李　欣，鄭少華,張沛沛，蘇　進(jìn)*

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院，西安　710061；2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，西安　710061)

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不同固體制劑中白楊素的溶出度評價

李欣1，鄭少華1,張沛沛2，蘇進(jìn)1*

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院，西安710061；2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，西安710061)

摘要：目的考察白楊素不同固體制劑的體外溶出度，并建立白楊素制劑的溶出度HPLC測定方法。方法分別以體積分?jǐn)?shù)40%和50%乙醇溶液，5和10 g·L-1十二烷基硫酸鈉(SLS)溶液為溶出介質(zhì)，對制備的3種白楊素固體制劑進(jìn)行體外溶出度考察，并建立白楊素溶出度HPLC測定方法。結(jié)果10 g·L-1十二烷基硫酸鈉溶液更適合作為本研究中制備的3種白楊素固體制劑的溶出介質(zhì)，白楊素微粉化膠囊劑的溶出度最高。此外，初步探討了白楊素固體制劑體外溶出標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論不同制劑的白楊素溶出度差異較大，微粉化工藝能顯著提高白楊素的溶出度。

關(guān)鍵詞：白楊素；固體制劑；溶出度

合適的劑型是藥物發(fā)揮其藥理作用的必要形式[1-2]。劑型能夠改變藥物的作用性質(zhì)，吸收速率，生物利用度。除此之外，運(yùn)用劑型的改變能夠使藥物具有靶向作用，如脂質(zhì)體、微粒、微球、微囊、納米囊等具有被動靶向脾、肝、腎等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的作用[3-4]。同一藥物的不同制劑類型往往具有不同的療效，如起效的強(qiáng)度和持續(xù)時間，甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)等[1-4]。因此，藥物發(fā)揮療效往往受到劑型因素的影響。

目前存在大量的中藥提取物具有良好的藥理、生理活性[5]，但是，其中大多數(shù)藥物面臨著溶解性差[3]，生物利用度低的現(xiàn)狀[6]。白楊素(chrysin)，又名白楊黃素，化學(xué)名為5，7-二氫基黃酮，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。存在于紫葳科植物木蝴蝶的種子、莖皮，松科植物山白松的心木，芒松的心木等。白楊素具有抗氧化、抗腫瘤、抗癌、抗病毒、抗高血壓、抗糖尿病[7]、抗菌、抗過敏等藥理生理活性[8]。尤其抗腫瘤療效表現(xiàn)顯著，因其毒性較低，近幾年來，國內(nèi)外學(xué)者對白楊素的藥效，作用機(jī)制進(jìn)行了廣泛研究[9-13]。本文則將白楊素分別制備成3種口服固體劑型，并對3種劑型進(jìn)行了體外溶出度評價，并建立了高效液相色譜法測定白楊素制劑的溶出度，以期開發(fā)出生物利用度更高，更具有臨床應(yīng)用價值的白楊素制劑。

1試藥與儀器

1.1儀器高效液相色譜儀(島津，LC-20AT)；ZRS-智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無線電廠)；WL-1型微粒球磨機(jī)(天津市電工專用設(shè)備廠)。

1.2試藥白楊素原料藥(陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司)；白楊素對照品(北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司)；微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素納(安徽山河藥用輔料股份有限公司，藥用級)；硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料股份有限公司，藥用級)；無水乳糖(鎮(zhèn)江市康富生物工程有限公司，藥用級)；無水乙醇(沈陽化學(xué)試劑廠，分析純)；十二烷基硫酸鈉(天津市博迪化工有限公司，分析純)；磷酸(天津化學(xué)試劑廠，分析純)；甲醇(天津市天力化學(xué)試劑有限公司，色譜純)。

圖1白楊素結(jié)構(gòu)

Fig.1 Structure of chrysin

2方法與結(jié)果

2.1白楊素3種固體制劑的制備白楊素處方如表1所示。

表1白楊素制劑處方

Tab.1 Prescription of chrysin preparations

成分用量(片質(zhì)量/膠囊填充量:200mg)/mg/%作用白楊素70.035.0主藥微晶纖維素80.040.0黏合劑交聯(lián)羧甲基纖維素納2.01.0崩解劑硬脂酸鎂1.00.5潤滑劑無水乳糖47.023.5填充劑

根據(jù)表1處方的組成，分別制備白楊素片劑，白楊素顆?；z囊劑，白楊素微粉化膠囊劑。

2.1.1白楊素片劑的制備將白楊素原料藥和各輔料粉碎，過100目篩，按處方比例稱取白楊素原料藥與各輔料。將硬脂酸鎂與交聯(lián)羧甲基纖維素納混合均勻，加入無水乳糖，使其充分混合，然后再加入微晶纖維素及白楊素原料藥，繼續(xù)混合均勻，采用粉末直接壓片法制得片劑，片質(zhì)量為200 mg。

2.1.2白楊素顆?；z囊劑的制備取2.1.1項所述的粉碎過篩后的原料藥及各輔料進(jìn)行混合，混合均勻后加入適量體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇制備軟材、制粒、干燥，充分干燥后進(jìn)行整粒，將顆粒劑裝入膠囊，每粒含有200 mg顆粒，即為白楊素顆?；z囊劑。

2.1.3白楊素微粉化膠囊劑的制備按處方比例準(zhǔn)確稱取白楊素原料藥，置于微粒球磨機(jī)中研磨2 h 后過120目篩，與處方中其余各成分混合均勻后裝膠囊，使每粒含有200 mg粉末，即得白楊素微粉化膠囊劑。

2.2HPLC法測定白楊素方法學(xué)的建立

2.2.1色譜條件色譜柱：Phenomenex-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-4 mL·L-1的磷酸水溶液(65∶35)；波長：256 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按白楊素計算不得少于3 000。

2.2.2對照品溶液制備精密稱取干燥至恒質(zhì)量的白楊素對照品適量，加甲醇使溶解，制成1 mL含白楊素0.040 mg的溶液。

2.2.3供試品溶液制備取10片白楊素片劑，研磨，取適量的粉末，加甲醇溶解，將溶液經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾，棄去初濾液，將續(xù)濾液稀釋成1 mL含白楊素0.040 mg的溶液。

2.2.4空白溶液制備按處方量精密稱取各輔料，混合均勻，加甲醇溶解，將溶液經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾，棄去初濾液，使其與供試品溶液質(zhì)量濃度一致，即為空白溶液。

2.2.5專屬性考察取上述對照品溶液、供試品溶液、空白溶液在2.2.1項中的色譜條件下進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖2所示，在該色譜條件下，能夠使白楊素與制劑中的各輔料實現(xiàn)良好分離，且輔料對白楊素的測定無干擾。

圖2HPLC圖

A.對照品；B.供試品；C.空白溶液；1.白楊素

Fig.2 HPLC chromatograms

A.reference substance; B.sample; C.blank; 1.chrysin

2.2.6線性關(guān)系考察精密吸取白楊素對照品溶液1，2，4，6和8 mL，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取20 μL注入液相色譜儀，按2.2.1項下的色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，以峰面積對質(zhì)量濃度線性回歸，在0.004～0.040 mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：Y=1 459 341X-1 528，r=0.999 0。

2.2.7精密度考察取2.2.3項下同一供試品溶液在2.2.1項的色譜條件下進(jìn)行HPLC檢測，進(jìn)樣量為20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定白楊素的峰面積值，其RSD(%)為0.75%。表明精密度良好。

2.2.8回收率實驗稱取白楊素原料藥5.6 ，7.0 和8.4 g分別約為處方量的80，100和120倍。分別置于①、②、③號研缽中，再分別加入空白輔料(無水乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素納、微晶纖維素、硬脂酸鎂)13.0 g(約為處方量的100倍)混合均勻。分別從3個研缽中取樣品粉末，每個含量各取3份，稱量它們各自的質(zhì)量。將這些粉末分別置于9個100 mL的容量瓶中，用適量的甲醇溶解，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，棄去初濾液，得續(xù)濾液，即回收率80%(3份)，100%(3份)和120%(3份)的供試品溶液。在2.2.1項的色譜條件下分別精密量取對照品溶液及各樣品溶液20 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算。結(jié)果回收率分別為80%(3份)：101.28%，99.48%和98.83%；100%(3份)：100.09%，100.62%和101.02%；120%(3份)：99.95%，100.50%和100.68%，回收率良好。

2.3溶出度考察

2.3.1溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察分別以體積分?jǐn)?shù)40%和50%的乙醇溶液、5 g·L-1、10 g·L-1的十二烷基硫酸鈉溶液(SLS)為溶劑，分別配制成質(zhì)量濃度為70 mg·L-1的白楊素溶液，經(jīng)37 ℃恒溫2 h ，冷卻至室溫，測定恒溫前后含量，其恒溫前后的含量變化的相對標(biāo)準(zhǔn)差小于2.0%，分別為0.63%，0.84%，0. 92%和0.77%，表明白楊素在這4種溶出介質(zhì)中經(jīng)37 ℃恒溫2 h相對穩(wěn)定，且SLS不會干擾白楊素的含量測定。

2.3.2溶出度測定方法取白楊素的3種固體制劑，照溶出度測定法(2010年版《中國藥典》二部附錄XC)第二法。溶出介質(zhì)為900 mL，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，依法操作，分別在5，10，20，30，45，60，90和120 min時取溶液2 mL，濾過，棄去初濾液，精密量取1 mL續(xù)濾液置于5 mL量瓶中，分別用2.3.1項下的溶出介質(zhì)稀釋至刻度，混合均勻，即為溶出度實驗的供試品溶液。供試品溶液照2.2.1項下的色譜條件進(jìn)行檢測，進(jìn)樣量為20 μL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量并換算溶出度。

白楊素的3種固體制劑(A：普通片劑；B：顆?；z囊；C：微粉化膠囊)在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線見圖3至圖6。

圖3白楊素固體制劑在體積分?jǐn)?shù)40%乙醇溶出介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.3 Dissolution profiles of chrysin in 40% ethanol medium

圖4楊素固體制劑在體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶出介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.4 Dissolution profiles of chrysin in 50% ethanol medium

圖5白楊素固體制劑在5 g·L-1SLS溶出介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.5 Dissolution profiles of chrysin in 5 g·L-1SLS

圖6白楊素固體制劑在10 g·L-1SLS溶出介質(zhì)中的溶出曲線

Fig.6 Dissolution profiles of chrysin in 10 g·L-1SLS

3討論

由圖3可知，各制劑在40%乙醇中1 h的累積溶出率均小于70%。由圖4可知，在50%乙醇中A溶出速率較快，1 h累積溶出率接近90%。45 min內(nèi)，A在40%乙醇和50%乙醇中溶出速度較膠囊劑快，由于膠囊殼明膠在乙醇中脫水硬化，溶解減慢，囊殼溶解后則溶出速率顯著加快，類似突釋。因此，乙醇溶液作為溶出介質(zhì)不合適。另外選用5 g·L-1SLS溶液作為溶出介質(zhì)累1 h累積溶出率仍小于70%，在10 g·L-1SLS中，微粉化膠囊溶出速率明顯快于其他制劑，不同制劑之間產(chǎn)生顯著差異，微粉化制劑達(dá)到2010版《中國藥典》對溶出度標(biāo)準(zhǔn)的一般要求(70%)，所以白楊素膠囊的溶出度標(biāo)準(zhǔn)可暫定為：溫度37 ℃，轉(zhuǎn)速100 r·min-1，溶出介質(zhì)為900 mL10 g·L-1的SLS溶液，在此條件下，每粒的溶出量應(yīng)符合規(guī)定。

室溫時，白楊素在SLS溶液中經(jīng)37 ℃恒溫2 h，溶液澄清，譜峰面積相對穩(wěn)定，SLS溶液可作為溶出介質(zhì)，不干擾溶出度實驗中主藥的含量測定。對比圖6中溶出曲線可知，微粉化后的白楊素膠囊劑溶出度比其他兩個制劑明顯提高。新的微粉化工藝操作簡便且效率高，更適合工業(yè)生產(chǎn)。

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·藥劑·

Evaluation of chrysin dissolution from different solid preparations

LI Xin1，ZHENG Shaohua1,ZHANG Peipei2，SU Jin1*(1.The First Affiliated Hospital, Health Science Canter,Xi′an Jiaotong University， Xi′an 710061， China； 2.Health Science Center，Xi′an Jiaotong University， Xi′an 710061， China)

Abstract:ObjectiveTo investigate different chrysin solid preparation dissolution in vitro and to establish an HPLC method for the determination of dissolution. MethodThe dissolution of three chrysin solid preparations were evaluated in 40% and 50% ethanol，5 g·L-1sodium dodecyl sulfate solution， and 10 g·L-1sodium dodecyl sulfate solution， respectively.The HPLC method for determination of the chrysin dissolution was carried out on a C18column using methanol-phosphoric acid-water (65∶35) as a mobile phase. The detection wavelength was at 256 nm， the flow rate was 1.0 mL·min-1， and the temperature of column was 30 ℃. Results10 g·L-1sodium dodecyl sulfate solution as a dissolution medium is suitable for evaluating the three chrysin solid preparations in this study. In addition， the dissolution quality standards of chrysin solid preparation were discussed. ConclusionThe dissolution of three chrysin solid preparations showed significant difference and the dissolution of micronized chrysin solid preparations was significantly improved.

Key words:chrysin; solid preparation; dissolution

收稿日期：(2015-03-01)

通信作者：*蘇進(jìn)，男，主治醫(yī)師

作者簡介：李欣，女，主治醫(yī)師

基金項目：陜西省自然科學(xué) (編號：2012JQ4025)

中圖分類號：R944

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)01-0076-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.023