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Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)及意義的研究

2016-01-26 22:50:08王鵬張丹宋永欣冉德軍孫德義
關(guān)鍵詞:鼻竇陽性細(xì)胞鼻腔

王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

·臨床醫(yī)學(xué)·

Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)及意義的研究

王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

目的探討Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤(SNIP)中的表達(dá)及其相互關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測Mcm2及Survivin在40例SNIP、20例鼻腔鱗狀細(xì)胞癌(NSCC)及40例正常鼻腔黏膜(NM)組織標(biāo)本中的表達(dá)。結(jié)果Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC 中的表達(dá)呈遞增趨勢,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。SNIP中Mcm2和Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.913,P<0.01)。結(jié)論Mcm2和Survivin均參與SNIP的發(fā)生、發(fā)展過程,可作為衡量SNIP惡變與復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)之一。

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤;Mcm2;Survivin;增殖;凋亡

SNIP是鼻科常見的良性腫瘤,其在性質(zhì)上雖屬良性,但具有侵襲性、高復(fù)發(fā)率、易惡變和多中心的臨床特點[1]。本實驗采取免疫組織化學(xué)方法檢測Mcm2和Survivin在NM、SNIP及NSCC中的表達(dá)情況,并對兩者在SNIP中的表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)分析,探討兩者在SNIP中表達(dá)的臨床意義,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科2009年1月~2012年9月手術(shù)切除的SNIP組織40例,2010年9月~2012年9月切除的40例慢性單純性鼻炎的部分NM組織以及本院2006年1月~2012年9月手術(shù)切除的20例NSCC組織。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實。

1.2 試劑 S-P免疫組化試劑盒,鼠抗人Mcm2單克隆抗體,兔抗人Survivin多克隆抗體。

1.3 方法 將三種組織類型蠟塊標(biāo)本制作成病理切片后,按S-P免疫組織化學(xué)試劑盒操作方法進(jìn)行染色,所有病理切片染色均在相同條件下進(jìn)行,每種組織類型染色均設(shè)陽、陰性對照。用已確認(rèn)染色陽性切片做陽性對照,用PBS替代一抗孵育切片做陰性對照。

1.4 染色結(jié)果及計數(shù)方法 Mcm2的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核,凡細(xì)胞核染成棕黃色或棕褐色者為染色陽性細(xì)胞。同時按以下方法計算Mcm2標(biāo)記指數(shù):每張切片于高倍鏡下隨機(jī)選5個高倍視野計數(shù)陽性細(xì)胞的平均值作為其標(biāo)記指數(shù),然后進(jìn)行評級:標(biāo)記指數(shù)<5%為(-);標(biāo)記指數(shù)6%~25%為(+);標(biāo)記指數(shù)26%~50%為(++);標(biāo)記指數(shù)>50%為(+++)。

Survivin的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞漿,凡細(xì)胞漿呈黃色、棕黃色、棕褐色者為染色陽性細(xì)胞。同時按以下方法計算Survivin的陽性表達(dá)結(jié)果:每張切片于高倍鏡下隨機(jī)選5個高倍視野計數(shù)陽性細(xì)胞的平均數(shù),根據(jù)染色陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度獨立評判后綜合判定:①陽性細(xì)胞數(shù):≤5%記為0分,6%~25%記為1分,26%~50%記為2分,51%~75%記為3分,>75%記為4分;②染色強(qiáng)度:無染色記為0分,淡黃色記為1分,黃色記為2分,棕黃色記為3分。兩項結(jié)果乘積>1分為陽性,≤1分為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗;相關(guān)性采用Spearman法進(jìn)行分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mcm2和Survivin在三種組織類型中的陽性表達(dá)情況 Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC中的表達(dá)呈遞增趨勢,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1,表2。

2.2 SNIP中Mcm2和Survivin表達(dá)相關(guān)性分析 本研究顯示,Mcm2與Survivin表達(dá)之間呈正相關(guān)(r=0.913,P<0.01)。Survivin蛋白表達(dá)呈陽性的組織標(biāo)本與Survivin蛋白表達(dá)呈陰性的組織標(biāo)本相比,前者的Mcm2中位標(biāo)記指數(shù)明顯高于后者(P<0.01)。見表3。

3 討論

細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡狀態(tài)的平衡,是維持機(jī)體組織細(xì)胞數(shù)量穩(wěn)定、清除突變細(xì)胞、防止細(xì)胞癌變所必須的。細(xì)胞增殖與凋亡狀態(tài)平衡的紊亂與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,如損傷的細(xì)胞不能啟動相應(yīng)的凋亡機(jī)制,體內(nèi)細(xì)胞的增殖與凋亡兩者間的狀態(tài)就會失去平衡,兩者平衡的破壞使存在基因缺陷的細(xì)胞獲得生存優(yōu)勢,促使細(xì)胞基因突變的發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化,最終促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此,細(xì)胞的增殖與凋亡狀態(tài)的異??赡茉赟NIP的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。

Mcm2是近年來發(fā)現(xiàn)的一種較好地反映細(xì)胞增殖活性的標(biāo)志物。在所有進(jìn)入細(xì)胞周期的細(xì)胞中均有表達(dá),但在靜止期及分化成熟的細(xì)胞中則不表達(dá),因此,在突變和增殖發(fā)育異常的細(xì)胞中,Mcm2可作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物來標(biāo)記細(xì)胞所處的狀態(tài)[2]。且Ramnath等[3]研究證實,Mcm2的細(xì)胞表達(dá)陽性度與細(xì)胞變異的嚴(yán)重程度相關(guān)。

本實驗結(jié)果表明,Mcm2在NM中表達(dá)較少,但在SNIP、NSCC中表達(dá)范圍和層次廣泛、染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。Mcm2的蛋白標(biāo)記指數(shù)也呈一遞增趨勢,符合三者細(xì)胞增殖活性逐一遞增的規(guī)律。Gonzalez等[4]研究指出,Mcm2高表達(dá),意味著隨后的細(xì)胞突變轉(zhuǎn)化增加。本實驗中有些SNIP病例的Mcm2的標(biāo)記指數(shù)較高,甚至達(dá)到NSCC的Mcm2中位標(biāo)記指數(shù),這說明在某些SNIP中存在有惡變傾向或惡變的病灶,這些Mcm2的標(biāo)記指數(shù)較高的SNIP病例可能比Mcm2標(biāo)記指數(shù)低的SNIP病例易發(fā)生復(fù)發(fā)或惡變。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成員。它可以抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂,對細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的聯(lián)系起重要作用。Survivin除了在胸腺、生殖腺中微弱表達(dá)外,在其他正常組織中均未表達(dá),而在幾乎所有惡性腫瘤中都有高表達(dá)[5]。研究表明,Survivin在幾種前惡性損傷(如結(jié)腸息肉、乳腺腺瘤等)中表達(dá),表明Survivin的表達(dá)可能出現(xiàn)于細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的早期[6]。因此,Survivin的檢測可為診斷腫瘤及預(yù)測腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后提供新的指標(biāo)。

本實驗結(jié)果顯示,Survivin蛋白在NM中無明顯表達(dá),在SNIP及NSCC中表達(dá)逐漸升高,統(tǒng)計分析顯示三者之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。SNIP中Survivin蛋白含量較高,并且Survivin在不同SNIP病例的染色表達(dá)強(qiáng)弱不等,Survivin強(qiáng)表達(dá)可能提示該腫瘤更趨向復(fù)發(fā)、惡變。

本實驗中,Survivin蛋白陽性表達(dá)與陰性表達(dá)相比,Mcm2中位標(biāo)記指數(shù)前者明顯高于后者。這表明在SNIP的發(fā)生發(fā)展中高增殖和低凋亡可能同時存在,Mcm2促增殖作用和Survivin的凋亡抑制作用相互促進(jìn),使細(xì)胞增殖和凋亡之間的差距進(jìn)一步擴(kuò)大,使得腫瘤細(xì)胞獲得生長優(yōu)勢。因此,SNIP中Mcm2與Survivin的表達(dá)水平有可能作為衡量SNIP惡變與復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)之一。

[1]鄔旭,韓德民.鼻腔、鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)分冊,2002 ,26(2):95-97.

[2]Gakiopoulou H,Korkolopoulou P,Levidou G,et al.Minichromosome maintenance proteins 2 and 5 in non-benign epithelial ovarian tumours: relationship with cell cycle regulators and prognostic implications.Br J Cancer,2007,97(8):1124-1134.

[3]Ramnath N,Hernandez FJ,Tan DF,et al.MCM2 is an independent predictor of survival in patients with non-small-cell lung cancer.Clin Oncol,2001,19(22):4259-4266.

[4]Gonzalez MA,Pinder SE,Callagy G,et al.Minichromosome maintenance protein 2 is a strong independent prognostic marker in breast cancer.J Clin Oncol,2003,21(23):4306-4313.

[5]Athanassiadou AM,Patsouris E,Tsipis A,et al.The significance of Survivin and Nectin-4 expression in the prognosis of breast carcinoma.Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):26-33.

[6]Kobayashi Y,Yukiue H,Sasaki H,et al.Developmentally regulated expression of survivin in the human thymus.Hum Immunol,2002,63(2):101-107.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.011

2015-12-10]

163000 大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科

王鵬

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