GC法同步測(cè)定桉薄溶液中桉油精、薄荷腦的含量

董宏偉，呂淑榮，劉哲林

(煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司，山東 煙臺(tái) 264003)

摘要：目的建立中藥制劑中桉油精、薄荷腦的含量測(cè)定方法。方法采用氣相色譜法，ZB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)。結(jié)果桉油精和薄荷腦的線性范圍分別為0.146～2.555 mg·mL-1(R2=0.999 9)、0.198～3.465 mg·mL-1(R2=0.999 8)；平均加樣回收率分別為99.8%、99.5%(n=9)，桉油精與薄荷腦的最低定量限濃度分別為6.27、9.90 μg·mL-1；最低檢測(cè)限濃度分別為1.044、1.65 μg·mL-1。結(jié)論方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、分離度好、其他成分無(wú)干擾，適用于復(fù)方制劑中多成分的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：氣相色譜；桉薄溶液；桉油精；薄荷腦

基金項(xiàng)目：國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013GA740037)；煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃(No.2012055)

作者簡(jiǎn)介：董宏偉，男，研究方向：藥物分析，E-mail：weid8848@163.com

中圖分類號(hào)：R927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Determination of eucalyptol and menthol in eucalyptol and menthol solution by GC

DONGHong-wei,LVShu-rong,LIUZhe-lin

(YantaiLvyeAnimalHealthProductsLimitedCompany,Yantai264003,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for the derermination of eucalyptol and menthol in Chinese medicine preparations.MethodsGas chromatography,the ZB-WAX elastic quartz capillary column(30 m×0.25 mm,0.25 μm);Cyclohexanone as internal standard.ResultsThe linear range of eucalyptol and menthol was 0.146～2.555 mg·mL-1 (R2=0.999 9),0.198～3.465 mg·mL-1 (R2=0.999 8);The average sample recovery rates were 99.8%,99.5%,respectively (n=9),the minimum quantitative limit concentrations of eucalyptol and of menthol were 6.27,9.90 μg·mL-1;The minimum detection limit concentrations were 1.044,1.65 μg·mL-1.ConclusionThe method was simple,rapid,accurate,good separating degree,no interfere with other ingredients and was applicable to many ingredients in the compound preparation of quality control.

Key words:GC;Eucalyptol and menthol solution;Eucalyptol;Menthol

桉油為桃金娘種植物藍(lán)桉和樟科植物或上述兩科同屬其他植物經(jīng)蒸餾得到的揮發(fā)油，桉油中主要含桉油精，還含有檸檬烯、α-蒎烯等成分。桉油[1，2]具有抗菌消炎、平喘鎮(zhèn)痛、止咳祛痰、減輕水腫等作用。薄荷腦為唇形科植物薄荷的新鮮莖和葉經(jīng)水蒸氣蒸餾、冷凍、重結(jié)晶得到的一種飽和的環(huán)狀醇。其味辛，性涼，能疏風(fēng)、清熱，可治外感風(fēng)熱、頭痛、咽喉腫痛、牙痛、皮膚風(fēng)癢、口瘡[3，4]。桉薄溶液包含桉油與薄荷腦2種成分能用于改善和治療由病毒感染或免疫應(yīng)激等引發(fā)的雞的呼吸道癥狀，療效確切?！吨袊?guó)藥典》2000年版(一部)采用復(fù)合柱對(duì)桉油精進(jìn)行測(cè)定[9]，方法實(shí)用性低，本方法采用ZB-WAX柱對(duì)2種成分同時(shí)進(jìn)行分離與檢測(cè)，方法快速、靈敏，分離度好、專屬性好，能有效地控制藥品質(zhì)量。

1儀器與試藥

Agilent 7890N氣相色譜儀：FID檢測(cè)器，A.01.12.1色譜工作站；SGH-300高純氫氣發(fā)生器(北京東方精華科技苑科技有限公司)；色譜柱彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；梅特勒-托利多十萬(wàn)分之一電子分析天平；桉油精對(duì)照品(批號(hào)：110788-201105，含量99.9%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)：110728-200506，含量99.9%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；桉薄溶液(煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司)，試劑：環(huán)己酮，無(wú)水乙醇均為色譜純。

2色譜條件

色譜柱：ZB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱 (30 m×0.25 mm，0.25 μm)；載氣：N2，1.0 mL·mL-1；氫氣，40 mL·mL-1；空氣，400 mL·min-1；分流比：10∶1；進(jìn)樣口溫度：250 ℃，檢測(cè)器溫度300 ℃；程序升溫：初始80 ℃，每分鐘5 ℃升至120 ℃，每分鐘10 ℃升至180 ℃，保持3.5 min；內(nèi)標(biāo)法。

3試驗(yàn)方法與結(jié)果

3.1內(nèi)標(biāo)溶液的制備取環(huán)己酮適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每1 mL含12.5 mg的溶液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

3.2供試品溶液的制備精密量取本品1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，再精密量取1.0 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

3.3對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備 精密稱取桉油精對(duì)照品、薄荷腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成含桉油精7.301 mg·mL-1及薄荷腦9.901 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

3.4陰性對(duì)照溶液的制備取按處方中未加桉油精與薄荷腦的空白溶液，按“3.2”項(xiàng)下制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

3.5 線性關(guān)系的考察 分別精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，分別取1 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以桉油精、薄荷腦與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)(Y)，濃度(C)為橫坐標(biāo)(X)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程分別為：Y桉油精=1.114 8X-0.001 6，R2=0.999 9，桉油精濃度在0.146～2.555 mg·mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；Y薄荷腦=1.134 7X+0.003 5，R2=0.999 8，薄荷腦濃度在0.198～3.465 mg·mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

3.6精密度試驗(yàn)取桉油精濃度為0.730 mg·mL-1和薄荷腦濃度為0.990 mg·mL-1的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，分別計(jì)算2種成分與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值(A/A內(nèi)標(biāo))，桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.24%和1.2%(n=6)。

3.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.36%、1.8%(n=6)。

3.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批樣品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、6、8、12 h后測(cè)定，結(jié)果按桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.38%、1.7%，說(shuō)明樣品溶液在12 h內(nèi)測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定。

3.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品溶液9份，并加入適當(dāng)?shù)牡汀⒅?、高?duì)照品溶液，按樣品測(cè)定法測(cè)定桉油精、薄荷腦含量，分別計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果( n=9，%)

結(jié)果表明，本方法的回收率較好，桉油精的回收率分別在99.4%～100.2%，薄荷腦的回收率在98.1%～100.7%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.28%與0.86%，本測(cè)定方法能滿足桉薄溶液中桉油精與薄荷腦的含量測(cè)定。

3.10定量限與檢測(cè)限 采用 “信噪比法”來(lái)確定本研究的定量限和檢測(cè)限，取線性標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，采用加無(wú)水乙醇逐步稀釋法進(jìn)行稀釋，當(dāng)進(jìn)樣濃度為6.27、9.90 μg·mL-1時(shí)，取1 μL進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣3次，得到桉油精、內(nèi)標(biāo)、薄荷腦信噪比平均值分別接近10.0，可以以此濃度為定量限；繼續(xù)稀釋進(jìn)樣，當(dāng)進(jìn)樣濃度為1.044、1.65 μg·mL-1，連續(xù)進(jìn)樣3次，得到桉油精、內(nèi)標(biāo)、薄荷腦信噪比平均值接近3.0，可以以此濃度為檢測(cè)限。

3.11耐用性試驗(yàn)經(jīng)不同色譜柱考察和溶液穩(wěn)定性考察，以及柱溫，進(jìn)樣口溫度和檢測(cè)器溫度考察，表明本方法耐用性良好，適用于桉薄溶液中兩組分的含量測(cè)定。

3.11.1色譜柱的影響 選用3根不同商品規(guī)格的色譜柱，測(cè)定同一批樣品的含量，計(jì)算含量值的RSD%分別為1.3、1.7、1.6。結(jié)果表明，樣品用不同的PEG色譜柱測(cè)定含量，桉油精、薄荷腦與內(nèi)標(biāo)均可有效分離，說(shuō)明方法耐用性良好。

3.11.2柱溫的影響[5，6]柱溫對(duì)分離的影響主要為影響主峰的出峰時(shí)間，溫度越高，主峰出峰時(shí)間越短，在第一階段為80 ℃時(shí)，桉油精主峰桉油精與雜質(zhì)峰能保證基線分離，第二階段120 ℃時(shí)薄荷腦主峰與雜質(zhì)峰能保證基線分離，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.3進(jìn)樣口溫度的影響[7，8]進(jìn)樣口溫度高于柱溫時(shí)，桉油主峰桉油精與雜質(zhì)峰能夠保證基線分離，薄荷腦與雜質(zhì)分離良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.4檢測(cè)器溫度的影響[10]檢測(cè)器溫度高于進(jìn)樣口溫度時(shí)，桉油主峰桉油精與雜質(zhì)峰能夠保證基線分離，薄荷腦與雜質(zhì)分離良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.12樣品含量測(cè)定結(jié)果 經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，本含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，能更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。因此應(yīng)用該方法對(duì)10批樣品(批號(hào)：110701～110715)，按照前述方法采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果

4討論

4.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)在本試驗(yàn)氣相色譜系統(tǒng)下，分別吸取樣品測(cè)定用混合對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各1 μL，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)?？梢?jiàn)2種組分與內(nèi)標(biāo)物均能夠較好地分離，陰性無(wú)干擾。該系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果見(jiàn)表3。

A

B 圖3　空白對(duì)照色譜圖 A.混合對(duì)照品溶液；B.供試品溶液

名稱保留時(shí)間(min)柱效分離度桉油精4.2831098322.65環(huán)己酮5.5351489118.67薄荷腦11.5155223636.59

4.2內(nèi)標(biāo)物的選擇曾試用過(guò)環(huán)己酮、萘、聯(lián)苯、水楊酸甲酯等，因樣品揮發(fā)性成分多，結(jié)果以環(huán)己酮的保留時(shí)間及分離效果最合適。

4.3柱溫的選擇 桉油精、環(huán)己酮和薄荷腦的沸點(diǎn)相差比較大，柱溫低時(shí)，薄荷腦的保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，柱溫高時(shí)，桉油精與雜質(zhì)不能有效分離，經(jīng)采用兩段程序升溫方式能滿足兩種成分的同時(shí)分析。

4.4由10批次產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果，暫定本品的含量限度為：本品每1 mL含桉油以桉油精(C10H18O)計(jì)，不得少于84.0 mg，含薄荷腦(C10H20O)不得少于88.0 mg。

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