李新，陳化禹，楊桂芳，耿潔，賈志杰(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193)

熱毒寧與頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抑菌作用

李新，陳化禹，楊桂芳，耿潔，賈志杰
(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193)

摘要:目的探討體外環(huán)境下中藥熱毒寧聯(lián)合頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉(SCF)對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(XDR-AB)的抑菌作用。方法取33株XDR-AB培養(yǎng)傳代，采用微量肉湯棋盤(pán)稀釋法檢測(cè)SCF和熱毒寧的單獨(dú)及聯(lián)合最低抑菌濃度(MIC)、熱毒寧聯(lián)合SCF對(duì)XDR-AB的抑菌濃度指數(shù)(FICI)，以FICI≤0.5為協(xié)同作用。結(jié)果熱毒寧與SCF聯(lián)合用藥時(shí)與單獨(dú)用藥時(shí)相比MIC下降，熱毒寧與SCF聯(lián)合用藥時(shí)的FICI均≤0.5。結(jié)論體外環(huán)境下，熱毒寧聯(lián)合SCF對(duì)XDR-AB有很好的協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞:泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌;熱毒寧;中藥;頭孢哌酮鈉;舒巴坦鈉;抑菌試驗(yàn);體外試驗(yàn)

鮑曼不動(dòng)桿菌為條件致病菌，常引起呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥、繼發(fā)性腦膜等。近年來(lái)，隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性不斷增加，出現(xiàn)了泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(XDRAB)。XDR-AB對(duì)常用抗菌藥物幾乎全部耐藥，僅對(duì)多黏菌素和替加環(huán)素敏感［1，2］，給臨床治療帶來(lái)巨大挑戰(zhàn)。本研究觀察了熱毒寧與頭孢哌酮鈉/舒巴坦鈉(SCF)聯(lián)合對(duì)XDR-AB的體外抑菌作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1材料33株XDR-AB分離自2014年1～10月份天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院患者，其中30份來(lái)源于痰液標(biāo)本、3份來(lái)源于尿液標(biāo)本。根據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)選用法國(guó)梅里埃公司VITEK-2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)及配套的分析卡進(jìn)行菌種鑒定和藥敏的篩選。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。SCF購(gòu)自美國(guó)輝瑞公司，熱毒寧注射液購(gòu)自江蘇康緣藥業(yè)，藥敏紙片為美國(guó)輝瑞公司提供的SCF紙片。

1.2檢測(cè)方法

1.2.1 SCF對(duì)XDR-AB的最低抑菌濃度(MIC)將XDR-AB菌株培養(yǎng)傳代，分離單個(gè)菌落，用比濁儀配制細(xì)菌懸液1×108CFU/mL，再用M-H肉湯以1∶100稀釋(含菌量約106)備用。用M-H肉湯將SCF原液倍比稀稀成256、128、64、32、16、8、4、2 μg/mL的藥液，分別取50 μL依次加入96孔板中，將備用菌液50 μL加入已加藥的孔中，使最終接種菌量約5×105CFU/孔。另設(shè)無(wú)菌對(duì)照孔(孔內(nèi)只加MH肉湯100 μL)和無(wú)藥對(duì)照孔(孔內(nèi)只加M-H肉湯和菌液各50 μL)，振蕩1min混勻后，35℃恒溫培養(yǎng)箱孵育20 h，肉眼觀察結(jié)果，記錄MIC。

1.2.2熱毒寧對(duì)XDR-AB的MIC制備終濃度為原液的1、0.80、0.64、0.51、0.41、0.33、0.26、0.21、0.17倍的熱毒寧，分別取50 μL按濃度由低到高依次加入96孔板中。分別取備用菌液50 μL加入已加藥的孔中，另設(shè)無(wú)菌對(duì)照孔和無(wú)藥對(duì)照孔。振蕩1min混勻后，35℃恒溫培養(yǎng)箱孵育20 h，肉眼觀察結(jié)果，記錄MIC。

1.2.3熱毒寧聯(lián)合SCF對(duì)XDR-AB的抑菌作用

采用微量肉湯棋盤(pán)稀釋法測(cè)定。稱量并配制2倍MIC濃度的藥物，SCF制備方法同1.2.1，熱毒寧制備方法同1.2.2。在96孔板上做好標(biāo)記，SCF從上到下濃度依次遞減，熱毒寧從左到右濃度依次遞減，另設(shè)無(wú)菌對(duì)照孔和無(wú)藥對(duì)照孔。在96孔板中，每個(gè)對(duì)應(yīng)孔加兩種藥液各50 μL和菌液100 μL后，振蕩1min混勻，35℃孵育20 h，觀察抑菌濃度指數(shù)(FICI)。FICI =(聯(lián)合用藥時(shí)SCF的MIC/單用時(shí)SCF的MIC)+(聯(lián)合用藥時(shí)熱毒寧的MIC/單用時(shí)熱毒寧的MIC)。FICI≤0.5為協(xié)同，0.5＜FICI≤1.0為相加，1.0＜FICI≤2.0為無(wú)關(guān)，＞2.0為拮抗。

2　結(jié)果

2.1熱毒寧和SCF單獨(dú)及聯(lián)合用藥的MIC見(jiàn)表1。

表1　熱毒寧和SCF單獨(dú)及聯(lián)合用藥的MIC

2.2熱毒寧聯(lián)合SCF對(duì)XDR-AB的抑菌作用熱毒寧與SCF聯(lián)合用藥時(shí)的FICI為0.345～0.468，均≤0.5。

3　討論

XDR-AB耐藥現(xiàn)象十分嚴(yán)重，對(duì)氨基糖苷類、氟喹諾酮類以及β-內(nèi)酰胺類等抗菌藥物均有一定的耐藥性，給臨床治療造成極大困難。研究顯示，某些中藥具有提高抗菌藥物抑菌效果的作用［3］。中藥可直接作用于致病菌，通過(guò)干擾細(xì)菌的代謝過(guò)程，影響其結(jié)構(gòu)與功能，如干擾致病菌細(xì)胞壁合成、阻礙菌體內(nèi)蛋白質(zhì)合成、抑制核酸代謝及干擾其他代謝途徑等［4～6］。另外，中藥還能夠激發(fā)調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)在的抗菌因素，通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力而調(diào)動(dòng)自身潛力抗感染，達(dá)到治療疾病的目的［7，8］。目前關(guān)于細(xì)菌對(duì)中藥產(chǎn)生耐藥性的報(bào)道很少，表明中藥聯(lián)合抗菌藥物治療抗耐藥菌具有廣闊的應(yīng)用前景［9，10］。熱毒寧注射液為臨床常用中藥，具有清熱解毒之功效，其主要成分為青蒿、金銀花、梔子?，F(xiàn)代藥理研究表明，青蒿、金銀花均有抑菌作用［11］。青嵩具有免疫抑制及細(xì)胞免疫促進(jìn)作用;金銀花可破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖層的結(jié)構(gòu)，改變包膜屏障的通透性，從而抑制細(xì)菌生長(zhǎng)［12］;梔子具有抗感染、鎮(zhèn)靜降溫的作用。臨床常用于抗菌、抗病毒治療，對(duì)細(xì)菌或病毒感染所致的上呼吸道疾病療效顯著［13，14］。

SCF是臨床常用廣譜抗菌藥物，廣泛用于革蘭陰性菌引起的中、重度感染細(xì)菌，但2014年我院XDR-AB對(duì)SCF的耐藥率已高達(dá)46.85%。本研究顯示，不同XDR-AB對(duì)SCF的敏感性不同，分別為128、64、32 μg/mL;聯(lián)合熱毒寧后，SCF的MIC降至2、4、8 μg/mL。表明SCF聯(lián)合熱毒寧后，菌株對(duì)SCF的敏感性明顯提高，SCF對(duì)XDR-AB的MIC明顯下降;且對(duì)SCF耐藥程度越高的菌株MIC下降越明顯。進(jìn)一步觀察兩藥的協(xié)同作用，結(jié)果顯示，二者聯(lián)合用藥時(shí)的FICI均≤0.5，說(shuō)明兩者有協(xié)同作用。XDR-AB是具有產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶、膜通透性改變及多藥外排系統(tǒng)等多種復(fù)雜耐藥機(jī)制并存的細(xì)菌，熱度寧聯(lián)合SCF可能通過(guò)對(duì)某些細(xì)菌耐藥基因的改變，從而減少抗菌藥物用量或逆轉(zhuǎn)某些抗菌藥物的敏感性，減少藥物不良反應(yīng)，提高療效。關(guān)于熱毒寧如何逆轉(zhuǎn)SCF敏感性將是我們下一步的研究目標(biāo)。

綜上所述，體外環(huán)境下熱毒寧聯(lián)合SCF對(duì)XDR-AB有很好的協(xié)同作用，臨床治療XDR-AB可聯(lián)合使用SCF和熱度寧注射液。

參考文獻(xiàn):

［1］張仲新.泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染現(xiàn)狀及耐藥機(jī)制研究［J］.中國(guó)醫(yī)療前沿，2012，7(6): 69-72.

［2］曾春暉，楊柯，徐明光，等.廣西藤茶總黃酮與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物合用的體外抗菌活性研究［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32(3): 292-297.

［3］楊再昌，楊小生，王伯初，等.從中藥篩選金黃色葡萄球菌耐抗菌素抑制劑［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005，17(6): 700-703.

［4］李建農(nóng)，包旭，包定元.解熱毒注射液抗菌作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2001，17(1): 30-32.

［5］熊英，傅穎媛，況南珍，等.黃芩苷抗白色念珠菌作用及機(jī)制研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004，20(12): 1404-1407.

［6］劉波，李雪駝，徐和利，等.5種中藥制劑殺滅幽門螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)新藥雜志，2002，11(6): 457-459.

［7］孫健，吳國(guó)娟.抗菌中藥的作用機(jī)理研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2007，43(2): 42-43.

［8］陳雨姣.從現(xiàn)代免疫學(xué)角度探討中醫(yī)中藥抗感染作用［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，14(4): 5-6.

［9］陳美玲，王劍，周紅霞，等.中藥飲片對(duì)多重抗生素耐藥細(xì)菌的抑菌作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(2): 10-13.

［10］許麾，孫建成，許德華.熱毒寧注射液的臨床應(yīng)用［J］.海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào)，2011，24(4): 223-225.

［11］管仲瑩，趙金明，林巧智.金銀花提取物抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)中藥，2009，47(15): 150-153.

［12］馮秀麗，許慶華，趙曉云，等.金銀花及其復(fù)方的體外抑菌活性與體內(nèi)抗炎作用［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30(1): 35-39.

［13］王科峰，楊海卿.中藥抗菌作用研究思路探討［J］.臨床合理用藥，2012，5(3B): 83-84.

［14］吳曉豐，洪艷.熱毒寧對(duì)肺炎支原體肺炎患兒血清EC和hs-CRP的影響［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11(10): 1580-1581.

·綜述·

收稿日期:( 2015-01-26)

基金項(xiàng)目:天津市中醫(yī)藥管理局中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合科研課題(13065)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)34-0092-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R978.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.041