彭建瓊629200四川省射洪縣人民醫(yī)院

大腸桿菌檢驗(yàn)方法的探究與分析

彭建瓊
629200四川省射洪縣人民醫(yī)院

目的：探討不同檢驗(yàn)方法對(duì)大腸桿菌檢出率的影響。方法：分別采用一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法、離心-雙重濾膜法檢測(cè)模型藥物呋喃唑酮片的大腸桿菌，觀察檢出率。結(jié)果：一次離心法：膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，無氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出；二次離心法和離心-濾膜法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出；離心-雙重濾膜法：膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可觀察到明顯的菌落。結(jié)論：與其他方法相比，離心-雙重濾膜法對(duì)大腸桿菌的檢出率較高，同時(shí)操作更加簡便。

大腸桿菌；檢驗(yàn)方法；呋喃唑酮片

大腸菌群是一種革蘭陰性菌，屬于兼具需氧和厭氧性的無芽孢桿菌，能夠發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。這種菌主要存在于人類及其他恒溫動(dòng)物的糞便中，因此需要通過檢測(cè)大腸桿菌情況來判斷食物、藥品等是否受到糞便的污染，是口服藥物的常規(guī)必須檢測(cè)的項(xiàng)目之一。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗(yàn)方法，檢測(cè)靈敏度有所不同。呋喃唑酮片是一種常用于治療由大腸桿菌、痢疾桿菌引發(fā)的腸炎及菌痢等疾病的抗菌藥[1]。由于其的抗菌特性，常規(guī)檢驗(yàn)方法難以檢測(cè)出呋喃唑酮片中的大腸桿菌。因此本文以呋喃唑酮片為模型藥物，考察一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法四種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢測(cè)大腸桿菌的情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

選取規(guī)格100mg/片的呋喃唑酮片；采用兩種不同規(guī)格的混合纖維素酯微孔濾膜，孔徑分別為1.20μm和0.45μ m；選用中國藥品生物制品檢定所提供的含伊紅美藍(lán)（eosinmethyleneblue，EMB）瓊脂的大腸桿菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基，以及膽鹽乳糖增菌液；大腸桿菌使用CMCC（B）44102。

方法：①供試液的制備：取呋喃唑酮片與大腸桿菌CMCC（B）適量，制成含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液，待用。②一次離心法：將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心（3000/min，30min），取上清液適量，用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象；另取上清液，接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行平板分離檢驗(yàn)，培養(yǎng)兩周后，觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。③二次離心法：將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心（3000/min，30min），充分取上清液，再次離心（3000/min，30min），取上清液適量，用于檢驗(yàn)。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h，觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象；另取上清液適量，接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上[2]，進(jìn)行平板分離檢驗(yàn)，培養(yǎng)兩周后，觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。④離心-濾膜法：取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量，離心（3000/min，30min），取上清液，經(jīng)0.45μm混合纖維素酯微孔濾膜過濾后，將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。取所得溶液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象；另取部分溶液接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行平板分離檢驗(yàn)，培養(yǎng)兩周后，觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。⑤離心-雙重濾膜法：取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量，離心（3000/min，30min），取上清液，分別依次經(jīng)3.0μm和0.45μm孔徑的混合纖維素酯微孔濾膜過濾后，將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗(yàn)。取適量溶液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現(xiàn)渾濁和產(chǎn)氣現(xiàn)象；另取部分溶液接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行平板分離檢驗(yàn)，培養(yǎng)2周后，觀察培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落生長情況。

觀察指標(biāo)：根據(jù)膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)判斷大腸桿菌的檢測(cè)。膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)中，若增菌48h后增菌液出現(xiàn)渾濁（+）和產(chǎn)氣現(xiàn)象（+），則認(rèn)為檢出大腸桿菌（+/+），否則為未檢出（+/-、-/+或-/-）；伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)中，培養(yǎng)2周后，若培養(yǎng)基上產(chǎn)生有金屬光澤的紫色菌落，則認(rèn)為有大腸桿菌檢出（+），否則為未檢出（-）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，若P＜0.05則認(rèn)為組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一次離心法：膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，無氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出，認(rèn)為未檢出大腸桿菌；二次離心法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出；離心-濾膜法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產(chǎn)生[3]，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基無菌落長出；離心-雙重濾膜法：膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產(chǎn)生，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可觀察到明顯的菌落。采用4種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)呋喃唑酮片大腸桿菌的結(jié)果，見表1。

表1 采用4種不同的大腸桿菌檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)呋喃唑酮片大腸桿菌結(jié)果比較

討論

人們服用被糞便污染的食品及藥品后，有被其中可能存在的腸道致病菌等病原微生物感染的危險(xiǎn)，因此常通過檢測(cè)大腸桿菌用來判斷食品或藥品等是否被糞便污染[4]。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗(yàn)方法，但對(duì)于呋喃唑酮片這類本身具有抑菌特性的抗菌藥物來說，常規(guī)檢測(cè)方法往往難以檢測(cè)出其中含有的大腸桿菌。本實(shí)驗(yàn)中，一次離心法、二次離心法和離心-濾膜法，膽鹽乳糖增菌液試驗(yàn)和伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)均認(rèn)為未檢出大腸桿菌[5]，其中，一次離心法膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，而二次離心法中增菌液澄清，加之兩種方法都沒有檢測(cè)到氣體產(chǎn)生，因此并不能認(rèn)為一次離心法有大腸桿菌檢出，這種渾濁可能與離心不完全有關(guān)。4種檢測(cè)方法中，只有離心-雙重濾膜法試驗(yàn)均呈陽性，且伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基中可觀察到明顯的深紫色、有金屬光澤的大腸桿菌菌落，認(rèn)為有大腸桿菌檢出[6]，可見離心-雙重濾膜法更適用于對(duì)呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢測(cè)。因?yàn)殡x心-雙重濾膜法經(jīng)離心和兩次濾膜過濾，使呋喃唑酮的藥物濃度降低至其有效抑菌濃度之下[7]，因此檢測(cè)大腸桿菌的靈敏度更高。所以將離心-雙重濾膜法用于呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢驗(yàn)具有一定的應(yīng)用前景，有待進(jìn)一步的研究。

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圖2

圖3

圖4

討論

上述幾種情況在臨床檢驗(yàn)工作中比較常見，我們通過對(duì)血液分析儀結(jié)果顯示的數(shù)據(jù)、圖形和報(bào)警進(jìn)行分析，對(duì)顯示的異常情況進(jìn)行分析，尋找原因，防止差錯(cuò)的發(fā)生。這就要求檢驗(yàn)操作人員嚴(yán)格執(zhí)行儀器操作規(guī)程，掌握儀器的工作原理和一定的臨床知識(shí)。血液分析儀欲獲得準(zhǔn)確、可比的結(jié)果，除按照規(guī)定校準(zhǔn)外，還需要做好日常的質(zhì)量控制[2]，使檢驗(yàn)的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，才能在疾病的診斷和治療中發(fā)揮最大作用。

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Explorationandanalysisofthemethodfortheinspectionofescherichiacoli

PengJianqiong
ThePeople'sHospitalofShehongCounty,SichuanProvince629200

Objective：Toinvestigatetheeffectofdifferenttestmethodsonthedetectionrateofescherichiacoli.Methods：One centrifugalmethod,twocentrifugalmethod,thecentrifugalfiltrationmembranemethodandthecentrifugaldoublefiltration membranemethodwereusedtodetecttheescherichiacoliinfurazolidonetablet.Results：Inonecentrifugalmethod,theincreasing bacterialliquidofbilesaltlactosewasslightlyturbid,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadno bacterialcolonylength.Intwocentrifugalmethodandthecentrifugalfiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidof bilesaltlactosewasclear,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadnobacterialcolonylength.Inthe centrifugaldoublefiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidofbilesaltlactosewasturbid,andtherewasgas, culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadobviouscolony.Conclusion：Comparedwithothermethods,thedetectionrateof thecentrifugaldoublefiltrationmembranemethodforescherichiacoliwashigh,andtheoperationwasmoreconvenient.

Escherichiacoli；Testmethod；Furazolidonetablet

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.70