■吳莉芳 周 鍇 瞿子惠 楊 蘭 楊歡歡 黃 權(quán) 王洪鶴

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118；2.廈門(mén)海博豐水產(chǎn)科技有限公司，福建廈門(mén) 361026）

魚(yú)粉是水產(chǎn)動(dòng)物飼料中必需氨基酸和蛋白質(zhì)的主要來(lái)源。但隨著高密度集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，魚(yú)粉的需求量增加，而魚(yú)粉資源短缺，尋求魚(yú)粉蛋白源替代品已成為國(guó)內(nèi)外水產(chǎn)養(yǎng)殖工作者的主要研究課題[1]。大豆蛋白源是優(yōu)質(zhì)的植物蛋白源，在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中被廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)外學(xué)者在大豆蛋白源替代魚(yú)粉蛋白源方面，進(jìn)行了大量研究，如：虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[2-3]、大西洋鮭(Salmo salar L)[4-5]等魚(yú)類(lèi)研究的較為深入。但是，大豆蛋白源因其加工工藝的不同，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的影響也存在較大的差異。劉興旺等[6]研究了大豆?jié)饪s蛋白（Soy protein concentrate，SPC）替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆（Scophthatmus maximus L）攝食、生長(zhǎng)及體成分的影響，結(jié)果表明，在大菱鲆的配合飼料中，隨著大豆?jié)饪s蛋白替代水平的升高，大菱鲆的攝食率、特定生長(zhǎng)率均顯著降低，但是，大豆?jié)饪s蛋白替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)20%、40%、60%時(shí)，對(duì)其蛋白質(zhì)效率和飼料效率的影響不明顯。吳莉芳等[7]在埃及胡子鲇（Clarias lazera）的配合飼料中，利用去皮豆粕不同比例替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)，研究了去皮豆粕替代魚(yú)粉對(duì)其消化酶活力和腸道組織的影響，結(jié)果表明，當(dāng)去皮豆粕替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)的45%和60%時(shí)，埃及胡子鲇的前腸和后腸蛋白酶活力顯著低于對(duì)照組，且腸道結(jié)構(gòu)完整性被破壞，部分腸絨毛脫落。徐奇友等[8]研究了大豆分離蛋白（Soy protein isolate，SPI）替代魚(yú)粉對(duì)哲羅魚(yú)（Hucho taimen）稚魚(yú)生長(zhǎng)、體成分和血液生化指標(biāo)的影響，結(jié)果表明，隨著飼料中大豆分離蛋白替代比例的增加，哲羅魚(yú)死亡率迅速增加，增重率下降。Barnes等[9]在虹鱒的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)發(fā)酵豆粕替代35.0%以上魚(yú)粉時(shí)會(huì)影響虹鱒的生長(zhǎng)性能。向梟等[10]在齊口裂腹魚(yú)（Schizothorax prenanti）幼魚(yú)的飼料中，利用豆粕不同比例（0、20%、40%、60%、80%、100%）替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)豆粕替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)的60%時(shí)，齊口裂腹魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率均達(dá)到最高。

黃金鱸(Perca flavescens)屬鱸形目(Perciformes)，鱸科(Percidae)，鱸屬(GenusPerca)，又稱(chēng)“絲綢鱸”，是北美地區(qū)最受歡迎的淡水名貴魚(yú)類(lèi)之一[11]。由于具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值高、體形優(yōu)美、適應(yīng)性強(qiáng)、病害少等特點(diǎn)，是網(wǎng)箱、池塘、工業(yè)化養(yǎng)魚(yú)的主要對(duì)象。目前，關(guān)于黃金鱸肌肉營(yíng)養(yǎng)成分與品質(zhì)評(píng)價(jià)[12]、溫度和pH值對(duì)黃金鱸消化酶活力的影響[13]、黃金鱸的人工繁殖[14]、苗種培育[15]及食用魚(yú)養(yǎng)殖[16]等方面已有報(bào)道，而關(guān)于黃金鱸配合飼料方面，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。消化酶活力的研究能夠?yàn)轸~(yú)類(lèi)配合飼料的研制提供一定的理論依據(jù)。因此，本研究通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)，在黃金鱸配合飼料中，利用豆粕和全脂豆粉部分替代魚(yú)粉蛋白質(zhì)，探討不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸蛋白酶及淀粉酶活力的影響，旨在為合理開(kāi)發(fā)利用大豆蛋白源及優(yōu)化黃金鱸飼料配方提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

飼料配方及主要營(yíng)養(yǎng)成分如表1所示，共配制3種等氮(粗蛋白質(zhì)42.0%)、等能(總能為20.0 MJ/kg)的配合飼料，其中Diet 1為對(duì)照組，以魚(yú)粉為主要蛋白源，Diet 2是利用豆粕替代20%魚(yú)粉蛋白質(zhì)，Diet 3是利用全脂豆粉替代20%魚(yú)粉蛋白，Diet 1、Diet 2組飼料分別以魚(yú)油和玉米油[m(魚(yú)油)∶m(玉米油)=1∶1]為脂肪源，Diet 3組沒(méi)有添加魚(yú)油和玉米油。面粉和糊精為糖源，纖維素為填充物，將所有原料粉碎后，過(guò)60目篩，各原料按配方比例稱(chēng)重后混合均勻，加適量的水，利用電動(dòng)絞肉機(jī)，擠壓成粒徑為2.0 mm的顆粒飼料，于60℃烘箱中烘干后，置于-4℃冰柜中，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)黃金鱸魚(yú)種購(gòu)自浙江省臺(tái)州市天臺(tái)縣龍溪淡水養(yǎng)殖場(chǎng)，平均體質(zhì)量(28.71±0.08)g/尾。為了使試驗(yàn)魚(yú)逐漸適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室生態(tài)系統(tǒng)的環(huán)境條件及試驗(yàn)所用飼料，在正式試驗(yàn)分組前，進(jìn)行為期15 d的預(yù)飼試驗(yàn)，在預(yù)飼試驗(yàn)過(guò)程中，以對(duì)照組飼料，飽食投喂黃金鱸魚(yú)種。

表1 飼料配方及主要營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)條件

設(shè)置3個(gè)處理組，Diet 1為對(duì)照組，Diet 2為豆粕組，Diet 3為全脂豆粉組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)黃金鱸魚(yú)種20尾。試驗(yàn)于2013年9月26日～11月20日在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室的生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，共計(jì)8周。

試驗(yàn)所用玻璃缸規(guī)格為80 cm×60 cm×50 cm，水溫控制在22～24℃，pH值為 7.0～8.0，利用增氧氣泵連續(xù)充氣，DO在5.0 mg/l以上，氨氮濃度小于0.3 mg/l，亞硝酸鹽濃度小于0.08 mg/l。

1.4 魚(yú)體消毒

預(yù)飼試驗(yàn)前，利用濃度為4%的食鹽水溶液，藥浴黃金鱸魚(yú)種5 min。

1.5 飼養(yǎng)管理

1.5.1 飼料的投喂

每天投喂3次，投喂時(shí)間為07:00、12:00、17:00；以4%～6%的投餌率，采用人工手撒的方法，進(jìn)行飼料的投喂。

1.5.2 水質(zhì)的管理

試驗(yàn)過(guò)程中，每天檢測(cè)水體的溫度、pH值、DO，每周檢測(cè)氨氮和亞硝酸鹽的含量。隔天換水1次，每次換水1/4，在整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程中，觀察魚(yú)的活動(dòng)情況。

1.6 樣品的采集與測(cè)定

生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，空腹24 h，然后從每個(gè)重復(fù)中取黃金鱸10尾，用于消化酶活力測(cè)定。蛋白酶和淀粉酶活力測(cè)定參照吳莉芳等[17]方法進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.5軟件，對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，多重比較采用Duncan′s分析組間差異顯著性。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，顯著性水平設(shè)定為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸蛋白酶活力的影響(見(jiàn)表2)

表2 飼料中不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸蛋白酶活力的影響(U/mg protein)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

表2表明，本試驗(yàn)條件下，黃金鱸胃蛋白酶活力Diet 2和Diet 3顯著低于Diet 1(P＜0.05)，而Diet 2黃金鱸幽門(mén)盲囊、肝臟、前腸及中后腸蛋白酶活力與Diet 1差異不顯著(P＞0.05)；Diet 3黃金鱸的胃、幽門(mén)盲囊、肝臟、前腸及中后腸蛋白酶活力顯著低于Diet 1(P＜0.05)。

2.2 不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸淀粉酶活力的影響（見(jiàn)表3）

表3 飼料中不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸淀粉酶活力的影響(U/mg)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

從表3可以看出，Diet1和Diet2和Diet 3黃金鱸的胃、幽門(mén)盲囊、肝臟、前腸及中后腸淀粉酶活力差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

3.1 不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸蛋白酶活力的影響

在黃金鱸配合飼料中，豆粕替代魚(yú)粉蛋白的20%組的幽門(mén)盲囊、肝臟、前腸及中后腸蛋白酶活力與對(duì)照組差異不顯著；而在黃金鱸配合飼料中，當(dāng)全脂豆粉替代魚(yú)粉20%蛋白時(shí)，其幽門(mén)盲囊、胃、肝臟、前腸及中后腸蛋白酶活力顯著低于對(duì)照組。這主要是由于全脂豆粉和豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子種類(lèi)和含量不同及飼料的適口性不同所致。本試驗(yàn)所需全脂豆粉是實(shí)驗(yàn)室自行磨制，而豆粕是大豆提取豆油后得到的副產(chǎn)物，在其加工過(guò)程中，經(jīng)過(guò)膨化和濕粕脫溶等加工工藝，導(dǎo)致對(duì)熱敏感的大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子（如：蛋白酶抑制因子、大豆凝集素等）鈍化效果較好。從趙元等[18]對(duì)不同大豆制品中主要大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，全脂豆粉中胰蛋白酶抑制因子含量51.00 U/mg，大豆抗原蛋白Glycinin含量167.67 mg/g，β-glycinin含量11.30 mg/g，大豆凝集素含量19.86 mg/g；而豆粕中胰蛋白酶抑制因子含量0.82 U/mg，大豆抗原蛋白Glycinin含量164.71 mg/g，β-glycinin含量18.46 mg/g，大豆凝集素含量5.66 mg/g。因此，豆粕中的胰蛋白酶抑制因子及大豆凝集素的含量低于全脂豆粉。胰蛋白酶抑制因子能夠與魚(yú)類(lèi)消化道蛋白酶結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，使蛋白酶失活，阻礙魚(yú)類(lèi)對(duì)飼料蛋白質(zhì)的消化吸收，從而抑制其生長(zhǎng)。大豆凝集素與腸上皮細(xì)胞結(jié)合后，導(dǎo)致其胃腸道結(jié)構(gòu)破壞，使蛋白酶活力下降，生長(zhǎng)受阻[19]。吳莉芳等[7]在埃及胡子鲇的配合飼料中，利用去皮豆粕不同比例替代魚(yú)粉蛋白，研究了對(duì)其消化酶及腸道結(jié)構(gòu)的影響，從研究結(jié)果來(lái)看，30%組、45%組和60%組的埃及胡子鲇中腸和肝胰臟蛋白酶活力顯著低于對(duì)照組，而前腸和后腸蛋白酶活力45%和60%組顯著低于對(duì)照組，豆粕組胃蛋白酶活力顯著低于對(duì)照組。

3.2 不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸淀粉酶活力的影響

魚(yú)類(lèi)的各消化器官均存在淀粉酶，魚(yú)類(lèi)的食性不同，淀粉酶的活力不同，在通常情況下，肉食性魚(yú)類(lèi)淀粉酶活力低于雜食性魚(yú)類(lèi)，雜食性魚(yú)類(lèi)低于草食性魚(yú)類(lèi)。同種魚(yú)類(lèi)的不同消化器官、不同生理階段及同一消化器官的不同部位，淀粉酶活力亦不相同。黃金鱸屬于肉食性魚(yú)類(lèi)，淀粉酶活力較低。本試驗(yàn)的研究結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。從本試驗(yàn)的研究結(jié)果來(lái)看，不同大豆蛋白源對(duì)黃金鱸的幽門(mén)盲囊、胃、肝臟、前腸及中后腸淀粉酶活力無(wú)顯著影響。本研究結(jié)果與吳莉芳等[17]對(duì)埃及胡子鲇的研究結(jié)果相類(lèi)似。錢(qián)曦等[20]在翹嘴紅鲌（Erythroculter ilishaeformis）的配合飼料中，利用豆粕不同比例（0.0%、13.5%、27.0%、40.5%、54.0%）替代魚(yú)粉蛋白，研究了豆粕替代魚(yú)粉對(duì)其消化酶活力的影響，從研究結(jié)果來(lái)看，豆粕替代魚(yú)粉對(duì)翹嘴紅鲌腸道淀粉酶活力無(wú)顯著影響。