李曉雪，石書婧，易翔(廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，南寧5300;河北省眼科醫(yī)院)

鼻咽癌組織中miR-200a的表達及意義

李曉雪1，石書婧2，易翔1
(1廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，南寧530021;2河北省眼科醫(yī)院)

摘要:目的觀察鼻咽癌和鼻咽黏膜炎性組織中microRNA-200a(miR-200a)的表達變化，分析其與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法取鼻咽癌組織39例(觀察組)、鼻咽黏膜炎性組織12例(對照組)。采用實時熒光定量PCR方法檢測兩組miR-200a表達，比較不同臨床病理參數(shù)(包括年齡、性別、T分期、N分期、臨床分期)的鼻咽癌患者miR-200a表達差異。結(jié)果觀察組和對照組miR-200a的相對表達量分別為0.539±0.281、0.744±0.358，觀察組較對照組明顯下降(P＜0.05)。鼻咽癌組織中miR-200a表達: T3、T4期低于T1、T2期，N2、N3期低于N0、N1期，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05或＜0.01)。結(jié)論miR-200a在鼻咽癌組織中的表達明顯下調(diào)，其參與了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程。

關(guān)鍵詞:鼻咽腫瘤;miR-200a;實時熒光定量聚合酶鏈反應

Expression and clinical significance ofmiR-200a in nasopharyngeal carcinoma

LI Xiao-xue1，SHI Shu-jing，YI Xiang
(1 The First Affiliated Hospital of Guangximedical University，Nanning 530021，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes in levels ofmiR-200a in the tissues of nasopharyngeal carcinoma(NPC)and nasopharyngitis and to analyze its relationship with the occurrence anddevelopment of NPC.Methods We took 39 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues as the observation group and 12 cases of nasopharyngitis tissues as the control group.The real-time fluorescent quantification PCR was used todetect the expression levels ofmiR-200a in the two groups.Thedifferential expression levels ofmiR-200a in NPC patients with clinicopathological parameter(including age，gender，T stage，N stage and clinical grade)were compared.Results The relative expression ofmiR-200a in the observation group and the control group was 0.539±0.281 and 0.744±0.358，respectively.The expression ofmiR-200a in the observation group was significantlydecreased as compared with that of the control group(P＜0.05).The expression ofmiR-200a in the observation groupdecreased with T stage，N stage and the increasing clinical stages(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion The expression ofmiR-200a in the NPC tissues isdown-regulated whichmay participate in the pathogenesis anddevelopment of NPC.

Key words:nasopharyngeal carcinoma;miR-200a; real-time fluorescent quantification polymerase chain reaction

鼻咽癌(NPC)是我國南方地區(qū)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在頭頸部惡性腫瘤中居首位［1］。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-200a(miR-200a)在多種腫瘤中表達下調(diào)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中具有抑癌基因的功能［2］。有關(guān)miR-200a在鼻咽癌中表達的情況少見報道。本研究采用Real-time PCR方法檢測鼻咽癌組織中miR-200a表達，探討其在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2014年4～6月在廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院行活組織病理檢查的39例鼻咽癌患者(觀察組)和12例鼻咽黏膜炎性患者(對照組)，均經(jīng)病理檢查確診。觀察組男24例、女15例，年齡25～74歲、中位年齡45歲?；颊呔鶠槌醢l(fā)，未接受化療、放療及其他針對腫瘤的相關(guān)治療。對照組男6例、女6例，年齡20～58歲、中位年齡41.5歲。取新鮮活檢組織置－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2miR-200a表達檢測取組織標本，加入TRIzol試劑抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。miR-200a上

游引物: CGCTAACACTGTCTGGTAACGATGT。PCR反應體系為SYBR Premin Ex TaqⅡ(2×)10 μL，miR-200a上游引物(10 μmol/L)0.4 μL，Uni-miR qPCR引物(下游引物)(10 μmol/L)0.4 μL，ROX Referencedye(50×)0.4 μL，cDNA 1 μL，用無酶水補至20 μL。反應條件: 95℃30 s，95℃5 s，60℃31 s。擴增后進行擴增曲線分析，采用2－ΔΔCt計算目的基因的相對表達量。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料用珋x±s表示，數(shù)據(jù)比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1鼻咽癌組織中miR-200a的表達miR-200a在鼻咽癌組織中的相對表達量為0.539±0.281，在鼻咽黏膜炎性組織中為0.744±0.358;二者比較，P＜0.05。

2.2miR-200a表達與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1　不同臨床病理參數(shù)的鼻咽癌患者miR-200a表達比較()

表1　不同臨床病理參數(shù)的鼻咽癌患者miR-200a表達比較()

臨床病理參數(shù)　n　miR-200a P年齡(歲)≤50　30　0.512±0.269　0.455 ＞50　9　0.582±0.304性別男24　0.521±0.275　0.469 女15　0.600±0.309 T分期T1、T2期　10　0.782±0.278　0.001 T3、T4期　29　0.455±0.233 N分期N0、N1期　11　0.719±0.259　0.010 N2、N3期　28　0.468±0.261臨床分期Ⅰ、Ⅱ期　5　0.839±0.266　0.011Ⅲ、Ⅳ期34　0.496±0.260

3　討論

miRNA是一類長20～25個核苷酸的小分子非編碼RNA，通過與靶基因mRNA的特定位點結(jié)合，抑制該蛋白的合成或誘導該mRNA的降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平參與基因的表達調(diào)控［3］。近年研究表明，miRNA可參與腫瘤的增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移及信號轉(zhuǎn)導通路等多個環(huán)節(jié)，具有抑癌基因或癌基因的不同功能，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用［4～6］。miR-200是一組miRNA，其家族成員主要包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429。根據(jù)不同的基因組定位，miR-200家族又可分為2個簇:miR-200a、miR-200b、miR-429基因簇定位于1號染色體p36.33，miR-200c、miR-141基因簇定位于12號染色體p13.31［7］。近年研究發(fā)現(xiàn)，miR-200a在肝癌、肺癌、胃癌、外陰鱗癌等多種腫瘤中的表達明顯低于正常組織［8，9］。miR-200家族與E盒結(jié)合鋅指蛋白(ZEB)家族成員ZEB1和ZEB2可相互負反饋抑制，miR-200家族可通過抑制ZEB1/ZEB2的表達，從而上調(diào)E-cadherin表達;而E-cadherin表達可阻止上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，進而抑制腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移［10］。提示miR-200家族具有抑癌基因的作用。

Chen等［11］通過miRNA微陣列芯片證實，miR-200a在鼻咽癌中表達明顯下調(diào)。Xia等［6］在鼻咽癌細胞株中檢測發(fā)現(xiàn)，miR-200a的表達隨鼻咽癌細胞分化程度的增加而增加，且miR-200a可通過下調(diào)ZEB2抑制鼻咽癌細胞的遷移和侵襲，通過下調(diào)CTNNB1抑制鼻咽癌細胞的增殖。本研究結(jié)果顯示，與鼻咽黏膜炎性組織相比，miR-200a在鼻咽癌組織中的表達明顯下調(diào);miR-200a的表達隨著T分期、N分期及臨床分期增加而下調(diào)，提示miR-200a可能通過發(fā)揮類似抑癌基因的作用參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展。

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收稿日期:( 2015-06-12)

通信作者簡介:易翔(1970-)，男，副教授，碩士研究生導師。研究方向為鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制及抗鼻咽癌藥物的篩選。E-mail: yixiang 16300@163.com

作者簡介:第一李曉雪(1987-)，女，醫(yī)師，碩士在讀。研究方向為鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制。E-mail: 1360808767@ qq.com

基金項目:廣西醫(yī)學科學實驗中心開放基金(KFJJ2010-12)。

文章編號:1002-266X(2015)34-0014-02

文獻標志碼:A

中圖分類號:R739.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.005