肖會敏，劉　洋，何　悅，張　俏，趙　榮，王四旺*

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物研究所，西安　710032；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽　712000；3.陜西中藥研究所，咸陽　712000；4.陜西海天制藥有限公司，咸陽　712000)

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四季抗病毒合劑制備中連翹酯苷A和連翹酯苷B轉(zhuǎn)移率的研究

肖會敏1，劉洋2，何悅1，張俏3，趙榮4，王四旺1*

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物研究所，西安710032；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽712000；3.陜西中藥研究所，咸陽712000；4.陜西海天制藥有限公司，咸陽712000)

摘要：目的建立連翹與四季抗病毒合劑中連翹酯苷A和連翹酯苷B的含量測定方法，闡明其在連翹藥材至四季抗病毒合劑制劑間的轉(zhuǎn)移率。方法采用超快速液相色譜(UFLC)法，選取3批連翹藥材，每批對應(yīng)5批制劑。結(jié)果① 3批連翹藥材中連翹酯苷A的含量分別為12.57，20.26和18.64 mg·g-1，3批連翹藥材中連翹酯苷B的含量依次分別為2.22，3.76和3.07 mg·g-1；② 每批連翹藥材對應(yīng)5批制劑中連翹酯苷A的平均含量分別為1 129.40，1 828.30和1 666.30 μg·mL-1，每批連翹藥材對應(yīng)5批制劑中連翹酯苷B的平均含量依次分別為224.80，382.60和315.70 μg·mL-1；③ 15批制劑中連翹酯苷A和連翹酯苷B的轉(zhuǎn)移率分別為74.86%和84.95%，RSD分別為0.88%和1.43%。結(jié)論該含量測定方法具有簡便、穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確等優(yōu)點，可作為連翹與四季抗病毒合劑中連翹酯苷A和連翹酯苷B的定量方法；連翹酯苷A和連翹酯苷B的轉(zhuǎn)移率高，表明制劑制備工藝有利于2種有效成分的溶出，為保證制劑療效提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：四季抗病毒合劑；連翹酯苷A；連翹酯苷B；快速液相色譜

四季抗病毒合劑系國家CFDA批準(zhǔn)[批準(zhǔn)文號：WS-11454(ZD-1454)-2002-2012Z]生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)制劑，由連翹、魚腥草、菊花、桔梗、桑葉、荊芥等十一味中藥組成，其適應(yīng)證主要為小兒呼吸系統(tǒng)感染、手足口病[1-3]等，對小兒呼吸道病毒性感染效果顯著[4-10]。前期，我

們已證實該制劑主要含有連翹酯苷、連翹苷、甘草苷和甘草酸等成分，其中連翹酯苷A和連翹酯苷B的含量較高[11]。連翹是該制劑的君藥之一，探討其中具有抗病毒、抗菌作用的功效成分連翹酯苷A和連翹酯苷B[12-13]在制備過程中的轉(zhuǎn)移率，有助于評價制劑工藝的科學(xué)性和合理性。經(jīng)文獻檢索該制劑及其君藥連翹中主要成分連翹酯苷A和連翹酯苷B轉(zhuǎn)移率的研究未見報道。因此，筆者采用超快速液相色譜(UFLC)的方法，檢測了投料前連翹和制備成四季抗病毒合劑中的連翹酯苷A和連翹酯苷B的含量，藉此探討其轉(zhuǎn)移率，為評價該制劑工藝的科學(xué)性奠定基礎(chǔ)。

1儀器與試藥

1.1儀器島津高效液相色譜儀(Prominence UFLC)，日本島津公司；電子分析天平，型號ME235S，德國塞多利斯公司；KQ-300DE數(shù)控超聲波發(fā)生器，昆山超聲儀器有限公司。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-3.0 g·L-1磷酸水溶液溶液(B)，梯度洗脫，0～30 min，B 98%→70%；30～45 min，B 70 %→55%。記錄時間為45 min。流速：0.8 mL·min-1；柱溫：40 ℃；檢測波長：330 nm；進樣量5 μL[13]。

2.2對照品溶液的配制分別精密稱取連翹酯苷A 8.00 mg、連翹酯苷B 2.40 mg，置于2 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得連翹酯苷A與連翹酯苷B混合對照品溶液，質(zhì)量濃度分別為4 000.00和1 200.00 μg·mL-1，作為儲備液[13-14]。另分別精密稱取連翹酯苷A 20.00 mg和連翹酯苷B 4.00 mg對照品，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得連翹酯苷A和連翹酯苷B質(zhì)量濃度分別為2.00和0.40 mg·mL-1，作為加樣回收率實驗中添加的混合對照品溶液。

2.3四季抗病毒合劑供試品溶液的制備取本品1瓶，搖勻，精密量取1.00 mL，置于10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，濾過(濾膜0.22 μm)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4連翹供試品溶液的制備連翹在投料前隨機取樣，粉碎，過五號篩，取粉末0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分數(shù)為70%的甲醇15 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用體積分數(shù)為70%的甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[14-15]。

2.5陰性對照溶液的制備依據(jù)處方，制備缺少連翹藥材的制劑，再依照2.3項下方法制備連翹陰性對照溶液。結(jié)果表明，陰性對照溶液無干擾，見圖3。

2.6方法學(xué)考察

2.6.1線性關(guān)系分別精密量取儲備液0.005，0.010，0.025，0.050，0.500和1.000 mL，置于6個1 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用0.22 μm微孔濾膜濾過，進樣。以各對照品的質(zhì)量濃度(x，μg·mL-1)為橫坐標(biāo)、峰面積值(y)為縱坐標(biāo)、計算，分別得線性方程：連翹酯苷A為y1=4 647x1+63 443，線性范圍為20.00～4 000.00 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)為0.999 1；連翹酯苷B為y2=7 665x2+22 034，線性范圍為6.00～1 200.00 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)為0.999 4。結(jié)果表明，連翹酯苷A和連翹酯苷B對照品在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

隨著基礎(chǔ)建設(shè)項目的不斷推進，各類基建項目資產(chǎn)逐漸增加，管理這些資產(chǎn)需要完善的財務(wù)管理制度，當(dāng)前，我國各企業(yè)在基建項目財務(wù)管理工作中存在很多不足之處，這些問題影響著基礎(chǔ)建設(shè)的推進，亟待解決，企業(yè)應(yīng)該予以重視，建立健全基建項目的財務(wù)管理制度，提高對基礎(chǔ)建設(shè)項目的財務(wù)管理水平。

2.6.2精密度實驗精密吸取對照品溶液(量取0.025 mL儲備液加甲醇稀釋至1 mL)，重復(fù)進樣5次，測得連翹酯苷A和連翹酯苷B的相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD分別為0.85%和0.78%，結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.6.3穩(wěn)定性實驗精密吸取供試品溶液(批號20150210)，分別在第0，2，4，8，12和24 h進樣。結(jié)果顯示，連翹酯苷A和連翹酯苷B的峰面積的RSD值分別為1.12 %和1.31%，結(jié)果表明，該溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.4重復(fù)性實驗精密稱取5份樣品(批號20150210)，分別按照2.3項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果顯示，連翹酯苷A和連翹酯苷B的平均含量分別為1.826和0.389 mg·mL-1，RSD值分別為0.57%和1.74%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.6.5加樣回收率實驗精密量取四季抗病毒合劑(批號20150210，其中連翹酯苷A和連翹酯苷B分別為1.826和0.389 mg·mL-1)0.50 mL，分別添加混合對照品溶液0.40，0.50和0.60 mL，按照2.3項下方法制備供試品溶液，共6份，按照2.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果表明，該方法回收率良好。見表1。

2.6.6含量測定稱取3批連翹粉末(過五號篩)約0.5 g，精密稱定，分別按照2.4項下方法制備連翹供試品溶液；精密量取15批四季抗病毒合劑樣品1.0 mL，按照2.3項下方法制備四季抗病毒合劑供試品溶液；按照2.1項下色譜條件測定各批藥材及對應(yīng)制劑樣品中連翹酯苷A和連翹酯苷B的含量。結(jié)果見表2和圖1。每批連翹藥材對應(yīng)5批制劑中連翹酯苷A的平均含量分別為1 129.40，1 828.30和1 666.30 μg·mL-1，連翹酯苷B的平均含量分別為224.80，382.60和315.70 μg·mL-1。見表2。

表1加樣回收率測定結(jié)果

Tab.1 Results of the sample recovery test

化合物樣品體積/mL樣品原有量/mg對照品添加量/mg測定總量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%連翹酯苷A0.500.91300.8001.696597.9498.230.780.500.91300.8001.690297.150.500.91301.0001.897898.480.500.91301.0001.906799.370.500.91301.2002.096398.610.500.91301.2002.087297.85連翹酯苷B0.500.19450.1600.352798.8898.440.990.500.19450.1600.349596.880.500.19450.2000.391598.500.500.19450.2000.393299.350.500.19450.2400.429197.750.500.19450.2400.432899.29

表2連翹與四季抗病毒合劑中連翹酯苷A與連翹酯苷B的含量測定及其轉(zhuǎn)移率結(jié)果

Tab.2 Results of determination and transfer rates

(n=3)

3分析與討論

3.1檢測方法的選擇該檢測方法是在筆者前期研究的基礎(chǔ)[13]上進行了調(diào)整(即檢測時間與檢測溫度)，為了節(jié)省流動相與分析時間，把分析檢測時間定為45 min，柱溫調(diào)至40 ℃。

3.2檢測波長選擇測定2個化合物含量檢測波長的選擇，根據(jù)二極管陣列對連翹酯苷A和連翹酯苷B掃描結(jié)果最大吸收在330 nm，此處分離度大于1.5，無其他峰干擾，故選擇330 nm作為檢測波長。

3.3供試品制備方法的選擇由于中藥復(fù)方中成分眾多，各成分溶解性不一樣，依據(jù)文獻[14-15]對連翹藥材的制樣方法，采用體積分數(shù)為70%的甲醇作為溶劑，進行超聲提取30 min。作為比較曾使用制劑制備工藝作為藥材制樣方法，但兩成分的含量不及前者。

圖1UFLC圖

A.混合對照品；B.四季抗病毒合劑；C.四季抗病毒合劑(缺連翹藥材)；D.連翹藥材；1.連翹酯苷A；2.連翹酯苷B

Fig.1 UFLC chromatogram

A.mixture reference substances； B.Sijikangbingdu Mixture； C.the negative control(withoutForsythiaefructus); D.Forsythiaefructus; 1.forsythiaside A; 2. forsythiaside B

3.4轉(zhuǎn)移率比較通過3批藥材及對應(yīng)15批制劑中兩成分含量的計算比較，發(fā)現(xiàn)兩成分轉(zhuǎn)移率較高，連翹酯苷A和連翹酯苷B分別超過74%和84%。說明該制劑的制備工藝有助于連翹中連翹酯苷A和連翹酯苷B的溶出。

綜上所述，筆者建立的連翹及其復(fù)方制劑“四季抗病毒合劑”中連翹酯苷A和連翹酯苷B含量測定方法具有簡便、穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確等優(yōu)點，為提升該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進一步檢測其他功效成分奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1]許東升，張宏. 喜炎平聯(lián)合四季抗病毒合劑治療手足口病療效觀察[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2012，20(11):91.

[2]程洲全，夏維珍.手足口病56 例臨床療效觀察[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，31(2):238-239.

[3]薛玉，劉水章，毛文藝. 手足口病88例臨床觀察[J].醫(yī)學(xué)信息，2011，24(2):4330-4331.

[4]周輝煌. 四季抗病毒合劑治療幼兒急疹的療效觀察[J].醫(yī)學(xué)信息，2011，24(7):3423.

[5]彭文，陳竹，袁戈，等. 四季抗病毒合劑佐治小兒肺炎20 例[J].陜西中醫(yī)，2008，29(7):813.

[6]胡曉忠.四季抗病毒合劑治療小兒急性上呼吸道感染150例[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2011，9(21):119-120.

[7]衛(wèi)小茜，葉金風(fēng)，趙娟. 四季抗病毒合劑治療小兒急性呼吸道感染308例[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2011，9(20):63.

[8]張曼琳，起玨. 四季抗病毒合劑治療小兒上呼吸道感染30例療效觀察[J].云南中醫(yī)藥雜志，2009，30(12):41.

[9]張碧濤.四季抗病毒合劑治療小兒呼吸道感染臨床分析[J].醫(yī)學(xué)信息，2011，24(3):1103.

[10]胡華燕，許亞紅，黎娟娟，等.四季抗病毒合劑治療小兒上呼吸道感染伴發(fā)熱的療效觀察[J].醫(yī)學(xué)信息，2008，21(12):2344.

[11]肖會敏，王四旺，王劍波，等.連翹抗病毒的研究進展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，7(2):9-10.

[12]肖會敏，何悅，王四旺，等．四季抗病毒合劑的超快速液相色譜法指紋圖譜研究及4個成分含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2015，35(3): 230-233.

[13]宋小俊.連翹不同部位化學(xué)成分研究進展[J].西北藥學(xué)雜志，2014，29(2)：220-222.

[14]靖會，李教社，曹蔚，等. 高效液相色譜法測定連翹中連翹酯苷的含量高[J].西北藥學(xué)雜志，2003，18(4)：156-157.

[15]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S]. 二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：159-160.

·中藥及天然藥物·

Study on the transfer rate of forsythiaside A and forsythiaside B in the preparation of Sijikangbingdu Mixture

XIAO Huimin1，LIU Yang2，HE Yue1，ZHANG Qiao3，ZHAO Rong4，WANG Siwang1*(1.Institute of Materia Medica，School of Pharmacy，the Fourth Military Medical University，Xi′an 710032，China；2.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712000，China；3.Shaanxi Chinese Medicine Institute，Xianyang 712000，China；4.Shaanxi Haitian Pharmaceutical Limited Company，Xianyang 712000，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a UFLC method for determing the contents of forsythiaside A and forsythiaside B in Forsythiae fructus and Sijikangbingdu Mixture，and clarify their transfer rate in the preparation. MethodsUFLC analysis was adopted，then three batches of Forsythiae fructus were selected， each batch of which included 5 batches of Sijikangbingdu Mixture. ResultsThe contents of forsythiaside A in 3 batches of Forsythiae fructus were 12.57，20.26 and 18.64 mg·g-1，respectively. And the contents of forsythiaside B in three batches of Forsythiae fructus were 2.22，3.76 and 3.07 mg·g-1，respectively.The average contents of of forsythiaside A in 5 batches of Sijikangbingdu Mixture were 1 129.40，1 828.30 and 1 666.30 μg·mL-1，respectively. And the average contents of forsythiaside B in 5 batches of Sijikangbingdu Mixture were 224.80，382.60 and 315.70 μg·mL-1，respectively. The transfer rates of 15 batches of Sijikangbingdu Mixture in the preparation were 74.86%，and84.95% with RSDs 0.88%，and 1.43% respectively. ConclusionThe method is simple，stable, reliable，and accurate, and can be used as a quantitative method of forsythiaside A，forsythiaside B in Sijikangbingdu Mixture and Forsythiae fructus. The transfer rates of forsythiaside A，forsythiaside B were high in the preparation，so which provides a theoretical basis for the preparation of curative effect.

Key words:Sijikangbingdu Mixture；forsythiaside A；forsythiaside B；UFLC

收稿日期：(2015-04-18)

通信作者：*王四旺，男，教授，碩士，博士生導(dǎo)師

作者簡介：肖會敏，男，教授，在讀博士，主管藥師

基金項目：陜西省“13115”科技創(chuàng)新工程工程技術(shù)研究中心組建計劃項目(編號：2013ZDGC-01)

中圖分類號：R917

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)01-0001-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.001