泄熱一號顆粒質(zhì)量研究

劉恬佳1，李志寶2，于秀華1*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130021；2.通藥制藥集團(tuán)股份有限公司，吉林 通化，134000)

摘要：目的制定制劑泄熱一號顆粒的質(zhì)量控制指標(biāo)。方法對制劑中膽南星、瓜蔞、枳實(shí)3味藥材采用TLC法進(jìn)行定性鑒別，大黃藥材中的大黃素和大黃酚總量采用RP-HPLC法測定。結(jié)果TLC斑點(diǎn)分離好、清晰、陰性無干擾；大黃素、大黃酚分別在0.031 68～0.316 8 μg、0.032 896～0.328 96 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r均為0.999 9，平均回收率分別為98.17%、99.34%，RSD分別為1.53%、2.88%。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)所用方法對制劑的質(zhì)量能夠達(dá)到有效控制。

關(guān)鍵詞：泄熱一號顆粒；質(zhì)量研究；RP-HPLC

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.08.027

中圖分類號：R743.33文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)08-0844-03

基金項(xiàng)目:吉林省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(2012-060)。

作者簡介:劉恬佳(1991-)，女，碩士研究生，主要從事中藥學(xué)研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：王丹2014-04-27)

*通信作者:于秀華，電子信箱-zyh1955@163.com

Quality Research of Xiereyihao Particles

LIU Tianjia1,LI Zhibao2,YU Xiuhua1*

(1.Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130021,China;

2.Tongyao Pharmaceutical Group Limited Ltd, Tonghua,134000,Jilin Province China)

Abstract:ObjectiveStudy on the quality research of hospital preparations xiereyihao particles.MethodsBy thin layer chromatography bile arisaema,trichosanthis fructus,fructus aurantii immaturus were differentiated,and to develop a HPLC method for determination of emodin,chrysophanol in rhubarb.ResultsThe TLC spots developed were quite clear；emodin and chrysophanol were in good linearity over the ranges of 0.031 68～0.316 8 μg、0.032 896～0.328 96 μg respectively,r were 0.999 9,the average recoveries were 98.17%、99.34%,with RSD of1.53%、2.88% respectively.ConclusionThis method can be used for quality control of hospital preparations xiereyihao particles.

Keywords:xiereyihao particles;quality research;RP-HPLC

泄熱一號顆粒是由枳實(shí)、大黃等藥組成，經(jīng)過提取分離后制成的制劑。具有通腑，化痰，泄熱的作用，主治中風(fēng)病痰熱腑實(shí)證。證見：急性起病，突然半身不遂，口舌歪斜，言語謇澀或不語，偏身麻木，甚則神昏，伴有各種其他臨床癥狀等。為了進(jìn)一步提高制劑質(zhì)量控制水平，本實(shí)驗(yàn)增加了膽南星、瓜蔞、枳實(shí)的薄層色譜鑒別方法，采用高效液相色譜法建立了大黃中大黃素和大黃酚含量測定方法。為泄熱一號顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)，使制劑質(zhì)量得到更好控制。

1儀器與材料

LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津)，SPD-10AvP檢測器。標(biāo)準(zhǔn)品:辛弗林、豬去氧膽酸、大黃素、大黃酚對照品，大黃對照藥材、膽南星對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所。試劑中TLC所用均為分析純，HPLC測定均為色譜純，水為超純水。

2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別

注：Ⅰ.辛弗林對照品；Ⅱ.樣品1；Ⅲ.樣品2；Ⅳ.樣品3；Ⅴ.陰性 圖1　枳實(shí)TLC圖

2.1.2瓜蔞取本品5 g，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取瓜蔞對照藥材2 g ，按照上述方法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(12∶1∶0.1∶0.1)為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。分別置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)。見圖2。

注：Ⅰ.瓜蔞對照藥材；Ⅱ.樣品1；Ⅲ.樣品2；Ⅳ.樣品3；Ⅴ.陰性 圖2　瓜蔞TLC圖

2.1.3膽南星取本品5 g，研細(xì)，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干,殘?jiān)尤爰状? mL使溶解，作為供試品溶液[3]。另取膽南星對照藥材2 g，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解,作為對照藥材溶液。再取豬去氧膽酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作為對照品溶液[4]。吸取供試品溶液4 μL、對照品溶液和對照藥材溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙醚-三氯甲烷-冰醋酸(2∶2∶1)為展開劑，以10%磷鉬酸乙醇溶液為顯色劑[5],噴霧均勻，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果表明，供試品色譜在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上分別有暗綠色斑點(diǎn)。見圖3。

注：Ⅰ.豬去氧膽酸對照品；Ⅱ.膽南星對照藥材；Ⅲ.樣品1；Ⅳ.樣品2；Ⅴ.樣品3；Ⅵ.陰性 圖3　膽南星TLC圖

2.2大黃素和大黃酚總量含量測定

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用WondaSil C18Suoerb柱；以甲醇-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相；檢測波長為254 nm。

2.2.2對照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素、大黃酚對照品適量，分別用甲醇制成每1 mL含16 μg的溶液，即得[6]。

2.2.3供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品適量，研細(xì)，取約1 g，分析天平精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，加蓋密閉，稱定重量，置水浴中加熱回流50 min，置冰浴中冷卻，取出，擦干，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續(xù)濾液2 mL，置圓底燒瓶中，水浴上揮去溶劑，加10%鹽酸溶液20 mL，超聲使溶解，再加三氯甲烷20 mL，水浴中加熱回流90 min，置冰浴中冷卻，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取下層溶液，上層液再用三氯甲烷振搖提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[7]。

2.2.4線性關(guān)系的考察設(shè)定對照品溶液進(jìn)樣體積分別為2、5、10、15、20 μL,注入液相色譜儀，測定。大黃素回歸方程為Y=4 369 600.97X-1 857.585 34，r=0.999 9；線性范圍：0.031 68～0.316 8 μg。大黃酚回歸方程為Y=5 478 754.239X-1 134.317 2，r=0.999 9；線性范圍：0.032 896～0.328 96 μg。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)依上述色譜條件，分別在0、4、8、12、24、48 h測供試品溶液吸收峰峰面積，大黃素和大黃酚的RSD為1.06%和0.76%。

2.2.6中間精密度試驗(yàn)將供試品溶液分別用不同儀器、不同人員、不同時(shí)間重復(fù)測定,大黃素和大黃酚的 RSD分別為0.61%和0.46%。

2.2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)將同一批號的樣品6份，按照2.2.3項(xiàng)下操作制得供試品溶液I～Ⅵ，依法進(jìn)行測定，大黃素和大黃酚的RSD為1.03%和1.15%。

假定PDM運(yùn)行時(shí),輸出電流為Iout,在輸出電流的給定量上,疊加擾動電流Iinj,并且定義擾動系數(shù)為k,擾動系數(shù)滿足式(5):

2.2.8加樣回收率試驗(yàn)取含量經(jīng)過測定后的樣品，研細(xì)，取約0.5 g(大黃素和大黃酚含量分別為0.337 mg/g和0.590 mg/g)，共6份，精密稱定，再分別精密加入大黃素對照品溶液、大黃酚對照品溶液各1 mL(對照品溶液濃度：大黃素0.168 5 mg/mL，大黃酚0.286 5 mg/mL)，按2.2.3方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果表明大黃素的平均回收率為98.17%，大黃酚的為99.34%，RSD分別為1.53%、2.88%。

2.2.9樣品含量測定按2.2.3方法制備供試品溶液，取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，分別進(jìn)樣，測定大黃素與大黃酚總量平均為1.21 mg/g。

3討論

3.1薄層鑒別方法學(xué)考察按照中國藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)考察有關(guān)規(guī)定，分別對制劑中專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好的枳實(shí)、膽南星、大黃的薄層鑒別進(jìn)行耐用性考察，重點(diǎn)考察了高溫、高濕、低溫、不同廠家薄層板、不同點(diǎn)樣方式等項(xiàng)目，結(jié)果表明，展開條件穩(wěn)定，可以用于制劑質(zhì)量的控制。

3.2供試品溶液制備方法的選擇分別用回流法和超聲法提取大黃中的有效成分，通過測定后顯示，回流法對制劑中有效成分提取更充分，同時(shí)中國藥典現(xiàn)行版也采用回流法測定大黃藥材中的含量，因此，大黃中含量測定時(shí)供試品溶液制備采用回流法。

3.3測定波長及流動相的選擇按供試品溶液制備時(shí)取樣量，折算成處方中除大黃外其他藥材的取樣量，按上述方法制成空白溶液。取一定量的對照品溶液、供試品溶液及空白溶液，以甲醇和0.1%磷酸溶液的不同比例為流動相進(jìn)行測定，試驗(yàn)結(jié)果確定波長為254 nm,流動相比例為甲醇占80%，0.1%磷酸占20%。同時(shí)HPLC圖顯示對照品色譜峰相對保留時(shí)間處供試品溶液也有相同的吸收峰，陰性溶液沒有，表明此方法可行。

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