培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠的作用

霍穎浩王進(jìn)1張春霞2

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北石家莊050000)

摘要〔〕目的研究培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠的作用。方法選取72只小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)抽取12只作為正常對(duì)照組，60只制造帕金森病動(dòng)物模型。采用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)制作帕金森病動(dòng)物模型，并隨機(jī)分為模型組、多巴絲肼組、0.6 g/kg培元通腦組、1.2 g/kg培元通腦組及1.8 g/kg培元通腦組，每組12只。模型組不給予干預(yù)措施，其余各組根據(jù)組別分別給予生理鹽水、多巴絲肼及不同劑量培元通腦膠囊處理。比較各組帕金森病小鼠活動(dòng)能力、行為學(xué)、爬桿時(shí)間及紋狀體內(nèi)DOPAC、DA與HVA水平變化。結(jié)果MPTP誘發(fā)的帕金森病模型組小鼠活動(dòng)能力、行為學(xué)及爬桿時(shí)間指標(biāo)水平明顯低于正常組；與模型組帕金森病小鼠比較，培元通腦組帕金森病小鼠活動(dòng)能力、行為學(xué)及爬桿時(shí)間均有所改善，紋狀體內(nèi)DOPAC、DA與HVA水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)論培元通腦膠囊能夠有效改善MPTP對(duì)小鼠紋狀體造成的損傷影響，減輕盤(pán)錦森小鼠震顫癥狀持續(xù)時(shí)間，促進(jìn)小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA與HVA水平升高，是一種有效治療帕金森病的藥物。

關(guān)鍵詞〔〕帕金森；培元通腦膠囊；紋狀體

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R588〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：河北省衛(wèi)計(jì)委青年科技課題(No.20110368)

1藥學(xué)部2腎內(nèi)科

第一作者：霍穎浩(1978-)，男，主治醫(yī)師，主要從事腦血管疾病、老年病研究。

帕金森病是由中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生變性壞死引起的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病〔1〕，起病隱匿、病程進(jìn)展較慢〔2〕，主要病理改變?yōu)槎喟桶纺苌窠?jīng)元壞死，導(dǎo)致紋狀體內(nèi)多巴胺含量減少〔3〕，是遺傳易感性、年齡老化、環(huán)境因素共同作用的結(jié)果〔4〕。目前，臨床治療帕金森病常用方法為多巴絲肼等西藥治療，但不良反應(yīng)較多，嚴(yán)重者可發(fā)生血液及淋巴系統(tǒng)疾病〔5〕。培元通腦膠囊是由何首烏、熟地黃、鹿茸、龜甲及天冬等多種成分構(gòu)成的中藥制劑〔6〕，具有益腎填精、熄風(fēng)通絡(luò)之效。本研究探討培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠的作用。

1材料與方法

1.1藥物與試劑1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，培元通腦膠囊(河南羚銳制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20000022)，多巴絲肼片(上海羅氏制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H99010318)，所用酸、鹽等試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取72只SPF級(jí)C57BL 6J小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，7～9周齡，體重19～21 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由河北醫(yī)科大學(xué)提供。采取分籠自由進(jìn)食、飲水飼養(yǎng)方式，自控日光燈照射維持晝夜交替規(guī)律，每天早晨7∶00開(kāi)啟日光燈，晚上7∶00關(guān)閉日光燈，室內(nèi)溫度保持在(21±2)℃，濕度控制在50%～60%。

1.3器材Vertex Sti P5000高效液相色譜儀購(gòu)自上海禾工科學(xué)儀器有限公司，波長(zhǎng)范圍190～700 nm。

1.4制造動(dòng)物模型與給藥正常組小鼠不給予任何處理，其余小鼠腹腔注射MPTP制造帕金森病模型，給藥量為25 mg/kg，連續(xù)給藥7 d。正常組小鼠為空白對(duì)照，腹腔注射生理鹽水。模型組小鼠作為病理對(duì)照，同樣腹腔注射生理鹽水。多巴絲肼組給予多巴絲肼片灌胃治療，給藥量為0.25 g/kg；培元通腦組取3個(gè)劑量，分別為0.6、1.2、1.8 g/kg，連續(xù)給藥21 d，于第21天給藥后測(cè)定各組小鼠行為學(xué)變化。

1.5觀察指標(biāo)(1)小鼠活動(dòng)能力檢測(cè)方法〔7〕：將小鼠放置在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)盒中，自由活動(dòng)5 min后，計(jì)數(shù)3 min內(nèi)小鼠直立次數(shù)、理毛次數(shù)及活動(dòng)軌跡與試驗(yàn)盒場(chǎng)地格子的交點(diǎn)數(shù)。(2)小鼠行為學(xué)檢測(cè)〔7〕：小鼠持續(xù)劇烈的全身震顫為5分；四肢及頭部表現(xiàn)連續(xù)顫動(dòng)為4分；呈明顯間斷性顫動(dòng)為3分；僅頭部表現(xiàn)間斷性顫動(dòng)為2分；偶爾觀察到肌肉顫動(dòng)，但頭部無(wú)明顯顫動(dòng)表現(xiàn)為1分；無(wú)震顫現(xiàn)象為0分。(3)小鼠爬桿活動(dòng)〔7〕：自制長(zhǎng)度為40 cm、直徑1.5 cm的長(zhǎng)桿，一端固定一個(gè)直徑為10 cm的軟木球，為增加摩擦可將長(zhǎng)桿用紗布包纏，固定軟木球一端向上，將小鼠頭朝上放置于靠近軟木球端，觀察小鼠自起始處至軟木球折返長(zhǎng)桿底部所需時(shí)間〔8〕。(4)小鼠紋狀體內(nèi)3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、多巴胺(DA)及3-甲氧基4-羥基苯乙酸(HVA)水平檢測(cè)〔7〕：帕金森病小鼠活動(dòng)能力、行為學(xué)及爬桿指標(biāo)檢測(cè)完成后，將小鼠麻醉處死，取小鼠頭部置于預(yù)先準(zhǔn)備好的冰盒中，剪開(kāi)頭部取出紋狀體部位并稱重，轉(zhuǎn)移至1.5 ml EP管中，向管中加入預(yù)冷0.15 mol/L高氯酸0.6 ml，二羥基苯甲胺氫溴酸鹽0.4 ml，高壓雙蒸水0.4 ml，經(jīng)超聲破碎5 s，4℃條件下12 000 r/min離心25 min，取上清液采用高效液相色譜儀分析紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS17.0軟件行F檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠活動(dòng)能力的影響模型組帕金森病小鼠直立、理毛及活動(dòng)軌跡與格子交點(diǎn)數(shù)指標(biāo)與正常組比較明顯降低，多巴絲肼組及不同給藥量培元通腦組帕金森病小鼠各指標(biāo)與模型組比較明顯改善，與模型組帕金森病小鼠活動(dòng)能力指標(biāo)比較，培元通腦組帕金森病小鼠活動(dòng)能力指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

永嘉水則云：平字上高七寸合開(kāi)陡門(mén)，至平字諸鄉(xiāng)合宜，平字下低三寸合閘陡門(mén)。規(guī)定漲水淹沒(méi)“開(kāi)”字便開(kāi)閘放水,以免農(nóng)田受災(zāi)；落水露出“平”字就關(guān)閉閘門(mén)，進(jìn)行蓄水，維持溫瑞平原農(nóng)業(yè)、百姓生活用水。通常閘工將根據(jù)閘前水位變化，嚴(yán)格參照此規(guī)定開(kāi)閉閘門(mén)。由此可以斷定，“開(kāi)”字的頂部高程就是千年前溫瑞塘河的警戒水位，“閘”字的頂部高程為正常水位，古人在1100年前就已掌握了當(dāng)?shù)厮囊?guī)律，并能根據(jù)水情進(jìn)行水閘調(diào)節(jié)。

2.2培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠行為學(xué)的影響與模型組震顫癥狀評(píng)分比較，多巴絲肼組及不同給藥量培元通腦組震顫癥狀評(píng)分均明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠爬桿活動(dòng)的影響與模型組帕金森病小鼠爬桿時(shí)間比較，多巴絲肼組及不同給藥量培元通腦組帕金森病小鼠爬桿時(shí)間均縮短(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1　培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠

表2　培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠行為

2.4培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平的影響見(jiàn)表3。模型組帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平與正常組小鼠各指標(biāo)比較均顯著降低；與模型組帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA比較，多巴絲肼組及不同給藥量培元通腦組相應(yīng)指標(biāo)水平均有所改善，且培元通腦組隨著治療給藥量增加，帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平逐漸升高(P<0.05)。

表3　培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、

3討論

帕金森病是我國(guó)常見(jiàn)老年神經(jīng)系統(tǒng)疾病〔8，9〕。帕金森病患者會(huì)發(fā)生震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩及動(dòng)作協(xié)調(diào)性降低等癥狀，可導(dǎo)致患者生活能力明顯下降，嚴(yán)重者生活不能自理〔10〕。目前，帕金森病發(fā)病原因尚未明確，臨床治療帕金森病主要采取藥物治療，常用藥物有抗膽堿、金剛烷胺及左旋多巴等，通過(guò)提高多巴胺效應(yīng)、促進(jìn)神經(jīng)末梢合成并釋放多巴胺或使用多巴胺前體在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為多巴胺發(fā)揮替代功效，以實(shí)現(xiàn)治療帕金森病的目的〔11〕。但長(zhǎng)期西藥治療，患者不良反應(yīng)增加〔12〕。培元通腦膠囊是由熟地黃、龜甲、肉桂及炙甘草等13味中藥材研制而成的中藥制劑，具有益腎填精、熄風(fēng)通絡(luò)功效。

本研究結(jié)果顯示，MPTP是一種嗜神經(jīng)毒性物質(zhì)，通過(guò)對(duì)線粒體中呼吸鏈酶復(fù)合體產(chǎn)生抑制作用，減少ATP合成，并產(chǎn)生活性氧基團(tuán)致使細(xì)胞凋亡，誘發(fā)小鼠中腦黒質(zhì)紋狀體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元變性壞死，形成帕金森病動(dòng)物模型。多巴絲肼是帕金森病治療常用藥物，由此可以認(rèn)為培元通腦膠囊對(duì)帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元損傷具有改善功效。培元通腦膠囊能夠緩解帕金森病癥狀表現(xiàn)，改善帕金森病引起的多巴胺能神經(jīng)損傷病變程度。帕金森病小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平顯著降低，培元通腦組小鼠紋狀體內(nèi)DOPAC、DA及HVA水平顯著升高，說(shuō)明培元通腦膠囊對(duì)帕金森病多巴胺能神經(jīng)元損傷具有恢復(fù)作用，促進(jìn)多巴胺合成，減輕多巴胺缺乏引起的震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩及協(xié)調(diào)性降低等帕金森病癥狀。

4參考文獻(xiàn)

1劉重斌，王瑞，陸峰彬，等.松樹(shù)皮提取物對(duì)帕金森模型小鼠行為損傷及氧化應(yīng)激的作用〔J〕.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013；35(6)：587-93.

2何虹，王松海，李雪芬，等.二苯乙烯苷通過(guò)抑制ROS減輕MPTP對(duì)帕金森病小鼠的神經(jīng)毒性作用〔J〕.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2013；29(5)：531-6.

4范麗，楊新玲.新疆地區(qū)帕金森病患者發(fā)病因素〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2015;35(6)：1685-7.

5都艷玲，陳孛玉，張榮懷，等.小鼠帕金森病模型的行為學(xué)及組織病理學(xué)改變的觀察分析〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013;13(15)：2865-9.

6金亮亮，楊文燕.培元通腦膠囊治療老年眩暈46例〔J〕.中國(guó)民間療法，2013;21(1)：41-2.

7沈熊，馬海濱，厲璐帆，等.復(fù)方海蛇膠囊對(duì)帕金森病小鼠的作用〔J〕.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2010;15(9)：1023-6.

8周小平，李學(xué)忠，陳曉鵬，等.丙戊酸聯(lián)合碳酸鋰治療帕金森病模型小鼠的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.江蘇醫(yī)藥，2012;38(4)：396-9.

9許璟，徐盛權(quán)，梁潔，等.尼克酰胺對(duì)帕金森病模型小鼠的保護(hù)作用〔J〕.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012;41(2)：146-52.

10Lieu CA，Chinta SJ，Rane A，etal.Age-related behavioral phenotype of an astrocytic monoamine oxidase-B transgenic mouse model of Parkinson's disease〔J〕.PLoS One，2013;8(1)：e54200.

11陳敏，黃雪芳，葉俊，等.綠茶多酚對(duì)帕金森病小鼠多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)作用研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2013;42(7)：721-3.

12周波，文敏，何宇紅，等.依達(dá)拉奉對(duì)帕金森病小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)影響〔J〕.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2012;29(4)：246-8.

〔2015-07-16修回〕

(編輯曲莉)