平略高于對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　各組外周血CD4 + CD25 + Treg細(xì)胞

注：與對照組比較，aP<0.05；與緩解期UC組比較，bP<0.05

2.2不同活動期UC組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞和CRP水平的比較

外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平隨著UC病情加重而降低，重度活動期低于輕、中度活動期，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CRP水平隨著病情加重而上升，中、重度活動期UC患者外周血CRP水平高于于輕度活動期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　不同活動期UC組外周血CD4 + CD25 + Treg

注：與輕度組比較，aP<0.05；與中度組比較，bP<0.05

2.3活動期UC組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平與疾病活動度評分及CRP水平的相關(guān)性分析

線性回歸分析發(fā)現(xiàn),活動期UC組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平與臨床Mayo評分、內(nèi)鏡Jeroen評分、病理Matts評分及CRP水平均呈負(fù)相關(guān)(RA=0.67，RB=0.78，RC=0.86，P<0.01；RD=0.72，P<0.05)。見圖1。

圖 1　活動期UC組外周血CD4 + CD25 + Treg細(xì)胞水平與疾病活動度評分及CRP水平的相關(guān)性分析

3討論

UC是一種慢性免疫性腸道疾病，其發(fā)病機(jī)制主要是腸道黏膜免疫功能紊亂，導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的針對腸道共生菌群的異常免疫反應(yīng)。CD4+CD25+Treg細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的主要效應(yīng)細(xì)胞，可通過細(xì)胞-細(xì)胞間直接接觸和分泌抗炎因子如轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)等抑制輔助T細(xì)胞增殖和促炎因子分泌，阻止免疫損傷和維持免疫耐受[4]。研究報道，相比于正常人，UC患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平下降，但該細(xì)胞水平與炎性活動之間的相關(guān)性研究不多[5-6]。本研究結(jié)果顯示，相比于緩解期UC組和對照組，活動期UC組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平明顯下降，且隨著炎性反應(yīng)加重而降低，與臨床活動Mayo評分、內(nèi)鏡Jeroen評分及病理Matts評分呈負(fù)相關(guān)，提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平降低與UC腸道炎性反應(yīng)活動密切相關(guān)，與Wang等[7]的研究結(jié)果相似。此外，研究發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+Treg細(xì)胞可以從外周血遷移至腸道黏膜固有層，也可以從腸道黏膜固有層遷移至外周體循環(huán)[8]，而活動期UC患者腸道炎性反應(yīng)區(qū)域組織中CD4+CD25+Treg細(xì)胞的水平明顯高于非炎性反應(yīng)區(qū)域[7]，提示導(dǎo)致外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平降低的可能原因是，CD4+CD25+Treg細(xì)胞從外周體循環(huán)及非炎性反應(yīng)區(qū)域向炎性反應(yīng)區(qū)域趨化集聚。

此外，本研究還檢測了非特異性炎性反應(yīng)指標(biāo)CRP的水平，發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比，緩解期UC組外周血CRP水平無明顯差異，而活動期UC組CRP水平隨著炎性反應(yīng)加重而上升，與Rodgers等[9]的研究結(jié)果相似。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，活動期UC組CRP上升水平與CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平降低呈負(fù)相關(guān)。造成活動期UC患者CRP水平上升的原因可能是外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平降低，免疫調(diào)節(jié)功能減弱，促炎因子分泌增多，炎性細(xì)胞活化刺激CRP水平升高。

綜上所述，活動期UC患者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平與疾病活動度密切相關(guān)，檢測外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平有助于監(jiān)測炎性反應(yīng)活動及判斷嚴(yán)重程度，但臨床實(shí)用價值還有待進(jìn)一步行大樣本研究。

參考文獻(xiàn)

1中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病學(xué)組. 炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年, 廣州). 中華消化雜志, 2012, 32: 796-813.

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收稿日期：(2014-10-23)

(本文編輯：林磊)