孫　裴　高亞飛　高亞成　徐大為　彭明義　張小東　丁　亮　殷宗俊　魏建忠　李　郁

（1安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽合肥 230000；2安徽浩翔農(nóng)牧有限公司，安徽利辛 236700；3勃林格殷格翰國(guó)際貿(mào)易 （上海）有限公司，上海 200000）

美國(guó)暴發(fā)豬流行性腹瀉后的控制策略及經(jīng)驗(yàn)借鑒

孫裴1高亞飛2高亞成2徐大為3彭明義3張小東1丁亮1殷宗俊1魏建忠1李郁1

（1安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽合肥 230000；2安徽浩翔農(nóng)牧有限公司，安徽利辛 236700；3勃林格殷格翰國(guó)際貿(mào)易 （上海）有限公司，上海 200000）

2010年以來(lái)豬流行性腹瀉 （PED）在多個(gè)國(guó)家出現(xiàn)或再現(xiàn)，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文著重介紹2013年美國(guó)暴發(fā)PED后，美國(guó)農(nóng)業(yè)部調(diào)查PED暴發(fā)來(lái)源、制定主要控制策略及PED學(xué)術(shù)研究的部分成果，旨在為我國(guó)PED防控補(bǔ)充一些理論與技術(shù)依據(jù)。

美國(guó)；PED；暴發(fā)；控制；經(jīng)驗(yàn)

美國(guó)自2013年4月暴發(fā)豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，PED），迄今為止該病已在全美范圍內(nèi)迅速蔓延，并在第一年導(dǎo)致估計(jì)800萬(wàn)頭豬死亡，造成1 250萬(wàn)商品豬（占年出欄11%）的市場(chǎng)缺口，經(jīng)濟(jì)損失達(dá)9～18億美元。我國(guó)于2010年底多個(gè)省份再次流行PED，包括日本、韓國(guó)、菲律賓、泰國(guó)、越南、加拿大、墨西哥、德國(guó)、比利時(shí)、法國(guó)和葡萄牙等國(guó)出現(xiàn)或再次出現(xiàn)［1-2］。目前PED已成為全球養(yǎng)豬業(yè)一個(gè)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。疫苗的研制與使用、生物安全控制策略的制定，是當(dāng)前防制PED的研究熱點(diǎn)。本文對(duì)2013年美國(guó)暴發(fā)PED之后，美國(guó)調(diào)查研究得出的部分結(jié)果作一介紹，旨在為我國(guó)PED防控補(bǔ)充一些理論與技術(shù)依據(jù)［3-10］。

1　美國(guó)農(nóng)業(yè)部調(diào)查PEDV是怎么進(jìn)入美國(guó)的

在此僅以北卡羅來(lái)納州為例，在2013年秋季和2014年春季，北卡羅來(lái)納州有89%的豬場(chǎng)暴發(fā)了PED，在2014年秋季和2015年春季，57%的豬場(chǎng)暴發(fā)了PED，其中那些在臨床上再次暴發(fā)PED的豬場(chǎng)中有94%是以前感染過該病的豬場(chǎng)［11-12］。

美國(guó)農(nóng)業(yè)部2015年9月份發(fā)表了一份報(bào)告，名為“豬腸道冠狀病毒進(jìn)入美國(guó)的根本原因調(diào)查報(bào)告”。該報(bào)告是美國(guó)政府及其各級(jí)單位、科研院所、養(yǎng)殖場(chǎng)、各類獸醫(yī)等協(xié)作，通過細(xì)致、詳細(xì)的調(diào)查與論證，尋找豬流行性腹瀉病毒（PEDV）進(jìn)入美國(guó)的途徑。報(bào)告指出，PEDV如何進(jìn)入美國(guó)的真正途徑難以弄清，但是根據(jù)傳染性疾病發(fā)生流行的基本理論，PEDV到達(dá)美國(guó)并暴發(fā)，須要經(jīng)歷以下4個(gè)階段：①存在來(lái)自疫情國(guó)家（地區(qū)）的傳染源（污染物）。②污染物通過某種途徑進(jìn)入了美國(guó)。③到達(dá)美國(guó)后又分散到多個(gè)地方。④豬群適當(dāng)時(shí)間適當(dāng)?shù)攸c(diǎn)與這些污染物接觸并被感染。報(bào)告最終認(rèn)為，飼料污染與PEDV感染暴發(fā)有著密切聯(lián)系，雖然沒有弄清到底是飼料中哪種成分或哪個(gè)飼料生產(chǎn)商出現(xiàn)了問題。報(bào)告特別指出，一種多用途的柔軟的包裝袋，可以用來(lái)包裝幾乎各種固體的物質(zhì)或材料，如大豆、玉米、豆粕、貓糧等，當(dāng)這種包裝袋被PEDV污染后再用來(lái)包裝其他物質(zhì)，導(dǎo)致后者被污染，而這種包裝袋可以被再利用，如果沒有被正確的消毒，就可以作為重要的交叉污染介質(zhì)，從而使飼料污染變得極為可能［13］。

從傳染病傳播機(jī)制來(lái)看，人、交通工具、動(dòng)物及動(dòng)物源性產(chǎn)品、飼料或其他可能直接或間接接觸的任何載體等，都可能攜帶PEDV病原進(jìn)入美國(guó)。但是結(jié)合美國(guó)對(duì)動(dòng)物及動(dòng)物源性產(chǎn)品的進(jìn)口政策、人和交通工具的檢疫及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，最后縮小了懷疑對(duì)象，傾向于認(rèn)為包裝袋被PEDV污染后，其反復(fù)利用并沒有正確或根本未消毒導(dǎo)致包裝的飼料（原料）交叉污染，或飼料（原料）原產(chǎn)地直接被PEDV污染，從而進(jìn)口到美國(guó)后進(jìn)入養(yǎng)豬場(chǎng)，引起PED首次暴發(fā)。被豬糞污染的水，被認(rèn)為是包裝袋或飼料原料受污染的重要來(lái)源。

2　飼料可以攜帶并傳播PEDV得到證實(shí)

PEDV主要在糞便中存在，在糞便排出24天后其感染力才會(huì)下降，易感豬直接接觸帶PEDV的豬糞便是被感染的重要途徑。除此之外，2014年美國(guó)多家研究報(bào)道表明，受到PEDV污染的飼料或原料是造成PEDV長(zhǎng)距離傳播的重要可能。據(jù)報(bào)道，室溫下PEDV能在干燥的飼料中生存7天，在受潮的飼料中能存活28天，而受污染的全價(jià)飼料可以作為PED的重要傳播途徑。有飼料供應(yīng)商用PED陽(yáng)性豬場(chǎng)的飼料飼喂陰性豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)能夠在陰性豬體內(nèi)檢測(cè)到PEDV，因此我們需要提高飼料生物安全防控意識(shí)。另外注重飼料運(yùn)輸車輛生物安全也能減少病毒的傳播。為了避免飼料被污染，建議飼料在1～2天內(nèi)被用于飼喂，飼料長(zhǎng)期保存會(huì)增加被病毒污染的可能性［14］。

如何有效殺滅飼料中PEDV已成為飼料生物安全控制的一個(gè)研究熱點(diǎn)。飼料中加入化學(xué)添加劑是減輕PEDV感染的有力策略，化學(xué)添加劑包括商業(yè)甲醛、亞硫酸氫鈉、氯酸鈉、有機(jī)酸混合物、揮發(fā)油混合物和中鏈脂肪酸混合物等。有研究初步表明，一種含甲醛和丙酸的液體抗生素本是添加到豬或雞飼料中用來(lái)控制和殺滅沙門氏菌的污染，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)飼料中PEDV也有較好的殺滅效果，為養(yǎng)殖場(chǎng)飼料生物安全防控提供了新選擇。

3　弄清楚PEDV免疫、返飼與免疫應(yīng)答的關(guān)系，尋找理論與實(shí)踐依據(jù)

3.1建立腸道黏膜免疫產(chǎn)生IgA和乳汁中IgA水平是防制PEDV的重要的依據(jù)

PED的防制取決于豬群感染情況的檢測(cè)和評(píng)價(jià)其免疫保護(hù)水平。作為腸道感染性疾病，正如PED，病毒與抗體的對(duì)抗是發(fā)生在腸道（腔）里，所以此時(shí)血清中抗體水平只能間接反映機(jī)體免疫應(yīng)答情況，而糞便中的抗體水平可以直接作為腸黏膜免疫的反映，也是病毒早期感染監(jiān)控和評(píng)估免疫效果的有效工具。美國(guó)愛荷華州立大學(xué)Gimenez研究結(jié)果得出，豬群被PEDV感染后，唾液和糞便都能夠排毒；血清、唾液、糞便中都可以檢測(cè)到IgG和IgA抗體，血清中IgG水平明顯要高于IgA，而唾液和糞便中，IgA水平明顯高于IgG。研究結(jié)果提示，IgA抗體水平的監(jiān)測(cè)是PEDV早期感染和免疫效果評(píng)價(jià)的重要手段，而在今后研究中，建立腸道黏膜免疫產(chǎn)生IgA和乳汁中IgA水平是防制PEDV的重要依據(jù)［15］。

3.2返飼

大家較為熟悉的返飼的技術(shù)原理及操作方法，簡(jiǎn)單敘述便是：取PED發(fā)病或糞便陽(yáng)性豬的糞便給母豬進(jìn)行返飼，可以有效刺激機(jī)體免疫應(yīng)答和乳汁中IgA水平，從而通過初乳將中和抗體傳遞給仔豬起到很好的保護(hù)作用。然而返飼也存在一個(gè)最大的隱患，那就是人為地使病毒容易持續(xù)存在于豬群中，隨時(shí)給豬群帶來(lái)新一輪PED暴發(fā)的可能。

3.3疫苗免疫

迄今為止，美國(guó)尚無(wú)商品化的PEDV減毒活苗，僅有滅活苗可供選擇。近年來(lái)我國(guó)養(yǎng)豬企業(yè)在PEDV滅活苗使用實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖單位使用滅活苗免疫效果表現(xiàn)的可能不一樣，甚至效果不確切。下面介紹一組美國(guó)學(xué)者使用滅活苗免疫和對(duì)照組得出的免疫效果試驗(yàn)數(shù)據(jù)［16］。

該研究選擇了32頭距離預(yù)產(chǎn)期還有6周的懷孕母豬，其中16頭曾經(jīng)感染過PEDV但是現(xiàn)在血清和糞便中都再?zèng)]有PEDV。另外16頭是PEDV和抗體雙陰性豬。根據(jù)是否免疫疫苗，32頭豬分為4組，即感染過PEDV并免疫疫苗組（PE.I）、感染過PEDV但不免疫疫苗組（PE.NI）、PEDV陰性豬并免疫疫苗組（NC.I）和PEDV陰性豬但不疫苗免疫組（NC.NI）。產(chǎn)前第5周和第2周分別對(duì)免疫組進(jìn)行PED滅活疫苗的免疫。通過產(chǎn)前產(chǎn)后母豬血清和乳汁中IgG、IgA抗體檢測(cè)，及新生仔豬PEDV人工攻毒保護(hù)性試驗(yàn)，得出以下的結(jié)果。

⑴IgG結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，自然感染PEDV和陰性豬群接種PEDV疫苗后，均可以刺激母豬血清和乳汁中IgG抗體高滴度的產(chǎn)生。

⑵IgA濃度與IgG應(yīng)答無(wú)太大關(guān)系。①感染過PEDV的母豬，不論是否免疫疫苗，其血清和乳汁中都有很高濃度的IgA，但是注射疫苗組的IgA水平更高。②陰性豬群注射疫苗組檢測(cè)出的IgA濃度很低，而陰性豬群非注射疫苗組未檢測(cè)到IgA。

⑶豬血清與初乳中的IgG抗體水平相近，初乳可以有效傳遞高抗體濃度的IgG和IgA給仔豬。并從哺乳第2天開始到第9天，兩種抗體濃度逐漸降低。

⑷IgA水平的高低具有特別意義，因?yàn)镮gA水平的高低與對(duì)抗黏膜致病菌（病毒株）的感染密切相關(guān)。在這項(xiàng)研究中，乳汁中IgA水平的高低能夠顯著影響哺乳仔豬死亡率的高低。感染過PEDV的母豬，其初乳中有很高濃度的IgA抗體，可以有效幫助其所產(chǎn)仔豬抵抗PEDV的感染，有的仔豬雖然表現(xiàn)出溫和的臨床癥狀，但沒有出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象。相反的是，來(lái)自于陰性母豬的所有豬群，無(wú)論注射疫苗與否，所產(chǎn)仔豬攻毒后均發(fā)病，死亡率100%。陰性豬群注射疫苗組與陰性豬群非注射疫苗組相比，注射疫苗組可以推遲仔豬的發(fā)病日齡，但是很快也會(huì)發(fā)病和死亡。

在這項(xiàng)研究中，陰性豬群注射疫苗組注射疫苗之后并沒有誘導(dǎo)產(chǎn)生被動(dòng)免疫形式的IgA，以用來(lái)降低或消除仔豬斷奶前死亡率。該研究發(fā)現(xiàn)支持了這樣一個(gè)假設(shè)，即當(dāng)面對(duì)PEDV的挑戰(zhàn)時(shí)，持續(xù)適當(dāng)?shù)財(cái)z入高水平的IgA對(duì)于仔豬存活是非常重要的。要使母豬接種PEDV疫苗之后有效地保護(hù)PEDV挑戰(zhàn)下的陰性仔豬可能需要刺激乳汁產(chǎn)生較高濃度的IgA抗體。

4　病毒混合感染仍然存在，確診可以提升PEDV防控效果

據(jù)PIC報(bào)道，他們?cè)诒泵赖挠N體系，多年來(lái)很少受到PRRSV和豬肺炎支原體兩個(gè)重要豬病的感染。但是卻在2013年11月至2014年4月，體系內(nèi)47.4%的種豬受到了豬腸道冠狀病毒病的影響，其中PEDV單一感染占26.4%，PDCoV單一感染占10.5%，兩者共同感染占10.5%。另外，我國(guó)近年來(lái)調(diào)查研究也發(fā)現(xiàn)，PEDV、TEGV、PCV2、PRV等病原混合感染情況也較為常見，所以只有確診PEDV為主兇的疫情，制定針對(duì)性防制方案才能取得較好的預(yù)防與控制效果［17］。

事實(shí)證明，任何單一方法無(wú)法有效防制PED的發(fā)生或流行。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外多個(gè)國(guó)家或地區(qū)，甚至同一個(gè)地區(qū)或養(yǎng)殖場(chǎng)，PED可以反復(fù)暴發(fā)和流行，給養(yǎng)殖戶造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。從本文介紹的美國(guó)調(diào)查PEDV進(jìn)入美國(guó)的根本途徑及得出包裝袋、飼料可以攜帶PEDV并造成傳播的結(jié)論，再次表明了生物安全防控對(duì)PED防制的重要性，及一旦發(fā)生PED后如何快速有效對(duì)疫病進(jìn)行溯源，可為PED生物安全控制方案的制定提供依據(jù)。疫苗免疫是動(dòng)物傳染病防制的重要技術(shù)和手段。本文較為詳細(xì)的介紹了返飼、疫苗免疫及PED免疫應(yīng)答之間的關(guān)系，并得出結(jié)論：如何有效提升乳汁中IgA抗體水平，是除了生物安全防控之外的一個(gè)為哺乳仔豬提供堅(jiān)強(qiáng)保護(hù)的重要手段。新型、有效的PEDV疫苗研發(fā)是非常必要的，也會(huì)成為PED防制的研究熱點(diǎn)。

［1］Paarlberg PL.Updated estimated economic welfare impacts of porcine epidemic diarrhea virus（PEDV）［EB/OL］.http://ageconsearch. umn.edu/bitstream/174517/14-4.updated%20estimated%20Economic% 20Welfare%20Impacts%20of%20PEDV.pdf.

［2］Grasland B，Bigault L，Bernard C，et al.Complete genome sequence of a porcine epidemic diarrhea s gene indel strain isolated in france in december 2014［J］.Genome Announcements，2015，3（3）: e00535-15.

［3］Mesquita JR，Honing HVD，Almeida A，et al.Outbreak ofporcine epidemic diarrhea virus in portugal，2015［J］.Transboundary and Emerging Diseases，2015，62（6）:586-588.

［4］Pasick J，Berhane Y，Ojkic D，et al.Investigation into the role of potentially contaminated feed as a source of the frst-detected outbreaks of porcine epidemic diarrhea in Canada［J］.Transboundary and Emerging Diseases，2014，61（5）:397-410.

［5］Puranaveja S，Poolperm P，Lertwatcharasarakul P，et al.Chinese-like strain of porcine epidemic diarrhea virus，Thailand.［J］.Emerging Infectious Diseases，2009，15（7）:1112-1115.

［6］Song D，Park B.Porcine epidemic diarrhoea virus:a comprehensive review of molecular epidemiology，diagnosis，and vaccines［J］. Virus Genes，2012，44（2）:167-175.

［7］Vui D T，Thanh T L，Tung N，et al.Complete genome characterization of porcine epidemic diarrhea virus in Vietnam［J］.Archives of Virology，2015，160（8）:1931-1938.

［8］Stadler J，Zoels S，F(xiàn)ux R，et al.Emergence of porcine epidemic diarrhea virus in southern Germany［J］.BMC Veterinary Research，2015，11:142.

［9］Theuns S，Concei？？o-Neto N，Christiaens I，et al.Complete genome sequence of a porcine epidemic diarrhea virus from a novel outbreak in belgium，january 2015［J］.Genome Announcements，2015，3（3）: e00506-15.

［10］Vlasova AN，Marthaler D，Wang Q，et al.Distinct characteristics and complex evolution of PEDV strains，North America，May 2013-February 2014.［J］.Emerging Infectious Diseases，2014，20（10）:1620-1628.

［11］American Association of Swine Veterinarians and National Pork Producers Council.Swine health producer guide:how to verify PEDV-Negative status afer the virus is eliminated on a Farm Des Moines，Iowa:National Pork Board；2014.

［12］Hough S.Experience with PEDV in North Carolina［EB/OL］. https://www.aasv.org/library/swineinfo/Content/AASV/2016/358_Hough. pdf.

［13］USDA-Animal and Plant Health Inspection Services.Swine Enteric Coronavirus Introduction to the United States:Root Cause Investigation Report［EB/OL］.https://www.aphis.usda.gov/animal_health/animal_dis_spec/swine/downloads/secd_final_report.pdf.

［14］Dee S，Clement T，Schelkopf A，et al.An evaluation of contaminated complete feed as a vehicle for porcine epidemic diarrhea virus infection of na？ve pigs following consumption via natural feeding behavior:proof of concept［J］.BMC Veterinary Research，2014，10（1）:1-9.

［15］Bjustrom-Kraft J，Woodard K，Giménez-Lirola L，et al. Porcine epidemic diarrhea virus（PEDV）detection and antibody response in commercial growing pigs［J］.BMC Veterinary Research，2016，12（1）:1-8.

［16］Schwartz TJ，Rademacher CJ，Gimenez-Lirola LG，et al.Evaluation of the efects of PEDV vaccine on PEDV naive and previously PEDV exposed sows in a challenge model comparing immune response and preweaning mortality［EB/OL］.https://www.aasv.org/foundation/research/Schwartz_QReport_2015_12.pdf.

［17］Cano JP，Riek T，Tompson R，et al.Descriptive study of swine enteric coronavirus disease（SECD）elimination and prevention in a genetic multiplication system in North America［EB/OL］.https://www.aasv. org/library/swineinfo/Content/AASV/2016/107_Cano.pdf.

S858.28（712）

A

1673-4645（2016）09-0068-04

2016-06-13

基金支持：安徽省115產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系；安徽省畜禽產(chǎn)業(yè)共性技術(shù)研究院